半抗原-载体蛋白偶联物的三种电泳鉴定方法

【目的】建立一种简单方便的半抗原-载体蛋白偶联物电泳鉴定方法。【方法】选用SDS-PAGE、非变性琼脂糖凝胶电泳、高效毛细管区带电泳3种方法对载体蛋白、偶联剂变性的载体蛋白、半抗原-载体蛋白进行比较鉴定,同时与光谱法结果比较。【结果】对分子量差异较小的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,SDS-PAGE不能有效分辨;但偶联前后载体电荷有变化时,非变性琼脂糖凝胶电泳却能有效分辨游离的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,相对SDS-PAGE表现出更高的分辨灵敏度;毛细管区带电泳能高效分辨载体和半抗原-载体蛋白偶联物,结果直观,但需较贵重的专用仪器。琼脂糖电泳和毛细管电泳法与可见-紫外光谱法鉴定结果一致。【结论】3种电泳方法各有优缺点,非变性凝胶电泳简便、廉价、有效,较适合普通实验室使用。

琼脂糖自组装膜基底型免疫芯片载体制备及抗体固定研究

目的:建立具有三维水凝胶结构的琼脂糖自组装膜载体的制备方法,提高免疫芯片对抗体的固定效率。方法:以玻片为载体,采用琼脂糖、高碘酸钠对玻片表面进行修饰,制备琼脂糖自组装膜载体。利用SEM、AFM和FTIR对载体进行表征,获得最佳制备条件。利用荧光显微成像及Image J软件,研究该载体对2种不同种属来源抗体的固定效率,比较琼脂糖自组装膜载体和普通醛基修饰载体对抗体的固定效果。结果:制备的琼脂糖自组装膜载体表面均匀、致密,这种结构比表面积大、抗体固定效率高。制备载体的最佳琼脂糖浓度为1.0%,其固定抗体的最佳浓度为0.3~0.4 mg/ml,琼脂糖自组装膜载体的荧光强度是普通醛基载体的3.94倍。结论:琼脂糖自组装膜是一种理想的固定抗体分子的表面修饰方法,有望用于免疫芯片载体的制备。

非病毒基因载体聚乙二醇-聚乙烯亚胺的合成及其结合DNA能力的研究

以IPDI为偶联剂,合成了PEG-PEI接枝共聚物,用FT-IR、1HNMR对共聚产物进行结构表征确认,通过1H NMR计算出共聚物的分子量,并通过琼脂糖凝胶电泳试验考察共聚物与DNA的结合能力。结果表明,成功合成了PEG-PEI共聚物,当PEG接枝量为10%、25%时,PEG-PEI结合DNA的能力没有受到明显影响;当PEG接枝量为50%时,PEG-PEI结合DNA的能力有所下降。

pH值响应性羧甲基琼脂糖-聚多巴胺水凝胶制备及缓释性能

开发一种pH值响应性羧甲基琼脂糖-聚多巴胺(carboxymethyl agarose-polydopamine,CMA-PDA)水凝胶载体。通过氯乙酸取代法合成了CMA。采用红外光谱、核磁共振、电子显微镜和热重分析对CMA的理化性质进行表征。进一步通过冷凝方法制备CMA-PDA水凝胶,系统研究CMA-PDA水凝胶的流变性能和质构性能进行表征。结果表明,PDA的加入提高了水凝胶的凝胶强度、硬度和黏弹性。以阿霉素为模型,研究该水凝胶在pH 2.0、6.2、6.8、7.4条件下的释放行为,表明其具有较好的pH值响应性,pH 2.0条件下的释放率显著高于其他条件。同时以L929细胞为模型,研究该水凝胶的生物相容性,表明其无明显细胞毒性。这项研究证明了CMA-PDA水凝胶生物相容性良好,具有pH值响应性和缓释性能,可以作为潜在的生物活性物质递送载体。

Non-viral gene delivery carrier of probe ty[pe host molecule--Interactions between DNA and β-cyclodextrin derivative complexes(I)

A host type non-virus gene delivery car- rier, phenanthroline-β-cyclodextrin derivative host molecule, was produced which can be used as mo- lecular probe. Interactions between DZY-1 and DNA were investigated by electrophoresis assay. Hind III enzyme inhibition assay was carried out using DNA condensates induced by host molecules or host- guest molecule complexes to explore their ability to inhibit enzyme digestion. Micro-structure of DNA condensates induced by host molecules and host-guest molecule complexes was observed by scanning electron microscope (SEM). Our work in- dicates the delivery mechanism of DZY-1 used as a gene delivery carrier and also provides a method to design and produce non-virus gene delivery carriers.

小分子靶向肽修饰壳聚糖作为基因载体的研究

目的:将小分子靶向肽RGD(Arg-Gly-Asp)偶联到壳聚糖(CS)上,并包载质粒DNA(pDNA),制成一种具有靶向性的壳聚糖载基因纳米粒。方法:将RGD肽上的羧基和CS上的氨基通过酰化反应发生偶联,运用红外(FT-IR)和元素分析对RGD偶联壳聚糖(CS-RGD)的化学结构进行确证;采用复凝聚法制备CS-RGD/pDNA纳米粒(CS-RGD/pDNA);应用凝胶阻滞实验和DNA酶(DNase I)降解实验考察CS-RGD对pDNA的复合和保护能力;通过激光粒度仪和原子力显微镜对纳米粒的粒径分布和形态进行考察。结果:CS和RGD肽通过酰胺键偶联;CS-RGD/pDNA在N/P≥2时完全复合,在N/P≥4时具有抗DNase I酶降解能力,N/P=2～30的CS-RGD/pDNA复合物粒径在90～260 nm之间,Zeta电位在4～39 mV之间,原子力显微镜结果证明复合物为类球形且分布良好。具有良好的稳定性和易于进入细胞的性质。结论:CS-RGD是一种制备工艺简单,具有应用前景的非病毒基因载体。