两种根癌土壤杆菌介导的荧光素酶在植物体内表达分析

根据报道的荧光素酶(Luciferase,Luc)基因设计引物,PCR扩增获得Luc基因,经BamH I和PstI酶切连接到载体pCHF3上,成功构建植物表达载体pCHF3-Luc.将pCHF3-Luc分别转入根癌土壤杆菌株EHA105和LBA4404细胞内,利用根癌土壤杆菌渗入法导入本氏烟和大麦,荧光检测仪内检测本氏烟和大麦叶片中瞬时表达的Luc活性.结果表明:两种根癌土壤杆菌介导的Luc可以在本氏烟中成功表达,而在大麦中不能表达;利用根癌土壤杆菌渗入法在本氏烟中表达外源基因时,EHA105菌株优于LBA4404菌株.

转双价抗虫基因741杨根际致瘤农杆菌分离及生长曲线测定

应用稀释平皿分离法对转双价抗虫基因741杨的根际土壤微生物进行了分离研究。对其中野杆菌属的致瘤农杆菌进行了筛选和鉴定,采用分批培养法测定其生长曲线。结果表明,该菌的生长曲线近似于"S"形曲线,其对数生长期的世代时间为44 3min。

致瘤农杆菌的鉴定及与转基因741杨基因互作的研究

以从长瘤的转基因741杨和非转基因毛白杨的根际土壤中分离得到致瘤农杆菌为试材,采用切片、染色及活体接种的方法,对其进行了形态和生物学鉴定。结果表明:其形态符合致瘤农杆菌的特征;胡萝卜和番茄苗的致瘤性试验结果为阳性;该菌株在诱导胡萝卜和番茄苗肿瘤发生同时,还发现其有明显地促进杨树组培苗以及番茄实生苗不定根的诱导能力;该菌株回接转基因741杨组培苗后,并未发现与其寄主之间存在基因转移现象。

白藜芦醇合酶基因的克隆及丹参的转化

目的为探索利用分子生物学技术培育新型药用植物的新途径,将外源的白藜芦醇合酶(RS)基因导入到丹参中表达,以改善或增加丹参的效用。方法根据已公布的核苷酸序列,利用引物悬挂延伸法,经过3次扩增,最终从葡萄基因组DNA中获得完整的RScDNA基因序列;以质粒pBin438为基础,构建含有RS目的基因的组成型植物表达载体。在根癌农杆菌介导下,利用叶盘法转化丹参,进而通过PCR、PCR-Southern杂交对不同的转基因植株进行筛选与检测。结果总共得到了45棵卡那霉素抗性植株,经PCR和PCR-Southern杂交检测,确定葡萄RS基因已整合到部分转基因丹参苗的基因组中。结论成功建立了白藜芦醇合酶基因转化丹参的体系,并获得了转基因植株。

梨树冠瘿病的药剂防治

通过田间药效试验,对山东1号、1%碘制剂和健丽壮+多病宁+庄伯伯3种药剂对梨树冠瘿病的防治效果、梨产量和糖度进行了比较。结果表明:这3种药剂对梨树冠瘿病都有防治效果,尤其是健丽壮+多病宁+庄伯伯混合使用对梨冠瘿病的防治效果达52.11%,防治后果实产量、糖度均有所提高,适合进一步推广。