森林假单胞菌抑菌物稳定性及其成分分析

森林假单胞菌Pseudomonas silvicola菌株T1-3-2对杉木炭疽病具有较强的防治效果,为将其研发为林木炭疽病的生防制剂,需进一步探明该菌抑菌谱、抑菌物质稳定性以及主要成分等,以补充完善该菌的生防理论。文章通过平板对峙法、菌丝生长速率法、液相色谱/线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC/LTQ-Orbitrapa MS)和气相色谱-质谱法(GC-MS)分析了该菌的抑菌谱、抑菌物质的稳定性以及主要成分。结果表明,菌株T1-3-2对9株供试病原真菌均具有较好的抑菌活性,尤其对包括杉木炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides在内的多种林木炭疽病菌表现出较强的抑菌作用,抑制率均达到65%以上;其代谢产物粗提物对杉木炭疽病菌的孢子萌发和菌丝生长具有明显抑制作用;温度≤70℃、酸碱度以及紫外辐射对粗提物抑菌效果均无显著影响,但高温处理(T>70℃)对抑菌效果影响显著;粗提物主要含有14种化合物,其中包含假单胞菌常见的4种吩嗪类抑菌物质,即吩嗪、1,6-二羟基吩嗪、10-乙酰基-3,7-二羟基吩嗪和绿脓菌素;挥发性气体(VOCs)中包含:苯类、烯烃类、酮类等13种化合物。菌株T1-3-2具广谱抑菌特性,其粗提物稳定性较好且具较强抑菌活性,该菌株及其代谢物在林木炭疽病的防治中有很好的应用前景。

稻瘟病生防放线菌菌株A_(11)发酵液中抗菌物质的稳定性测定

在实验室分离获得的放线菌A11菌株,其发酵液采用对峙培养对植物病原真菌均表现良好的抑菌活性。对发酵液在不同温度和不同pH下的稳定性进行测定,结果表明菌株A11发酵液在中性及酸碱条件下都稳定,在极酸和极碱条件下抑菌活性丧失;A11发酵液能经受75℃温度60min,仍保持原来的抗菌活性,温度升高到100℃时活性丧失。

解淀粉芽孢杆菌B10-26抑菌物质的稳定性研究与初步分离纯化

为了将解淀粉芽孢杆菌B10-26应用于植物病害的生物防治,以芝麻茎点枯病菌等13种病原菌为指示菌,采用含毒介质法检测生防菌发酵液的活性;对抑菌物质粗提物在不同温度和pH值条件下处理,采用牛津杯法检测活性;采用高效液相法对抑菌物质进行初步的分离纯化.结果表明,解淀粉芽孢杆菌B10-26发酵液对13种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用,对芝麻茎点枯病菌的抑菌率最高,达到91.67％.抑菌物质活性虽然随着温度的升高有所下降,但在121℃高温处理下,仍然产生11 mm的抑菌圈,说明其具有较高的热稳定性;在pH值2～10时,押菌活性没有明显变化,说明其具有较好的酸碱稳定性,但在碱性条件下活性较高.对抑菌物质的初步分离表明,B10-26发酵液中含有多种活性成分.

龟裂链霉菌菌株MY02发酵液中抗菌物质的稳定性测定

本实验室分离获得的链霉菌菌株MY0 2发酵液对植物病原真菌均表现良好的抑菌活性。对其在不同条件下的稳定性进行测定结果表明 ,菌株MY0 2发酵液在中性及偏碱性的条件下稳定 ,室温条件下存放半年后活性开始下降 ,存放 1年后其活性丧失过半 ;菌株MY0 2发酵液对光稳定 ,5 4℃ 15d菌株MY0 2发酵液的抑菌活性不下降。

桃树根际拮抗细菌CE抑菌物质对桃褐腐病菌的抑制作用和稳定性研究

为了进一步了解拮抗细菌CE的抑菌作用机理,采用了膜透性试验、抑菌试验、电镜观察、孢子萌发和离体接种等方法进行了研究。结果显示,拮抗细菌CE抑菌物质能引起桃褐腐病菌菌丝细胞膜透性变化,导致电解质外渗和培养液电导率增加;致使菌丝和分生孢子形态异常,细胞内液泡增多,分生孢子不能萌发;并对桃褐腐病菌的侵染和病情的发展有明显的抑制和延缓的效果。同时通过温度、紫外线、酸碱度和蛋白酶等物理化学方法对抑菌物质进行了稳定性试验,结果表明,拮抗细菌CE的抑菌物质具有抑菌活性强、稳定性好的特点,具有较好的开发前景。

链霉菌NG-715的抗真菌活性及稳定性研究

目的研究链霉菌NG-715的抗真菌活性及稳定性,建立其生物活性的检测方法。方法以链霉菌NG-715所产抗真菌组分为材料,测试其对啤酒酵母、桔青霉、黑曲霉、黑根霉的最低抑制浓度和最低杀灭浓度。以黑曲霉为指示菌,测其生物检测法和稳定性。结果链霉菌NG-715所产抗真菌组分对啤酒酵母、桔青霉、黑曲霉、黑根霉的最低抑制浓度和最低杀灭浓度分别为1.25、2.5、3.75、3.75μg/mL和2.5、10、17.5、17.5μg/mL。生物检测法求得抑菌圈直径(mm)-浓度(μg/mL)的对数值之间的线性回归方程为y=26.963x-27.6,R2=0.9991。该抗真菌组分耐热和酸碱,对紫外线较敏感。结论本研究为下一步对该抗真菌活性成分的分离提取提供了有益的试验数据。

生防菌株CAB-1抑菌物质产生的条件及其稳定性研究

[目的]探索生防菌株CAB-1的最优培养条件及其产生的抑菌物质稳定性。[方法]以黄瓜灰霉菌为靶标,分别采用改进牛津杯法和含药平板法测定抑菌物质活性,并对菌株CAB-1产生抑菌物质的发酵条件及抑菌物质特性进行了研究。[结果]菌株CAB-1产生抑菌物质的最适培养基为4号培养基,最佳发酵温度为31℃,最佳发酵时间为48h。菌株CAB-1所产的抑菌物质在60℃及其以下具有热稳定性;超声波(100W)处理20min对抑菌物质的活性没有影响,处理30min以上抑菌物质的活性显著下降;紫外线照射20、30、40min对抑菌物质的活性没有显著影响,照射50min后其活性显著降低;pH值为6、10、11时,抑菌物质的活性最高。[结论]该研究为利用生防菌株CAB-1开发新型微生物杀菌剂提供了依据。

黄麻链霉菌AUH-1发酵液的抗菌活性及其稳定性研究

旨在研究黄麻链霉菌AUH-1菌株发酵液的抗真菌活性,并明确温度、紫外线及pH等理化因素对活性物质稳定性的影响。以8种植物病原真菌为供试菌,采用抑制菌丝生长速率法测定发酵液的抗真菌活性,并以水稻纹枯病菌为指示菌,测定不同条件下发酵液的抑菌活性。抗真菌活性结果表明:AUH-1菌株发酵液对8种植物病原真菌均具有不同程度的抑制作用,其中对西瓜枯萎病菌、烟草黑胫病菌、水稻纹枯病菌以及辣椒疫病菌的抑制效率分别高达81%、78%、68%和67%以上。稳定性实验结果表明:AUH-1菌株所产抗真菌活性物质具有良好的热稳定性和紫外稳定性。可见,黄麻链霉菌AUH-1具有广谱拮抗作用,具备开发生物农药的良好应用前景。

生防菌XNB-02的鉴定及其对烟草赤星病的防病机理

为获得防控烟草赤星病的优异生防资源,自青海省西宁市土壤样品中分离纯化获得细菌菌株,筛选对烟草赤星病菌Alternaria alternata有较好抑制作用的菌株,测定其对其他6种植物病原菌的抑制作用,采用形态学、生理生化特性和分子生物学对筛选的生防菌株进行鉴定,初步探究该菌株对烟草赤星病的抑菌机理、室内防效和促生作用,并测定该菌株发酵液的稳定性、体内生防相关基因及其对烟草体内抗病基因的影响。结果显示:经分离纯化共获得了5株菌株,其中生防菌株XNB-02对烟草赤星病菌有较好的拮抗效果,抑菌圈半径为10.33 mm;对其他6种植物病原菌也有较好的抑制作用。经鉴定生防菌株XNB-02为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。生防菌株XNB-02能促进烟草幼苗的生长,当其发酵液浓度为1×10~9CFU/mL时对烟草赤星病的防效达到61.82%。生防菌株XNB-02胞内粗提物能抑制烟草赤星病菌菌丝生长和孢子萌发,能改变菌丝和孢子的形态。温度低于90℃、pH 3~13、光照7 d、紫外照射240 min和蛋白酶K处理后,生防菌株XNB-02对烟草赤星病菌的抑制作用无明显变化。接种生防菌株XNB-02后,烟草中抗病基因被激活。生防菌株XNB-02体内存在表面活性素、伊枯草菌和芬原素等生防相关基因。表明生防菌株XNB-02具有开发为烟草赤星病生防制剂的潜力。

海洋链霉菌GB-2产抗真菌物质的分离纯化和稳定性研究

目的从海洋链霉菌GB-2的发酵液中分离纯化抗真菌物质,并研究该物质的稳定性。方法采用有机溶剂萃取,硅胶层析和制备型高效液相色谱(HPLC)等分离技术纯化抗真菌物质;通过管碟法,以米曲霉为指示菌研究抗真菌物质的pH、温度和紫外稳定性。结果海洋链霉菌GB-2产的抗真菌物质得到了纯化;该物质在pH1.0、pH13.0、100℃和紫外照射24h条件下抑菌活性几乎不变。结论纯化了海洋链霉菌GB-2抗真菌物质具有很好的稳定性,为其结构鉴定和开发应用提供了理论依据。

裸脚菇属菌0612-9拮抗柑橘青霉及绿霉活性物质稳定性分析

青霉及绿霉病害会导致柑橘采后腐烂并引起巨大经济损失,裸脚菇属菌0612-9可抑制青、绿霉菌的生长。为探究该菌拮抗病原菌的物质基础及其稳定性,采用大孔树脂柱层析、硅胶柱色谱、薄层色谱法等分离,采用牛津杯法和分析型高效液相色谱检测其在不同温度、pH、紫外线照射(UV)、光照和氧化等不同条件下的稳定性。结果表明,裸脚菇属菌0612-9抑制青、绿霉菌生长的活性物质有2种,即I和II,物质I、II对意大利青霉和指状绿霉的EC50分别为95.72、137.36μg/mL和213.61、319.28μg/mL。物质I在高温(121℃)、UV、氧化和较广泛pH(pH2～10)条件下都稳定,光照7 d后抑菌效果有所减弱;物质Ⅱ在100℃及以下和酸性(pH2～7)条件下都较稳定,在光照、氧化下分别处理4、9 d后和UV处理4 h后抑菌效果才开始减弱。说明物质I、II在化学结构上可能存在较大差别,两者均有潜在柑橘采后防腐的生防价值。