楚雄地区黄龙尾(Agrimonia pilosa var.nepalensis)内生菌的分离及初步鉴定

从野生黄龙尾健康植株内分离得到的29株内生菌中,8株细菌全部为杆菌,有4株产芽孢;10株放线菌,都属于链霉菌属(Streptomyces sp.);11株真菌,其中7株为镰刀菌属(Fusarium sp.)、2株为炭疽菌属(Colletotrichum sp.)、1株为青霉属(Penicillium sp.)、1株为黑曲霉(Aspergillus niger)。生长特性实验结果表明,所有供试菌株的最适生长NaCl浓度范围在3%-5%之间,最适生长pH范围在6.0~8.0之间,最适生长温度在20℃~35℃之间,细菌的生长温度范围比放线菌的更为广泛。在生理生化特性实验中,供试菌株B-3-5-4对碳源、氮源的利用范围广,菌株B-3-1-6对碳源、氮源的利用范围窄。研究结果表明,黄龙尾不同组织内部分布着不同类群的内生菌群。本研究可为黄龙尾的进一步开发提供数据支持。

Comparison of Agrimophol Content in Agrimonia pilosa Ledeb. from Luzhou at Different Harvest Time

[ Objectives] This study was conducted to compare agrimophol contentsin Agrimonia pilosa Ledeb. at different harvest time, so as to select its best harvest time. [Methods] High performance liquid chromatography was used for the determination of agfmophol in A. pilosa Ledeb. at different harvest time in Luzhou. [ Results ] The content of agrimophol could be detected by HPLC. Agrimophol had good linearity in 0.01 - 0.1 mg/ml （ r = 0.999 9 ）, the average recov- ery was 101.5%, and RSD was 1.10%. The content of agrimophol in A. pilosa Ledeb. in Luzhou was 0.010 8% in June, and 0.013 1% in July, much higher than any other months. [ Conclusions] This experiment established a method for detecting the content of agrimophol by HPLC, which is simple, with high precision, high accuracy, good repeatability and recovery. The reasonable harvest time of A. pilosa Ledeb. in Luzhou is June and July.

Development of Granule Composition Based on the Total Evaporated Extract of Bidens Tripartita, Solidago Canadensis and Agrimonia Eupatoria Herbs

The aim of the study is the development and standardization of granules in hard gelatin capsules based on the composition of dry extracts of Bidens tripartita L.,Solidago canadensis L.and Agrimonia eupatoria L.Herbs,possessing nephroprotective activity and antifibrotics in toxic nephropathies.Developed the structure and defined the quality indicators of the pellets with dry extracts of Bidens tripartita L.,Solidago canadensis L.and Agrimonia eupatoria L.herbs.The quality specification for the drug-granules of the composition of dry extracts in solid gelatin capsules is developed.

Analysis and Assessment of Agrimonia Pilosa Ledeb from Different Sources Using FT-IR Spectroscopy

To get the IR spectrums of Agrimonia Pilosa Ledeb(APL)from China and Japan areas,and to find out the characters of IR spectrums through the content of different chemical constituents,to provide a fast and effective analysis method monitor the inherent qualities of traditional Chinese medicine-APL.Fourier Transform Infrared Spectroscopy(FT-IR)was applied to detect sample of APL from China and Japan areas.This study showed that the IR spectra of APL from China and Japan areas have their unique IR fingerprint features.The contents of tannin and calcium phosphate in APL from China is different APL from Japan.So FT-IR is a very quick,effective and well repetitive method for monitoring and distinguishing the traditional Chinese medicine.

基于网络药理学探讨仙鹤草治疗慢性疲劳综合征作用机制

目的 采用网络药理学方法研究仙鹤草治疗慢性疲劳综合征潜在作用机制。方法 通过SymMap、HERB数据库获取仙鹤草化学成分和潜在靶点,通过DisGeNET数据库获取慢性疲劳综合征疾病靶点,将化学成分对应靶点与疾病相关靶点去重后获得交集靶点,采用Cytoscape3.9.1软件绘制仙鹤草-化学成分-交集靶点网络,采用STRING数据库并结合Cytoscape3.9.1软件绘制交集靶点相互作用图,DAVID数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析,采用CB-Dock平台对关键成分及核心靶点进行分子对接。结果 获得仙鹤草化学成分21个,潜在靶点360个,慢性疲劳综合征相关靶点118个,仙鹤草和慢性疲劳综合征交集靶点22个。GO功能和KEGG通路富集分析显示,仙鹤草调节慢性疲劳综合征涉及181个生物过程、9个细胞组分、10个分子功能及58条信号通路。分子对接结果表明,槲皮素、蛇床子素、木犀草素、β-谷甾醇与核心靶点IL1B、IL6、TNF、PTGS2有一定结合力。结论 仙鹤草抗慢性疲劳综合征可能通过蛇床子素、β-谷甾醇、山柰酚、槲皮素、木犀草素等成分,作用于IL1B、IL6、TNF等靶点,作用机制有调节炎症及免疫反应、改善肠道免疫网络及作用于糖尿病和癌症相关通路等。

仙鹤草HPLC指纹图谱建立及化学计量学分析

目的建立仙鹤草的HPLC指纹图谱,并结合化学计量学分析评价不同产地的仙鹤草药材整体质量。方法采用YMC-Pack ODS-A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 ml/min,柱温30℃,检测波长270 nm;进样量10μl。建立HPLC指纹图谱并进行相似度评价,结合聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)对15批样品进行分析。结果HPLC指纹图谱共标定14个共有峰,指认4个成分,分别为1号峰没食子酸,4号峰儿茶素,8号峰鞣花酸,10号峰槲皮苷;15批仙鹤草指纹图谱相似度0.778~0.978,表明不同产地仙鹤草质量存在差异,经CA、PCA分析样品分为两类,结合PLS-DA筛选出6个差异标志物。结论不同来源的仙鹤草药材存在一定的质量差异。通过指纹图谱、聚类分析、主成分分析及偏最小二乘法判别分析等方法相结合可全面地评价仙鹤草的质量,此方法的建立可以为仙鹤草的质量控制、产品评价提供一定参考依据。

仙鹤草总黄酮和浸膏提取及其颗粒成型工艺研究

优选仙鹤草总黄酮和浸膏提取及其颗粒成型工艺。采用正交试验,以总黄酮和浸膏提取率的评分之和作为判断指标优选仙鹤草的提取工艺,以吸湿率和成型率评分之和作为判断指标优选仙鹤草颗粒成型工艺。优选的提取工艺为:70%的乙醇、20倍液料比(m L/g),加热回流提取2次,每次120 min;优选的颗粒制备工艺为:使用混合辅料湿法制粒,其中混合辅料甘露醇和乳糖的比例为2:1,浸膏粉和混合辅料的比例为1:4,润湿剂乙醇体积分数为85%。本工艺稳定可行,可以用于仙鹤草总黄酮和浸膏提取及其颗粒的制备。

基于网络药理学及药理实验验证探讨仙鹤草抗肝纤维化的作用机制

目的:探究仙鹤草抗肝纤维化的作用机制。方法:根据多种规则筛选仙鹤草化学成分,预测获得靶基因,与肝纤维化发病机制相关的靶点进行比对获得仙鹤草抗肝纤维化的可能作用靶点。通过生物学信息注释库DAVID对关联靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析,采用Cytoscape构建仙鹤草化合物-靶点-信号通路相互作用网络图。进一步采用实验验证仙鹤草对大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6)肝纤维化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原1型α1(COL1A1)及蛋白激酶B(AKT)蛋白磷酸化的影响。结果:关键靶点主要为AKT1、STAT3、Caspase-3、Jun、ESR1等,主要参与调控肿瘤信号通路、PI3K/AKT信号通路、肿瘤蛋白聚糖、胰岛素抵抗和FoxO信号通路等。仙鹤草提取物可抑制HSC-T6中α-SMA、COL1A1蛋白的表达,升高AKT的磷酸化水平,验证了网络药理学分析的部分预测结果。结论:仙鹤草可通过作用于PI3K/AKT信号通路等发挥抗肝纤维化作用。

基于网络药理学探索仙鹤草治疗肺癌的分子机制

目的仙鹤草在临床上被广泛应用于治疗肺癌,但其作用机制及靶点尚不明确。本文基于网络药理学的研究思路和细胞实验以初步验证仙鹤草治疗肺癌的作用机制。方法利用Swiss Target Prediction数据库对仙鹤草的靶点进行预测,从DisGeNET中找到肺癌的致病靶点,药物和疾病的靶点相互映射,得到仙鹤草治疗肺癌的潜在靶点。使用Cytoscape 3.9.1构建“仙鹤草-成分-靶点”网络和蛋白质-蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction,PPI)。使用OmicShare平台对交集靶点进行GO和KEGG信号通路富集分析,通过Autodock Vina软件进行分子对接。从上述分析结果中筛选出富集通路及关键靶点进行细胞实验。通过CCK-8法观察不同浓度仙鹤草水提取物对肺癌A549细胞生长的抑制作用,通过Western blot法观察其对关键靶点蛋白表达的影响。结果分析结果提示共获得20个活性成分以及96个潜在治疗肺癌的靶点,其中5个核心靶点分别是AKT1、SRC、EGFR、CCND1、ESR1。潜在治疗的靶点主要富集在PI3K/AKT及FOXO等信号通路。体外实验表明,仙鹤草水提取物对A549细胞有抑制作用且呈浓度依赖性,而Western blot结果发现仙鹤草可不同程度降低A549细胞中PI3K、AKT1、FOXO3A的表达量。结论应用网络药理学可预测仙鹤草治疗肺癌的分子机制,细胞实验发现其可以抑制肺癌A549细胞的生长,并通过抑制PI3K/AKT/FOXO3A信号通路中关键蛋白来发挥调控A549细胞生长的作用。

仙鹤草茎与叶的代谢组学比较分析

目的:通过代谢组学分析仙鹤草茎与叶中代谢物及其代谢通路差异,进一步阐明仙鹤草药效物质基础,促进仙鹤草合理开发利用。方法:取仙鹤草茎、叶新鲜样本,经液氮冷冻后提取代谢物,采用液相色谱-质谱法检测,所得数据运用统计学方法分析并与数据库比对鉴定。结果:筛选并鉴定出105个具有明显差异的代谢物,其中茎与叶相比有34个代谢物上调、71个代谢物下调。差异代谢物共注释到62条代谢通路中。茎中叶黄素、天冬酰胺、胍丁胺及多种氨基酸等物质含量更高,氨基酸代谢更强;叶中酚酸类、黄酮类物质积累更为丰富,次生代谢更强。结论:仙鹤草茎与叶均含有丰富的药效活性成分,但叶的次生代谢更强,次生代谢物积累更为丰富,此差异或可为仙鹤草针对性开发利用提供参考。

中药仙鹤草中异香豆素类化合物抗炎活性的DFT研究

为了从原子水平上揭示仙鹤草中仙鹤内酯以及仙鹤草内酯-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷等异香豆素类化合物的结构与抗炎活性之间的关系,运用密度泛函理论DFT方法,在B3LYP/6-31G^(**)水平上对仙鹤内酯以及仙鹤草内酯-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的结构和性质进行了理论计算,并通过分子对接对其结合位点做出预测及分析。从分子的酚羟基键长、NBO电荷、酚羟基解离能(BDE)、绝热电离势(IP)及分子与炎症靶点对接能等分析化合物的结构与抗炎活性之间的关系,并通过考察不同溶剂对化合物抗氧化活性的影响等方面分析化合物的抗炎构效关系。计算结果表明两个化合物的抗炎活性由强到弱顺序为:仙鹤内酯、仙鹤草内酯-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,与实验活性结果一致。

龙芽草总黄酮的闪式提取工艺优化及提取物的抑菌和抗炎活性研究

为优化龙芽草总黄酮闪式提取工艺,以龙芽草全株为试验材料,以总黄酮含量为指标,采用响应面法对提取时间、提取液料比、提取溶剂浓度进行了优化,结果表明:当提取时间为41.09 s,提取液料比为40.19∶1(mL∶g),提取溶剂浓度为41.37%时,总黄酮含量最高,可达到94.25 mg/g。为了将龙芽草提取物应用于产品生产中,对其提取物进行了抑菌及抗炎活性的研究。抑菌试验结果表明,龙芽草提取物对6种致病菌均表现出良好的抑菌活性,其中对蜡样芽孢杆菌的抑菌效果最佳,最低抑菌浓度为4 mg/mL。在抗炎试验中,建立了以脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞(Raw 264.7)炎症模型,调查了提取物对NO、iNOS和COX-2炎症指标的影响。结果表明:经过提取物处理后的LPS诱导的Raw 264.7细胞的炎症指标呈剂量依赖性地下降。因此,该研究旨在为龙芽草进一步的开发和利用提供一定理论基础。

仙鹤草治疗胃癌用药规律的数据挖掘研究

目的从文献角度出发,分析《肿瘤方剂大辞典》含仙鹤草方剂治疗胃癌的用药规律。方法收集整理《肿瘤方剂大辞典》中含有仙鹤草的方剂,并用Excel 2010建立临证方剂数据库,运用SPSS Statistics 26.0、Cytoscape3.8.2和IBM SPSS Modeler14.1软件对库中方剂进行频次统计、关联规则和聚类分析等数据挖掘。结果根据纳入及排除标准筛选,共整理出含仙鹤草方剂57首,涉及中药198味,使用频次701次,选取组方中使用频次≥10的药物共15味,发现使用频次较高的为黄芪,用药种类以清热药为主,药性以寒性药使用频次最高,药味则多选用苦味,药物归经使用频次较高的是肝经;对高频药物采用关联规则得出五对核心药对;聚类分析显示出四组核心配伍组合。结论胃癌以仙鹤草配伍用药治疗为多,遵循癌症早期祛邪、晚期扶正的基本治疗理念。

仙鹤草中黄酮类化学成分研究

目的：对仙鹤草Agrirnonia pilosa全草的70％乙醇提取物中的化学成分进行研究。方法：利用多种色谱方法进行成分分离，根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果：分离得到9个化合物，分别鉴定为山柰酚3-O-（6-p-香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖苷（1），山柰酚3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷（2），槲皮素3-O-α—L．吡喃鼠李糖（3），槲皮素3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4），山柰酚3-O-β-D-葡萄糖苷（5），山柰酚（6），芹菜素（7），木犀草素（8），槲皮素（9）。结论：化合物1—3，5，6，8为首次从该植物中分离得到。

仙鹤草煎剂对HL-60细胞的体外诱导凋亡作用

本研究采用MTT法、细胞形态学观察和流式细胞术检测了仙鹤草煎剂对人白血病细胞系HL-60在体外的作用。结果表明,仙鹤草煎剂对HL-60细胞有生长抑制作用;用仙鹤草煎剂处理后的HL-60细胞呈现出典型的凋亡形态特征;用流式细胞仪测定细胞周期,可见明显的凋亡峰。

仙鹤草水提液对SMMC-7721肝癌细胞的抗癌作用及其机制

目的体外观察中药仙鹤草的抗肝癌作用,并初步探讨其机制。方法制备仙鹤草水提液,以含不同浓度仙鹤草水提液的细胞培养液培养SMMC-7721肝癌细胞,于不同时间点采用MTT法测定细胞活力并计算抑制率(IR),光镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫细胞化学染色检测Bcl-2、P53蛋白的表达。结果仙鹤草水提液作用SMMC-7721肝癌细胞24、48、72h后,5mg/mL组和10mg/mL组无明显细胞生长抑制作用,20mg/mL组的IR分别为0.5%、23.9%和27.5%,40mg/mL组的IR分别为23.3%、51.7%和71.6%。仙鹤草水提液有效浓度作用48、72h后,细胞呈现明显的凋亡形态学改变;20mg/mL组的细胞凋亡率分别为19.5%和23.0%,40mg/mL组分别为33.4%和42.7%。20mg/mL组的Bcl-2蛋白阳性表达率分别为71.9%和58.5%,40mg/mL组分别为47.9%和26.5%。20mg/mL组的P53蛋白阳性表达率分别为22.9%和50.6%,40mg/mL组分别为48.7%和83.7%。结论仙鹤草水提液能较明显地抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,并呈剂量、时间依赖性,凋亡发生可能与Bcl-2和P53蛋白表达改变有关。

仙鹤草提取物对兔血压的影响

目的:研究仙鹤草对兔血压的影响。方法:用颈动脉插管法,连接MS2000多媒体生物信号记录系统,测定仙鹤草水提物和醇提物(相当于原药材0.75、1.5、3.0g/kg,iv)给药前及药后0.5、1.5、3、5、10min时的收缩压、舒张压、平均动脉压和心率。结果:小剂量水提物降压作用不明显,但使心率加快,中、高剂量则使血压下降;3个剂量的醇提物均见血压下降,且中、高剂量组可见心率减慢;药后0.5～1.5min作用达高峰,3～5min后血压和心率基本恢复正常;醇提物对去甲肾上腺素和异丙肾上腺素的作用无明显影响,但阿托品能减弱其降压作用。结论:仙鹤草提取物能降低兔血压,且醇提物降压作用强于水提物。

仙鹤草水提液对食管癌Eca109细胞生长的抑制作用

目的:研究仙鹤草水提液对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用及其可能机制。方法:MTT法测定0g/L、2g/L、4g/L、8g/L、16g/L的仙鹤草水提液分别作用于Eca109细胞24h、48h、72h,观察对Eca109细胞生长的抑制作用;采用免疫组织化学染色技术检测16g/L仙鹤草水提液作用72h对Eca109细胞Bcl-2、P53蛋白表达的影响。结果:MTT结果显示16g/L仙鹤草水提液作用48h和72h后Eca109细胞生长明显受抑;免疫组化结果显示16g/L仙鹤草水提液作用72h后Eca109细胞内Bcl-2蛋白表达下调,P53蛋白表达上调。结论:仙鹤草水提液体外能诱导Eca109细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达及上调P53蛋白表达有关。

仙鹤草的酚类化学成分

目的对仙鹤草(Agrimonia pilosa Ledeb.)的化学成分进行研究。方法利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、高效液相色谱、制备薄层色谱等各种色谱手段对化学成分进行分离纯化,并通过理化性质和波谱数据分析对化合物进行结构鉴定。结果从仙鹤草乙酸乙酯萃取部分分离得到8个酚类化合物,分别鉴定为pilosanol C(1)、去氢双儿茶素A(dehydrodicatechin A,2)、(+)-儿茶素[(+)-catechin,3]、(2S,3S)-(-)-花旗松素[(2S,3S)-(-)-taxifolin,4]、异香草酸(isovanillic acid,5)、反式对香豆酸(trans-p-coumaric acid,6)、原儿茶酸(protocatechuic acid,7)、原儿茶醛(protocatechuic aldehyde,8)。结论化合物2、5-8均为首次从龙牙草属植物中分离得到。

仙鹤草药用成分浸提工艺优选

为了确定仙鹤草中药用成分及鹤草酚、黄酮类化合物的提取工艺 ,系统地对影响有效成分提取的各个因素进行了定量分析 ,研究结果表明 ,仙鹤草中鹤草酚的较佳提取工艺为 :醇水溶液浓度 6 0 %、浸提温度 80℃、浸提时间 1.5h、浸提次数 2、液料比 10∶1。黄酮类化合物的提取工艺为 :浸提液浓度 4 0 %、浸提温度 70℃、浸提时间 1h、浸提次数 3、液料比 10∶1。