根癌农杆菌介导的深绿木霉菌T23遗传转化研究

采用根癌农杆菌介导的方法,成功地建立了丝状生防真菌深绿木霉(Trichoderma atroviride)菌株T23的遗传转化体系。并且,通过提高筛选培养基中潮霉素B的浓度和调整农杆菌的培养时间,对转化体系作了进一步的优化。转化效率约为50个突变体/107个分生孢子。所有转化子经继代培养5代,潮霉素B抗性筛选后,共得到118个遗传稳定的转化子。随机抽取部分转化子,进行PCR和Southern blot分子鉴定,结果证实外源的T-DNA已经随机整合到T23的基因组中。通过形态学观察,筛选出3个在产孢量和菌丝体生长速度方面显著不同于野生型菌株T23的转化子。农杆菌介导的遗传转化方法在深绿木霉菌株T23上的成功运用,将为研究该菌的功能基因组提供强有力的工具。

根癌农杆菌介导的球毛壳菌遗传转化及T-DNA插入突变体的获得

根癌农杆菌介导的遗传转化系统是植物基因工程常用方法 ,目前已将这一转化系统应用到酵母、丝状真菌以及人类细胞的转化。利用这一转化系统 ,成功地实现了丝状真菌球毛壳菌 (Chaetomiumglobosum)的遗传转化 ,转化率约为 6 0～ 180个转化子 10 7个孢子。通过对转化子的PCR检测和Southern杂交分析表明 ,T DNA已整合进毛壳菌基因组中 ,而且在所检测的转化子中都是以单拷贝的形式整合 ,转化子都能够稳定遗传。根癌农杆菌介导的遗传转化具有转化率高、低拷贝、遗传稳定、操作简便等优点 。

根癌农杆菌介导的CryⅠA(b)基因在毛壳菌中的转化

利用根癌农杆菌介导的遗传转化方法,将CryⅠA(b)基因转入生物防治真菌毛壳菌中,转化率约为40～180个转化子·10-7个孢子。通过对转化子的RT-PCR检测和Southern杂交分析表明,CryⅠA(b)基因已整合进毛壳菌基因组中,而且在转录水平上得到表达,转化子都能够稳定遗传。根癌农杆菌介导的遗传转化具有高转化率、低拷贝、遗传稳定、操作简便等优点,因此有可能成为丝状真菌遗传转化和功能基因组研究的有力工具。

农杆菌介导生防棘孢木霉菌转化体系的优化

目的:实现棘孢木霉菌T4的遗传转化并优化其转化体系。方法:以潮霉素抗性为选择标记,利用农杆菌转化法介导转化棘孢木霉菌。结果:潮霉素基因成功整合到受体菌基因组中,转化子抗性基因可稳定遗传。结论:最优的转化体系和条件为:IM和CM培养基中AS浓度为200μg/mL,棘孢木霉T4孢子浓度为106/mL,农杆菌浓度为200μL(OD600约0.8),共培养时间为48 h,转化效率约为50个转化子/106个孢子。