抗HBsAg人VH基因中异常序列对抗体活性影响的研究

目的:我们曾从噬菌体抗体库中克隆到一株VH第3骨架区中含有异常序列的抗HBsAg人Fab基因,本工作拟探讨该VH基因中异常序列对抗体活性的影响.方法:采用重叠PCR方法去除这段异常序列,构建表达载体,转化大肠杆菌表达出抗HBsAg噬菌体抗体和可溶性Fab,测定了它们与抗原的结合活性.结果:与原抗体比较,改造后的抗体与抗原的结合活性明显下降,分子模建提示这段异常序列对VH CDR_1和CDR_2的部分氨基酸残基的位置有一些影响,测定改造前Fab的亲和力约为0.55×10~9M^(-1),改造后Fab因抗原结合活性过低,无法检测其亲和力.结论:提示这段异常序列在体内就可能存在于该VH之中.

抗HBs人V_H基因中异常序列对抗体活性影响的研究

目的 从噬菌体抗体库中克隆到 1株VH 第 3骨架区中含有异常序列的抗HBs人Fab基因 ,探讨该VH 基因中异常序列对抗体活性的影响。方法 采用重叠PCR方法去除了这段异常序列 ,构建表达载体 ,转化大肠杆菌表达出抗HBsAg噬菌体抗体和可溶性Fab ,测定了它们与抗原的结合活性。结果 与原抗体比较 ,改造后的抗体与抗原的结合活性明显下降 ,分子模建提示这段异常序列对VHCDR1和CDR2的部分氨基酸残基的位置有一些影响 ,测定改造前Fab的亲和力约为 0 5 5×10 9mol/L ,改造后Fab因抗原结合活性过低 ,无法检测其亲和力。结论 提示这段异常序列在体内可能存在于该VH 之中。