Research Progress of Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz.

Akebia trifoliata （Thunb.） Koidz is an important medicinal plant and important fruit tree resource to be developed in China. This article mainly intro- duced the research advance in the botanical characteristics, nutrition and medicinal value, further development and utilization of A. trifoliata, and the developing orientation of A. trifoliata in the future.

Optimization of Extraction Process of Total Flavonoids from Akebia trifoliata (Thunb.) Koidz. by Central Composite Design-Response Surface Methodology

[Objectives]To optimize extraction process of total flavonoids from Akebia trifoliata( Thunb.) Koidz.,so as to provide references for development and use of Akebia trifoliata( Thunb.) Koidz. [Methods]The extraction rate of total flavonoids of Akebia trifoliata( Thunb.)Koidz. was taken as observation indicator. On the basis of single factor experiment,central composite design( CCD) was used to evaluate the effects of the extraction temperature,extraction time,and ethanol concentration on the extraction process. Multiple linear regression and binomial fitting were used,and response surface methodology( RSM) was used to select the optimum extraction process. [Results] The optimum extraction process conditions for total flavonoids of Akebia trifoliata( Thunb.) Koidz. was extraction temperature: 83. 92 ℃; extraction time:96. 47 min; ethanol concentration: 63. 92%; extraction times: two times; solid to liquid ratio: 1 ∶ 20; extraction rate of total flavonoids:4. 55%. [Conclusions] The central composite design-response surface methodology( CCD-RSM) is simple,convenient,and feasible for extraction of total flavonoids from Akebia trifoliata( Thunb.) Koidz.,and the prediction results are reliable.

八月札乙醇提取物对人肝癌细胞抑制增殖、促进凋亡及转录组学分析

目的探讨八月札乙醇提取物(ethanol extract of Akebia trifoliate(Thunb.)Koidz,EEATK)对人肝癌细胞增殖、凋亡的影响及可能作用机制。方法体外培养人肝癌细胞(Hep3B和Huh-7),设置空白对照组、索拉菲尼(Sorafenib,5μmol/L)组及EEATK组(0.10、0.15、0.20、0.3 mg/mL),分别给予对应药物干预,采用CCK-8法检测不同分组的药物干预对肝癌细胞活力的影响,筛选最佳作用浓度用于后续实验;采用EdU染色法、克隆形成实验、Annexin V-FITC/PI双染法观察EEATK(0.15 mg/mL)对人肝癌细胞(Hep3B和Huh-7)增殖和凋亡的影响;转录组测序分析EEATK调控Hep3B细胞增殖、凋亡的差异表达基因;使用基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析差异表达基因的功能及富集通路;并联合比较毒物基因组学(Comparative Toxicogenomics Database,CTD)数据库分析与肝癌增殖、凋亡相关基因,应用qRT-PCR验证关键基因表达情况。结果与空白对照组相比,随着EEATK浓度增加,能够显著抑制Hep3B和Huh-7细胞的活力(P<0.01);0.15 mg/mL的EEATK作用肝癌细胞后,EdU阳性细胞率、细胞克隆形成率均显著降低(均P<0.01),同时细胞凋亡率显著增加(P<0.01);Hep3B细胞转录组测序结果分析显示,与空白对照组相比,EEATK引起1577个基因表达发生显著改变(P<0.01),其中表达上调差异基因942个,表达下调差异基因635个。GO功能富集分析发现差异表达基因主要显著富集于胆固醇合成、炎症、细胞外基质中。KEGG通路分析提示EEATK可能主要通过转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号通路及核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路发挥抑癌作用。CTD分析及qRT-PCR检测显示EEATK可引起BIRC5、细胞周期蛋白依赖性激酶1(cyclin-dependent kinases 1,CDK1)等细胞凋亡相关基因的表达显著下调(P<0.01),周期蛋白抑制因子1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,CDKN1A)、脯氨酸羟化酶3(egl-9 family hypoxia inducible factor 3,EGLN3)的表达显著上调(P<0.01);同时,可引起FAM83D(family with sequence similarity 83D,FAM83D)、MKI-67等细胞增殖相关基因显著下调(P<0.01),MYC、叉头框蛋白1(forkhead box C1,FOXC1)等表达显著上调(P<0.01)。结论EEATK可抑制细胞增殖并诱导凋亡,通过调节TGF-β及NF-κB信号通路中相关基因的表达而发挥抗肝癌作用。

44份三叶木通种质的果实性状及其与含油量的关联度分析

为了筛选三叶木通种质及明确不同果实性状与含油量、鲜食率的关系,为三叶木通育种提供参考,对44份三叶木通种质的油脂含量、鲜食率与7个果实性状进行相关性与关联度分析。结果表明:各果实性状变异系数10.74%~50.48%;三叶木通平均含油量达40.40%,含油量最高的是M002-1(53.88%),鲜食率最高是贵大3-2(39.50%);对含油量影响最大的是种子百粒重,对鲜食率影响最大的是果实横径。

指纹图谱、多成分定量与模式识别相结合的预知子(三叶木通)配方颗粒质量评价

目的:建立指纹图谱、多成分定量分析和化学模式识别相结合的预知子(三叶木通)配方颗粒质量评价方法。方法:制备预知子(三叶木通)标准汤剂和配方颗粒,建立高效液相色谱法指纹图谱,对其中8个主要成分含量进行测定,并计算转移率和出膏率。进行相似度评价、聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)、偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA),评价配方颗粒和标准汤剂化学成分的一致性。结果:预知子(三叶木通)标准汤剂中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木通苯乙醇苷B、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、木通皂苷D质量分数分别为1.94~10.33、2.18~13.77、1.77~9.15、2.31~19.34、1.77~6.48、1.16~5.55、2.55~9.90、0.92~8.93 mg·g–1,转移率分别为36.25%~56.02%、24.64%~40.23%、35.88%~58.41%、29.45%~50.69%、16.55%~29.54%、26.25%~46.59%、25.33%~41.66%、11.03%~17.35%,出膏率为13.59%~24.49%。预知子(三叶木通)配方颗粒指标成分含量、转移率、出膏率与标准汤剂接近,指纹图谱相似度、HCA、PCA、PLS-DA评价表明,配方颗粒和标准汤剂化学成分一致性较好。结论:预知子(三叶木通)配方颗粒与标准汤剂化学成分一致性较好,结果合理、可靠,可为其工艺优化及质量评价提供参考。

八月瓜茎段初代培养基本条件筛选

为探索八月瓜组织培养适宜的基本培养条件,以八月瓜当年生幼嫩带芽茎段为试材,开展了适宜消毒方式与基本培养基的筛选。结果表明,70%酒精30 s+0.1%HgCl212 min是八月瓜带芽茎段最适宜的消毒方式,污染率19.82%,成活率达81.47%;最佳的基本培养基是WPM,芽诱导率为67.59%。

中条山区野生三叶木通果实性状研究

本研究选择了中条山区5个三叶木通集中分布区的野生单株,对其果实性状、种子性状及营养成分进行了测定与分析。结果表明,中条山区野生三叶木通单果纵径为88.0 mm~119.3 mm,横径为50.8 mm~66.3 mm,单果重为116.9 g~226.9 g,可食率为25.8%~40.9%,种子千粒重为55.4 g~96.7 g,果实营养成分丰富,综合性状较好。不同研究地果实性状存在显著或极显著差异,其中,皋落林场、同善林场、南樊林场果肉可食率较高,种子饱满度较低;祁家河林场、太宽河保护区果实较大,果皮较厚,可食率低,种子饱满度较高。

八月扎化学成分的研究

从八月扎(FructusAkebiae)中分离出13个化合物,并进行了分离纯化和结构鉴定,分别为1 monostearin(1),2 monoolein(2),1 monoolein(3),棕榈酸(4),1 acetyl 3 olein(5),1 acetyl 3 linoleoyin(6),β 谷甾醇(7),β 胡萝卜甙(8),常春藤皂甙元 3 O β 葡萄吡喃糖甙(9),常春藤皂甙元 28 β D 葡萄吡喃糖甙(10),常春藤皂甙元 3 O β D吡喃木糖基(1→2) α L 阿拉伯吡喃糖(11),常春藤皂甙元 3 O α L 吡喃鼠李糖基(1→2) α L 阿拉伯吡喃糖甙(12),常春藤皂甙元 3 O β D 葡萄糖吡喃基(1→2) α L 吡喃鼠李糖基(1→3) α L 吡喃木糖基甙(13).其中化合物1～6,9,10,12,13为首次从该植物中分离得到.

三叶木通栽培条件下果实性状及营养成分分析

从2005年起搜集野生三叶木通[Akebia trifoliata(Thunb)Koidz]进行人工驯化栽培,观察其果实性状表现,并对营养成分进行了分析。结果表明:人工栽培条件下,果实最大单果重313.5 g,最小89.5 g,平均单果重158.5 g,测出的15种氨基酸平均总量达1415.6 mg/100 g。其中,含有人体必需的8种氨基酸,含量为921.0 mg/100 g,占总氨基酸的65.06%。三叶木通经人工栽培,其果实品质得到较大提高。

三叶木通齐墩果酸的超声提取工艺研究

目的:确定三叶木通齐墩果酸的最佳超声提取工艺条件。方法:采用正交设计L9 (34 )方法,考察乙醇浓度、超声时间、超声功率和间隙超声时间比等因素对提取率的影响,用分光光度法测定含量,并与常规提取法进行了对比。结果:所考察的因素对三叶木通齐墩果酸提取的影响程度为:超声时间 >乙醇浓度 >超声功率 >间隙超声时间比,超声提取的最佳条件为:A2B3C1D2。结论:与常规的提取方法相比,超声提取具有提取时间短、简单、收率高等优点。

三叶木通野生资源的分布

简述了不同木通的药性差别,说明了关木通中所含马兜铃酸的毒害作用;阐述了三叶木通的应用价值;初步调查了陕西镇安的生态环境及三叶木通野生资源分布,为三叶木通野生资源抚育及利用提供了基础信息．

三叶 五叶木通提取物药效及对药酶影响的比较研究

目的:比较三叶木通[Akebia trifolia ta(Thunb.)Koidz,简称AK]和五叶木通[Akebia quina ta(Thunb)Decne,简称AD]水提物抗炎、利尿及抗菌作用的同时,探索性观察了两种木通对细胞色素P4503A(CYP3A)活性和P-糖蛋白(P-gp)水平的影响。方法:抗炎作用采用小鼠腹腔毛细血管通透法和小鼠耳肿胀法,观察其抗炎作用;利尿作用采用大鼠代谢笼法,观察其利尿作用;采用体外抑菌实验,观察其抑菌作用。用聚乙二醇制备肝微粒体,测定肝和小肠CYP3A活性;以免疫组化法检测肝和小肠组织P-gp水平。结果:两种木通均明显抑制小鼠腹腔毛细血管炎性渗出,抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀;并利尿和抑菌作用明显;三叶木通对肝脏CYP3A活性和P-gp水平有一定的抑制作用。与正常对照组相比差异显著(P<0.05);五叶木通对肝脏CYP3A活性和P-gp水平无明显作用,与正常对照组相比无统计学意义(P>0.05)。结论:两种木通抗炎、利尿及抑菌作用基本相等;三叶木通水提物可能是肝CYP3A和P-gp的抑制剂;但五叶木通对CYP3A和P-gp影响不明显。

三叶木通栽培条件下的生长结果习性

三叶木[Akebia trifoliata（Thunb）Koidz]是木通科木通属的一种营养价值较高的半落叶藤本野生果树。果实是一种品质优良的野生鲜食水果，但其种子多，果肉少，可食率较低，需要经过驯化选育栽培加以利用。从2005年起搜集野生三叶木通进行人工驯化栽培，观察其生长结果习性。结果：在人工栽培条件下果实最大单果重313．5g、最小97．7g、平均单果重78．1～244．1g，并初步掌握了其生长结果习性，为进一步生产栽培及育种打下了基础。

三叶木通总黄酮对急性肝损伤小鼠的保护作用及机制研究

目的:研究三叶木通总黄酮对四氯化碳(CCl_4)诱发的急性肝损伤小鼠的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法:各组小鼠灌胃给予药物或溶剂干预10 d后,腹腔注射0.1%CCl_4花生油溶液建立急性肝损伤模型。生化法检测小鼠血清中门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的含量,蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测肝组织中核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达,HE染色观察肝组织病理学改变。结果:与模型组比较,三叶木通总黄酮能显著降低小鼠血清AST、ALT活性,提高血清SOD、GSH-Px活性,降低血清MDA及肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6含量,下调肝组织NF-κB蛋白表达,并改善肝组织病变。结论:三叶木通总黄酮对CCl_4诱导的急性肝损伤小鼠具有保护作用,其保肝作用机制可能与抗氧化和抑制炎症反应有关。

三叶木通叶表面结构的环境扫描电镜观察

利用环境扫描电镜,观察了野生三叶木通叶表面结构特征。结果表明:表皮细胞形状无规则;叶上表皮外切向面分布有明显的角质膜,加厚的角质膜表面覆盖有不同形态的蜡质,且在不同样品间有较大差异;叶下表面具三角状以及乳头状突起;气孔器为不规则型,只分布在叶下表面,散生且取向不规则。

三叶木通种质资源形态多样性研究

收集全国三叶木通种质资源73份,测量各种质16个生物学性状,运用SPSS软件对各形态指标进行方差分析和主成分分析,并对各种质进行聚类分析.方差分析结果表明,描述果实的各指标变异幅度最大,各种质间果实差异较大.主成分分析把16种形态学指标归结为果实因子、叶片因子、种子因子、果肉因子4个主成分.聚类分析把73份种质资源分为5大类.为三叶木通种质资源的收集整理以及优良种质的选育提供了重要的形态学依据.

三叶木通种子品质性状研究

目的探讨三叶木通种子品质对栽培用种价值的影响.方法用电子天平测定种子净度及饱满度,用水分仪测定种子含水量,通过发芽试验确定种子发芽率.结果三叶木通鲜种子的种子净度、百粒质量、千粒质量、含水量、生活力、发芽率及发芽势分别为98.7%、6.64 g、66.6 g、43.1%、94.5%、82.6%、52.8%;风干10、60 d时,三叶木通种子含水量分别为28.5%、7.8%,发芽率分别为64.3%、14.7%.结论三叶木通种子宜在30℃下清水浸种24 h,5～12℃室温下湿沙层积发芽,当种子含水量低于8%时,失去栽培用种价值.

三叶木通藤茎的咖啡酰奎尼酸类化学成分研究

目的：研究三叶木通藤茎的化学成分。方法：采用多种柱色谱进行分离纯化,采用ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR等波谱方法结合理化性质确定化学结构。结果：从三叶木通藤茎中分离得到6个咖啡酰奎尼酸类化合物,分别鉴定为：cryptochlorogenic acid methyl ester（1）、新绿原酸甲酯（2）、绿原酸甲酯（3）、3,5-二咖啡酰奎尼酸甲酯（4）、3,4-二咖啡酰奎尼酸甲酯（5）和4,5-二咖啡酰奎尼酸甲酯（6）。结论：化合物1~6均为首次从木通属植物中分离得到;化合物1、5、6对α-葡萄糖苷酶的活性具有显著的抑制作用。

三叶木通藤茎中三萜皂苷类成分积累动态的研究

目的：研究三萜皂苷类成分在三叶木通藤茎中的积累动态变化,以确定合适的采收时期和采收年限。方法：以同一生长条件下不同生长年限、不同采收时期的三叶木通藤茎为材料,用高效液相色谱法对其主要活性成分齐墩果酸和常春藤皂苷元的含量进行测定。结果：1~6年是三叶木通藤茎中齐墩果酸的积累期,7~8年的含量快速增长,至9年达到最高,10年其含量又迅速下降,10年以上的含量与1~6年的相比无明显差异;常春藤皂苷元的积累随生长年限无较大变化。结论：三叶木通藤茎的合适采收年限为8~9年。8年生三叶木通藤茎中齐墩果酸、常春藤皂苷元的含量均在9月上旬达到最高,综合考虑用药习惯和三萜皂苷含量,确定8月下旬至9月下旬为三叶木通的最适采收期。

三叶木通中总黄酮的提取工艺研究

目的:确定三叶木通总黄酮的最佳水浴提取工艺条件。方法:采用正交设计L(934)方法,考察乙醇浓度、提取时间、提取温度和乙醇倍量等因素对提取率的影响,用分光光度法测定含量。结果:用料液比:1∶25(g/mL)的70%的乙醇,提取温度为80℃,提取时间为1h,根中黄酮的提取效率较高。总黄酮含量为6.01%;平均回收率为99.66%。结论:本方法测定结果准确,重复性好,专属性强,可为三叶木通药材质量控制提供科学的依据。