尖吻蝮蛇蛇毒纤溶酶的分离纯化及氨基酸序列测定

目的:从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化出高纯度的纤溶酶并对其进行初步性质研究和氨基酸序列分析。方法:采用DEAE-Sepharose FF离子交换和两次Superdex75PG凝胶过滤,从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出可直接溶解纤维蛋白原的蛋白酶。结果:分离到的纤溶酶相对分子质量为25kD,HPLC分析纯度在97%以上,氨基酸序列分析其N末端为MSTEF QRYME IVVNHS MVKKY NGDSD KIKAW。结论:采用此工艺可从尖吻蛇毒中分离出高比活的纤溶酶,为进一步研究其药理作用奠定了基础。

五步蛇蛇毒类凝血酶的分离和纯化

用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５柱层析，从五步蛇粗毒中分离纯化出一种促凝组分（类凝血酶），并对其纯度和促凝活性作鉴定。

五步蛇毒降纤酶的快速分离与纯化

目的 建立快速分离纯化降纤酶工艺方法适合于规模化生产。 方法 以五步蛇毒为原料 ,采用 EDTA络合—硫氰酸钾沉淀初步分离与快速离子交换和凝胶层析纯化相结合 ,分离纯化出符合新部颁标准的降纤酶成分。 结果 经初步分离五步蛇粗毒可使出血毒去除 92 % ,非类凝血酶 ( TLE)成分去除65.1 7% ,TLE活性回收保持 92 .68%以上。层析组份中至少含有 4种 TLE,其中 1种为降纤酶成分。初步化学分离 ,离子交换柱层析和凝胶过滤制得的降纤酶 ,其比活性大于 1 2 0 0 Bu/mg蛋白 ,达 1 50 3Bu/mg蛋白 ;每克五步蛇毒干粉可收获降纤酶 2 998.1 1 6Bu;纯度达到 SDS-PAGE电泳只在标准蛋白质分子量360 0 0 Da附近呈现单一电泳区带 ;HPLC单一峰。 结论 建立了快速分离纯化降纤酶工艺方法 ,快速高效 。

尖吻蝮蛇毒38k凝血酶样酶的分离纯化工艺

建立从尖吻蝮蛇毒中分离纯化38k凝血酶样酶的生产工艺,利用离子交换和凝胶过滤技术,中间品加入巯基乙醇处理后,再利用凝胶过滤技术除去性质相近的杂蛋白,获得的38k凝血酶样酶HPLC纯度达99.93%,比活力达4416U/mg,出血毒试验800U/ml无出血,所建立的分离纯化方法适合规模生产。

蕲蛇毒中抑制ACE活性组分的分离纯化与表征

蕲蛇粗毒流经强阴离子交换色谱POROS 2 0HQ柱 ,经毛细管电泳仪检测 ,5个蛋白峰具有ACE抑制活性 ,对最强的活性峰进行PAGE切割电泳的分离 ,得到 3条带 ,经检测只有第三条带 (AI - 3)具有ACE抑制活性 .该组分的分子量为 2 0 2 0 0 (非还原 ) ,加DTT处理后 ,分子量为 2 590 0 .其IC50 为 0 .10mmol/L .