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黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白AGO2多克隆抗体制备及应用
被引量:
2
1
作者
李歌
董旭
+2 位作者
危婉婷
叶彦杰
兰汉红
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第7期1483-1488,共6页
【目的】制备效价高且特异性强的黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白Argonaute 2(AGO2)多克隆抗体,为进一步研究AGO2蛋白在叶蝉RNAi免疫途径中的调控功能及作用机制提供技术支持。【方法】通过RT-PCR从黑尾叶蝉基因组扩增出AGO2基因的功能片段,...
【目的】制备效价高且特异性强的黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白Argonaute 2(AGO2)多克隆抗体,为进一步研究AGO2蛋白在叶蝉RNAi免疫途径中的调控功能及作用机制提供技术支持。【方法】通过RT-PCR从黑尾叶蝉基因组扩增出AGO2基因的功能片段,与原核表达质粒pET-28a重组构建重组质粒,然后转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达;以纯化的AGO2融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔获得高效价的多克隆抗体,并以多克隆抗体为一抗,采用Western blotting检测AGO2蛋白在健康和带毒黑尾叶蝉中的表达情况。【结果】RT-PCR扩增获得的黑尾叶蝉AGO2基因片段为1635 bp,构建的pET-AGO2重组质粒能在BL21感受态细胞中成功表达出AGO2融合蛋白,其最适表达条件:温度28℃,IPTG浓度0.5 mmol/L,诱导时间5 h,摇床转速220 r/min。以纯化AGO2融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔获得的多克隆抗体效价为1∶106,抗体浓度约350μg/mL。Western blotting检测结果表明,AGO2蛋白在健康和水稻矮缩病毒(RDV)感染黑尾叶蝉中均有表达,但与健康黑尾叶蝉相比,AGO2蛋白在RDV感染黑尾叶蝉中的表达水平更高,即RDV侵染能提高AGO2蛋白的表达水平。【结论】制备获得的黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白AGO2多克隆抗体具有高纯度和高效价,且特异性强,可用于检测AGO2蛋白在病毒感染黑尾叶蝉中的表达水平,进而揭示AGO2蛋白在介体昆虫RNAi途径中的功能机制。
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关键词
水稻矮缩病毒(RDV)
黑尾叶蝉
RNAI
ago2蛋白
多克隆抗体
效价
下载PDF
职称材料
抑制丙肝病毒复制和转录的一种新方法
2
作者
端爱萍
宁利敏
+4 位作者
李超
侯亚菲
杨娜娜
孙丽洲
李根喜
《中国科学:生命科学》
CSCD
北大核心
2013年第6期473-477,共5页
丙肝病毒是一种正链RNA病毒,它是导致人类肝脏疾病的重要因素.本研究中,通过引入一段体外的RNA,使其与丙肝病毒基因组、miR-122三者碱基互补配对,从而激活Ago2蛋白的内切酶活性,导致HCV基因组被切割,进而从其与Ago2蛋白和miR-122所形成...
丙肝病毒是一种正链RNA病毒,它是导致人类肝脏疾病的重要因素.本研究中,通过引入一段体外的RNA,使其与丙肝病毒基因组、miR-122三者碱基互补配对,从而激活Ago2蛋白的内切酶活性,导致HCV基因组被切割,进而从其与Ago2蛋白和miR-122所形成的复合物中释放出来.由于失去了Ago2蛋白和miR-122的保护作用,释放出来的HCV基因组很容易被降解,因而可有效抑制其复制和转录.该研究为抑制HCV的复制和转录提供了新的思路,对于丙肝的治疗将具有意义.
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关键词
丙肝病毒
复制和转录
ago2蛋白
电化学分析
生物传感器
原文传递
题名
黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白AGO2多克隆抗体制备及应用
被引量:
2
1
作者
李歌
董旭
危婉婷
叶彦杰
兰汉红
机构
闽南师范大学教育科学学院
闽南师范大学生物科学与技术学院
出处
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第7期1483-1488,共6页
基金
国家自然科学基金项目(31601613)
福建省自然科学基金面上项目(2018J01465)
+1 种基金
福建省高校杰出青年科研人才培育计划项目(2017)
闽南师范大学博士启动基金项目(2006L21607)
文摘
【目的】制备效价高且特异性强的黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白Argonaute 2(AGO2)多克隆抗体,为进一步研究AGO2蛋白在叶蝉RNAi免疫途径中的调控功能及作用机制提供技术支持。【方法】通过RT-PCR从黑尾叶蝉基因组扩增出AGO2基因的功能片段,与原核表达质粒pET-28a重组构建重组质粒,然后转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达;以纯化的AGO2融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔获得高效价的多克隆抗体,并以多克隆抗体为一抗,采用Western blotting检测AGO2蛋白在健康和带毒黑尾叶蝉中的表达情况。【结果】RT-PCR扩增获得的黑尾叶蝉AGO2基因片段为1635 bp,构建的pET-AGO2重组质粒能在BL21感受态细胞中成功表达出AGO2融合蛋白,其最适表达条件:温度28℃,IPTG浓度0.5 mmol/L,诱导时间5 h,摇床转速220 r/min。以纯化AGO2融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔获得的多克隆抗体效价为1∶106,抗体浓度约350μg/mL。Western blotting检测结果表明,AGO2蛋白在健康和水稻矮缩病毒(RDV)感染黑尾叶蝉中均有表达,但与健康黑尾叶蝉相比,AGO2蛋白在RDV感染黑尾叶蝉中的表达水平更高,即RDV侵染能提高AGO2蛋白的表达水平。【结论】制备获得的黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白AGO2多克隆抗体具有高纯度和高效价,且特异性强,可用于检测AGO2蛋白在病毒感染黑尾叶蝉中的表达水平,进而揭示AGO2蛋白在介体昆虫RNAi途径中的功能机制。
关键词
水稻矮缩病毒(RDV)
黑尾叶蝉
RNAI
ago2蛋白
多克隆抗体
效价
Keywords
rice dwarf virus(RDV)
Nephotetlix cincticeps
RNAi
ago
2
protein
polyclonal antibody
titer
分类号
S435.112.9 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
抑制丙肝病毒复制和转录的一种新方法
2
作者
端爱萍
宁利敏
李超
侯亚菲
杨娜娜
孙丽洲
李根喜
机构
南京大学生命科学学院
上海大学生命科学学院
南京医科大学附属第一医院妇产科
出处
《中国科学:生命科学》
CSCD
北大核心
2013年第6期473-477,共5页
基金
国家杰出青年科学基金(批准号:20925520)
国家自然科学基金重点项目(批准号:21235003)
上海市教委重点学科建设项目(批准号:J50108)资助
文摘
丙肝病毒是一种正链RNA病毒,它是导致人类肝脏疾病的重要因素.本研究中,通过引入一段体外的RNA,使其与丙肝病毒基因组、miR-122三者碱基互补配对,从而激活Ago2蛋白的内切酶活性,导致HCV基因组被切割,进而从其与Ago2蛋白和miR-122所形成的复合物中释放出来.由于失去了Ago2蛋白和miR-122的保护作用,释放出来的HCV基因组很容易被降解,因而可有效抑制其复制和转录.该研究为抑制HCV的复制和转录提供了新的思路,对于丙肝的治疗将具有意义.
关键词
丙肝病毒
复制和转录
ago2蛋白
电化学分析
生物传感器
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
黑尾叶蝉RNAi途径关键蛋白AGO2多克隆抗体制备及应用
李歌
董旭
危婉婷
叶彦杰
兰汉红
《南方农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
2
下载PDF
职称材料
2
抑制丙肝病毒复制和转录的一种新方法
端爱萍
宁利敏
李超
侯亚菲
杨娜娜
孙丽洲
李根喜
《中国科学:生命科学》
CSCD
北大核心
2013
0
原文传递
已选择
0
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