回药爱康方对Lewis肺癌C57小鼠瘤细胞PCNA、SIL-2R表达的影响

目的:免疫细胞化学法检测不同组小鼠含药血清作用对肿瘤组织中PCNA的影响;ELISA方法检测鼠外周血s IL-2R。方法:小鼠自接种瘤株细胞24 h后称重、编号,随机分为8组,每组5只,分别为:1回药爱康方高剂量组(AKH);2荷瘤模型组(对照组);3回药爱康方中剂量组(AKM);4单纯化疗药组(CTX组);5回药爱康方中剂量组加化疗组(AKM+CTX);6回药爱康方低剂量加化疗药组(AKL+CTX);7回药爱康方低剂量组(AKL);8回药爱康方高剂量加化疗药组(AKH+CTX)。结果:与模型组比较高、中、低、高+环磷酰胺、中+环磷酰胺、低+环磷酰胺,组织中PCNA的表达都降低,差异具有显著统计学意义(P<0.05);血清中s IL-2R的表达都降低,差异具有显著统计学意义(P<0.05)。结论:本实验证明回药爱康方高中低剂量以及高中低剂量与环磷酰胺联合用药可以通过调节PCNA以及Sil-2的表达来抑制肿瘤细胞的增殖,对临床使用提供了更为可靠的实验依据。

爱康方含药大鼠血清对人肺腺癌A549细胞内Bad、Caspase-9蛋白及mRNA的作用

目的 探讨爱康方含药血清对人肺腺癌A549细胞内B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子(Bad)、Caspase-9蛋白(Caspase-9蛋白)及mRNA的表达作用。方法 40只大鼠,采用随机分组法分为空白对照组(NS)、环磷酰胺组(CTX)、爱康方组(AKF)和爱康方联合环磷酰胺组(AC),每组10只。以人肺腺癌A549细胞为研究对象,依据前期研究结果选定20%的含药血清为最佳干预浓度,用各组含药血清分别干预细胞48、72 h后收集细胞用于检测。通过蛋白质印迹法(Western blot)测定干预后目的细胞中Bad、Caspase-9蛋白表达,实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)法测定Bad、Caspase-9 mRNA的表达。比较各组不同方法检测的Bad mRNA、Caspase-9 mRNA表达水平及Bad、Caspase-9蛋白表达水平。结果 48、72 h时,环磷酰胺组、爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Bad mRNA表达水平高于空白对照组,爱康方联合环磷酰胺组Bad mRNA表达水平高于环磷酰胺组和爱康方组,差异具有统计学意义(P<0.05);48 h时,环磷酰胺组Bad mRNA表达水平高于爱康方组,差异具有统计学意义(P<0.05)。72 h时,爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Bad mRNA表达水平高于本组48 h,差异具有统计学意义(P<0.05)。48、72 h时,环磷酰胺组、爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9 mRNA表达水平高于空白对照组,爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9 mRNA表达水平高于环磷酰胺组和爱康方组,差异具有统计学意义(P<0.05);48 h时,环磷酰胺组Caspase-9 mRNA表达水平高于爱康方组,差异具有统计学意义(P<0.05)。72 h时,爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9 mRNA表达水平高于本组48 h,差异具有统计学意义(P<0.05)。48、72 h时,环磷酰胺组、爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Bad蛋白表达水平明显高于空白对照组,环磷酰胺组、爱康方联合环磷酰胺组高于爱康方组,爱康方联合环磷酰胺组高于环磷酰胺组,差异具有统计学意义(P<0.05)。72 h时,爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Bad蛋白表达水平高于本组48 h,差异有统计学意义(P<0.05)。48、72 h时,环磷酰胺组、爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9蛋白表达水平明显高于空白对照组,环磷酰胺组、爱康方联合环磷酰胺组高于爱康方组,爱康方联合环磷酰胺组高于环磷酰胺组,差异具有统计学意义(P<0.05)。72 h时,爱康方组和爱康方联合环磷酰胺组Caspase-9蛋白表达水平高于本组48 h,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 爱康方能抑制肺癌肿瘤生长,与环磷酰胺合用抑癌效果更佳,可能是通过上调A549细胞中促凋亡蛋白Bad、Caspase-9,诱导肿瘤细胞凋亡而实现的。

回药爱康方含药血清对肺癌A549细胞凋亡的影响

目的:探讨回药爱康方(HAKF)含药血清对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、爱康方低、中、高剂量组、环磷酰胺(CTX)组、回药爱康方低、中、高剂量分别联合环磷酰胺化疗组,药物低、中、高剂量15.0,30.0,45.0 g·kg-1,连续灌胃15 d,麻醉后心脏取血,制备含药血清。培养细胞,将细胞分为实验组和对照组,实验组分别给予含5%,10%,20%3个体积分数的相应各组含药血清,对照组给予等体积分数的对照组大鼠血清,培养24,48,72 h后采用Annexin-VFITC/PI双染法测定各组含药血清对A549细胞凋亡的影响。结果:与对照组比较,各时段5%,10%,20%浓度含药血清可提高A549的凋亡率(P<0.05),72 h时,各浓度回药爱康方低、中、高剂量含药血清对细胞的凋亡率的提高程度小于CTX(P<0.05);72 h 10%体积分数回药爱康方低剂量联合环磷酰胺血清提高细胞的凋亡率大于单纯CTX(P<0.05);各浓度爱康方中剂量和高剂量血清组,72 h与24 h比较,两组A549细胞的凋亡率均升高(P<0.05);随着血清体积分数的提高,各组细胞的凋亡率和坏死率呈增大趋势。结论:回药爱康方可诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡,且有一定的剂量和时间依赖性。

爱康方含药血清对Lewis肺癌细胞mTOR、Suvivin表达的影响

目的:观察爱康方含药血清对小鼠Lewis肺癌细胞mTOR、Suvivin蛋白表达水平的影响。方法:选择纯系SPF级雄性大鼠40只,分为生理盐水组(NS)、爱康方组(AKF)、环磷酰胺组(CTX)、爱康方联合环磷酰胺组(AKF+CTX)4组,每组10只。参照课题组前期实验方法制备含药血清。20%含药血清干预Lewis细胞48、72 h。实时荧光定量PCR技术检测mTOR、Suvivin mRNA水平,采用Western Blot法检测mTOR、Suvivin蛋白表达水平。结果:与NS组同期比较,AKF组、AKF+CTX组、CTX组mTOR、Suvivin mRNA及蛋白表达水平均显著下降(P<0.01);与CTX组同期比较,AKF+CTX组mTOR、Suvivin mRNA及蛋白表达水平显著下降(P<0.05),随着干预时间的增加,72 h AKF+CTX组mTOR、Suvivin mRNA及蛋白表达水平下降优于本组48 h(P<0.05)。结论:爱康方含药血清能够诱导Lewis肺癌细胞凋亡可能与调控mTOR、Suvivin蛋白表达有关。