鸡Akirin同源基因的克隆与组织表达分析

Akirin是最近被发现的,在果蝇和小鼠的免疫炎症反应和调控肌肉发生再生中起着重要作用的新基因.本实验采用电子克隆技术成功克隆获得了海兰褐鸡Akirin基因的全长编码序列.利用生物信息学方法对Akirin基因进行序列分析和预测,并利用半定量RT-PCR技术对雏鸡和成鸡的Akirin基因进行组织表达谱分析.结果表明,鸡Akirin同源基因可读框长576 bp,进化保守高,编码蛋白的氨基酸序列存在PFAM、RGS、TOP1Bc、UTG、HMG和low complexity sequence几种结构域,和蛋白激酶C磷酸化位点、酪氨酸激酶磷酸化位点和N端豆蔻酰化位点3个功能位点,同时在鸡Akirin的3′非翻译区预测到1个microRNA靶位点.Akirin在鸡的心、脾、脑等多种组织中广泛表达,推测鸡Akirin基因是一个可能具有多种功能作用的新基因.本研究将为深入研究鸡Akirin基因功能作用奠定基础.

家蚕微孢子虫感染BmN细胞的差异表达基因筛选及Akirin的原核表达

为探究家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,Nb)感染宿主细胞的分子机制,以感染Nb的家蚕卵巢上皮细胞(BmN)为材料,通过GeneFishing技术进行基因差异表达分析,发现感染Nb的BmN细胞有10个基因被诱导或抑制表达,这些差异表达基因功能涉及蛋白质合成、细胞信号转导、线粒体呼吸链电子传递、细胞能量代谢、细胞免疫及一些未知功能。运用RT-PCR方法克隆在感染Nb的BmN细胞中差异表达的免疫相关基因Akirin,获得一个长588 bp的完整ORF,编码195个氨基酸,预测蛋白质分子质量21.98 kD,等电点为8.97,属于碱性蛋白,该蛋白质经SignalP在线预测未见信号肽。通过原核表达获得家蚕Akirin的外源融合表达蛋白,为进一步研究家蚕Akirin在家蚕先天免疫系统中的功能奠定了基础。

Akirin基因研究进展

Akirin是近来发现的在骨骼肌生长发育和免疫反应中具有重要作用的基因。简要综述了akirin基因与免疫反应、骨骼肌发育和再生、myostatin基因和NF-κB因子的关系,同时分析了禽类akirin2基因的研究进展,最后对akirin基因的应用前景也进行了简单探讨,以期为akirin基因在医学和畜牧业中的深入研究和应用提供参考。

Akirin基因的研究进展

Akirin是最近在果蝇上发现的一高度保守的核蛋白,由201个氨基酸残基组成,在先天性免疫和肌肉再生中发挥重要的作用。本文主要综述了Akirin基因的发现、结构及其在不同动物组织中的分布等方面的研究进展。同时对Akirin基因在免疫调节、胚胎发育、肌肉再生中的作用进行了分析讨论。

德国小蠊Akirin基因的克隆及表达分析

Akirin基因是新近发现的在果蝇NF-κB依赖的Imd信号通路调控中不可或缺的转录因子。在除果蝇以外的昆虫中,Akirin基因是否参与Imd通路的调控,亦或对NF-κB依赖的Toll通路也有调控作用还未有报道。本研究旨在初步研究德国小蠊Blattella germanica中Akirin基因的基本特征、在不同组织中的表达模式及注射法RNAi实验对Akirin基因沉默效果,以期为Akirin基因功能的研究奠定基础。通过与已报道的其它昆虫的Akirin基因进行同源比对,利用RACE（rapid amplification of c DNA ends）技术,成功从德国小蠊中克隆到1个Akirin基因,该基因全长864 bp,开放阅读框（ORF）大小为543 bp,编码180个氨基酸。蛋白序列比对及进化树结果显示,Akirin基因有非常保守的核定位信号序列,且与内华达古白蚁Zootermopsis nevadensis的亲缘关系最近,同源性为86%。荧光定量PCR的结果表明Akirin基因在德国小蠊检测的4个组织中均有表达,但表达水平有差异,在血淋巴的表达水平最高,其次为脂肪体。通过注射法RNAi实验成功抑制了Akirin基因的表达水平,并且RNAi的效果随时间的延长而更强,在注射72 h后,Akirin基因m RNA的表达水平下降了90%。上述研究为Akirin基因的功能及德国小蠊防治研究提供了科学依据。

猪Akirin2基因的定位及其影响IL-1β和IL-6 mRNA表达的研究

本研究旨在研究猪新天然免疫相关基因Akirin2所表达的蛋白在细胞中的定位,以及在受到外源刺激物LPS刺激时,对细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达的影响。本试验用实验室构建好的pEGFP-Akirin2真核表达载体转染猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC),用激光共聚焦显微镜分析Akirin2在SUVEC的定位,并用LPS作为外源刺激物刺激转染Akirin2基因的细胞,荧光实时定量分析细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达量的变化。结果表明,Akirin2基因编码的蛋白严格定位于细胞核之内,并在核仁区有明显表达,在LPS刺激后,Akirin2基因对细胞因子IL-6和IL-1βmRNA表达量都具有明显上调作用。本研究证实了Akirin2蛋白的亚细胞定位及其对细胞因子表达的影响,为Akirin2基因的作用机制的进一步研究奠定了基础。

猪akirin2基因的克隆与真核表达

Trizol法从猪脾脏中提取总RNA,RT-PCR方法得到猪Akirin2的完整编码区,软件分析猪Akirin2的核酸序列与蛋白序列,进行染色体定位。将Akirin2构建到带有荧光标记的真核表达载体pEGFP-C1中,通过脂质体转染法将pEGFP-Akirin2转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVEC)中进行表达。结果表明,该序列编码203个氨基酸,猪akirin2基因定位于猪1号染色体,含有4个外显子,猪与牛的Akirin2蛋白高度同源。重组表达质粒pEGFP-Akirin2经双酶切鉴定和测序分析,表明构建成功,pEGFP-Akirin2转染SUVEC细胞后,经荧光检测证实转入的akirin2基因得到表达。研究结果为探讨猪Aki-rin2蛋白在免疫调控中的功能提供了基础数据。

猪akirin2基因的组织表达谱及序列分析

克隆猪的akirin2基因,并对该基因在猪的18个组织中的分布进行研究。猪akirin2基因编码区全长为612 bp(Gen Bank登录号KC140110.1),推测的氨基酸序列包含203个氨基酸,为酸性蛋白。利用BLAST工具对克隆到的猪akirin2基因序列与人、大鼠、小鼠、绵羊和牛的序列进行同源性比较。采用软件对氨基酸序列进行分析,用相关序列的比对结果进行系统进化树分析。组织分布结果显示,猪akirin2基因在脑组织中高表达,在淋巴、睾丸中表达量相对较低,在心脏、十二指肠、直肠、皮肤、胸腺中几乎检测不到该基因的表达。序列分析结果显示,猪akirin2基因与绵羊和牛的同源性最高,均为96%,与人、小鼠、大鼠的同源性分别为95%、91%、89%。氨基酸序列分析发现,存在1个10个肽的核定位信号序列19-PASPKRRRCA-28,推测的氨基酸序列的二级结构中含有2个a-螺旋。在重建的系统进化树上,几个不同物种的akirin2蛋白分成3支,结果表明猪akirin2与人、牛和羊的亲缘关系比其与小鼠和大鼠的近,与鸡的亲缘关系最远。

天府肉羊Akirin2基因的分子克隆、序列分析及组织特异性表达

Akirin2基因是一种核因子,是一个潜在的影响肉质性状的功能候选基因。为了更好地了解Akirin2基因的结构和功能,试验克隆了天府肉羊Akirin2基因cDNA。序列分析结果表明,天府肉羊Akirin2基因cDNA全编码序列（CDs）长579bp,编码192个氨基酸。对天府肉羊和其他物种Akirin2蛋白质序列构建系统进化树,结果发现,天府肉羊Akirin2与牛和绵羊Akirin2亲缘关系较近。RT-qPCR分析结果表明,Akirin2基因在心肌、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腿肌、腹肌和背最长肌中表达,其中,在脾脏、肺脏和肾脏中高表达,在肝脏、心肌、腿肌、腹肌和背最长肌中低表达。mRNA表达结果表明,Akirin2基因在1~12个月天府肉羊背最长肌中的表达水平呈先上升后降低的趋势。Western blotting分析结果显示,仅能在肺脏和骨骼肌中检测到Akirin2蛋白。