日本鳗鲡TRAF3基因的克隆、表达及亚细胞定位分析

肿瘤坏死因子受体(TNFR)相关因子3(TRAF3)是激活NF-κB、I型IFN信号通路的重要调节因子。克隆了日本鳗鲡TRAF 3基因全长cDNA序列,命名为AjTRAF 3,可编码568个氨基酸,具有保守的TRAF结构域(MATH结构域)、锌指(ZF)结构域和环指结构域(RING domain)。系统发育树分析表明AjTRAF3与其他鱼类TRAF3聚为一支,而哺乳类、鸟类、两栖类分别聚为一支。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示:天然状态下日本鳗鲡各组织均检测到有AjTRAF 3基因的表达,其中肝脏表达量最高;LPS、Poly I:C、嗜水气单胞菌免疫注射日本鳗鲡后,能引起肝脏、脾脏和肾脏中AjTRAF 3基因的表达水平显著提高;日本鳗鲡肝脏细胞经不同病原相关分子模式LPS、Poly I:C、CpG、PGN和不同浓度嗜水气单胞菌感染刺激后,其AjTRAF 3基因的表达水平均显著升高。亚细胞定位研究显示天然状态下Aj TRAF3蛋白在细胞质中聚集呈散点状分布,经LPS和Poly I:C刺激后,Aj TRAF3蛋白分子可进入细胞核且呈散点状分布。以上结果表明AjTRAF 3在日本鳗鲡抗病毒、细菌免疫应答反应中发挥重要作用。