Akt/GSK-3β/Snail通路在TGF-β_1诱导A549/DDP细胞上皮间质转化中的作用

目的:通过观察转化生长因子β_1(TGF-β_1)诱导前后Akt/GSK-3β/Snail信号通路相关分子的表达情况,探讨A549/DDP细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的分子机制。方法:TGF-β_1(5μg/L)作用48 h,观察A549/DDP细胞的形态变化,并测定EMT标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达情况,评估TGF-β_1是否成功诱导A549/DDP细胞发生EMT。进一步将A549/DDP细胞分为TGF-β_1(+)组、TGF-β_1(-)组和LY294002组,应用Western blot法检测各组Akt/GSK-3β/Snail通路相关分子Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3βSer9和Snail的蛋白水平。结果:形态学观察可见TGF-β_1(+)组的细胞变得更加狭长,呈纺锤形,细胞间较为疏散,形态与间充质细胞相似。与TGF-β_1(-)组比较,TGF-β_1(+)组E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin蛋白表达上调(P<0.05);各组间Akt和GSK-3β的蛋白表达水平并无明显差别,TGF-β_1(+)组的p-Akt、p-GSK-3βSer9和Snail蛋白水平较TGF-β_1(-)组明显增强(P<0.05);PI3K抑制剂LY294002与TGF-β_1同时刺激细胞后,p-Akt、p-GSK-3βSer9和Snail的蛋白水平较TGF-β_1(+)组下调(P<0.05)。结论:TGF-β_1干预Akt/GSK-3β/Snail信号通路,促进Akt和GSK-3β的磷酸化,提高Snail的表达水平,诱导A549/DDP细胞发生EMT。

Pes1通过PI3K/AKT/GSK-3β信号通路对胆汁淤积性肝病小鼠的作用

目的探讨Pescadillo同源蛋白1(Pes1)以及PI3K/AKT/GSK-3β信号通路中的蛋白在胆汁淤积性肝病小鼠中的表达及其对疾病的影响。方法利用喂食3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶(DDC)的C57BL/6为实验组,正常喂饲的C57BL/6为对照组。首先测试小鼠血清中生化指标的水平。Western blot法检测小鼠肝脏Pes1和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/AKT)/糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)信号通路中蛋白的表达,同时采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测Pes1 mRNA的表达水平。结果血清中总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(AKP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)水平在胆汁淤积性肝病小鼠中高于对照组。Pes1 mRNA和蛋白水平在胆汁淤积性肝病小鼠中均低于正常组小鼠,PI3K/AKT/GSK-3β信号通路中的磷酸化蛋白水平在胆汁淤积性肝病小鼠均明显低于对照组小鼠。结论Pes1在胆汁淤积性肝病小鼠中低表达,降低的Pes1使PI3K/AKT/GSK-3β信号通路失活,使其信号通路中PI3K和AKT的磷酸化蛋白水平依次降低,最终下调了磷酸化GSK-3β的表达,使磷酸化GSK-3β对肝细胞凋亡的抑制、减轻细胞损伤的作用减弱,进而加重了胆汁淤积性肝病的进程。

烯醇化酶-α和C-MYC启动子结合蛋白-1基于PI3K/Akt通路调控肝细胞癌发生发展的研究进展

烯醇化酶-α(ENO1)是一种具有组织特异性表达的糖酵解关键酶,其参与糖酵解并影响此进程,C-MYC启动子结合蛋白-1(MBP-1)可抑制癌基因C-MYC的表达。目前发现,两者由同一基因编码表达,并且其表达调控与PI3K/Akt通路有着复杂的关系。ENO1和MBP-1可通过调控PI3K/Akt通路,在肝细胞癌(HCC)等肿瘤的进展和抑制中发挥重要作用。本文就ENO1和MBP-1的功能、表达调控、与PI3K/Akt通路的关系及基于该通路对HCC等癌症的作用机制进行简要综述,从而为HCC发生和进展的可能分子机制和可用于调控该机制的分子靶点提供一定的理论依据,并且为未来对于HCC的有效治疗提供新思路。

PI3K／AKT／GSK-3β信号通路在转录后水平调控ICAM-1的表达

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶（PBK）／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（AKT）／糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）信号通路调控脂多糖（LPS）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）及其机制。方法①LPS（10mg／L）刺激HUVEC0、6、12、24h或者0、4、8、12h或者0、30、60、120min后，Western blot检测ICAM-1、PI3K、P—PI3K、AKT、P—AKT、GSK-3β和P—GSK-3β的表达，实时荧光定量PCR（qPCR）检测ICAM-1 mRNA的表达。②将P13K、AKT和GSK-3B的siRNA分别转染HUVEC，转染浓度梯度为40、80和100nmol／L，对照组转染control siRNA，Western blot检测P13K、AKT和GSK-3①总蛋白的表达。③将PI3K、AKT和GSK-3β的siRNA分别转染HUVEC，对照组转染control siRNA，LPS刺激细胞30min、1h、8h和12h，Westernblot检测P—AKT、P—GSK-3B和ICAM-1的表达，qPCR检测ICAM-1mRNA的表达。④转染方法同上，LPS刺激HUVEC8h后加入放线菌素D（ActD）5ms／L抑制转录，于0、1、2、5和4h收集细胞，qPCR检测ICAM—lmRNA的表达并计算mRNA的半衰期。结果①LPS刺激HUVEC后ICAM-1的表达12h达高峰，与其他时间点有显著差异（P〈0．05或P〈0．01）；LPS刺激HUVEC后ICAM-1mRNA的表达8h达高峰，与其他时间点有显著差异（P〈0．05或P〈0．01）；LPS刺激HUVEC后PI3K、AKT和GSK-3B蛋白的磷酸化水平分别在刺激30min、1h和1h后达高峰。②PI3K、AKT和GSK-3B转染组的最适转染浓度为100nmol／L。③PI3K转染组的P—AKT和P—GSK-3β表达显著下降（P〈0．01），AKT转染组P—GSK-3β表达显著下降（P〈0．01）；PBK和AKT转染组的ICAM-1的蛋白和mRNA表达均显著升高（P〈0．05或P〈0．01），相反GSK-3β转染组ICAM-1的蛋白和mRNA表达均显著下降（P〈0．01）。④PI3K、AKT的沉默表达显著延长ICAM-1的mRNA半衰期（P〈0．01），相反GSK-3B的沉默表达显著缩短ICAM-1的mRNA半衰期（P〈0．01）。结论LPS通过激活PI3K／AKT／GSK-3β信号通路负向调控HUVEC表达ICAM-1。PBK、AKT和GSK-3B在转录后水平调控ICAM-1mRNA的稳定性。

miR⁃203a⁃3p通过靶向LASP1介导Akt/GSK⁃3β/Snail信号通路调控肝癌细胞生物学行为

目的研究miR-203a-3p对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞生物学行为的影响及其相关分子机制。方法将miR-203a-3p模拟物(miR-203a-3p mimics)及阴性对照(miR-NC mimics)、LIM和SH3蛋白1(LIM and SH3 protein 1,LASP1)过表达质粒(pcDNA-LASP1)及阴性对照质粒(pcDNA-NC)分别转染至HepG2细胞。以qRT-PCR法检测细胞miR-203a-3p、LASP1 mRNA表达情况,CCK-8法和异体移植瘤实验分析细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测miR-203a-3p与LASP1的靶向关系,Western blot法检测细胞中LASP1、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化Ak(t phosphorylated Akt,p-Akt)、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(phosphorylated GSK-3β,p-GSK-3β)、Snail表达情况。结果与miR-NC组相比,miR-203a-3p组HepG2细胞增殖活性、迁移率、侵袭数目、LASP1 mRNA和蛋白表达量、p-Akt/Akt和p-GSK-3β/GSK-3β比值、Snail蛋白表达量均显著降低,小鼠移植瘤体积和质量显著减少,细胞凋亡率显著升高(均P<0.01)。Targetscan软件预测显示,miR-203a-3p与LASP1存在靶向关系;与LASP1-Wt+miR-NC组比较,LASP1-Wt+miR-203a-3p组相对荧光素酶活性显著下降(P<0.001)。与miR-203a-3p+pcDNA-NC组比较,miR-203a-3p+LASP1组HepG2细胞增殖活性、迁移率、侵袭数目、p-Akt/Akt和p-GSK-3β/GSK-3β比值、Snail蛋白表达量均显著升高,小鼠移植瘤体积和质量显著增加,细胞凋亡率显著降低(均P<0.01)。结论miR-203a-3p可能通过靶向抑制LASP1表达调控Akt/GSK-3β/Snail信号通路活性,从而调控HCC细胞生物学行为。

PI3K/AKT/GSK3β信号通路参与腺苷A1R介导异丙酚对缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用

目的:探讨PI3K/AKT/GSK-3β信号通路参与异丙酚对缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及机制。方法:健康雄性SD大鼠72只,所有大鼠参照Zea Longa法建立局灶性脑缺血再灌注损伤的模型。随机分成6组(n=12),A-假手术组,B-模型组(MCAO),C-异丙酚组,D-异丙酚+腺苷A1R拮抗剂组(DPCPX),E-异丙酚组+PI3K特异性抑制剂(LY294002),F-异丙酚+GSK-3β抑制剂组(SB216763),观察大鼠术后24 h神经功能评分情况;LDF监测插栓前后脑血流变化;采用TTC染色法检测各组大鼠的脑梗死体积;用HE染色方法观察大鼠脑组织形态学改变;免疫组织化学法检测Bcl-2阳性细胞表达;采用TUNEL检测各组大脑脑皮质缺血周围神经元凋亡细胞的百分率。结果:与A组比较,B、C、D、E及F组大鼠行为学、脑梗死体积、细胞凋亡率、Bcl-2蛋白表达量均增加(P<0.05);与C组比较,B、D、E组大鼠行为学评分,脑梗死体积及细胞凋亡率均明显增加,Bcl-2蛋白表达量均明显减少(P<0.01),F组Bcl-2蛋白表达量却增加,细胞凋亡率降低(P<0.05),行为学评分减少、梗死体积减少(P<0.05)。结论:腺苷A1R介导的异丙酚对缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用可能与PI3K/AKT/GSK-3β信号转导通路有关。

Bmi-1基因与PI3K／AKT信号通路关系的研究进展

B细胞特异单克隆鼠白血病病毒整合位点基因（B cell-specific MLV integration site-1，Bmi-1），又被称为干细胞更新因子，是荷兰癌症中心于1991年在寻找能与癌基因c-myc相互协同引起转基因小鼠患上淋巴瘤的实验中发现的。

加减薯蓣丸对血管性痴呆模型大鼠海马区GSK-3β、CyclinD1表达的影响

目的观察加减薯蓣丸对血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠海马区糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响,探讨其防治VD的机制。方法将40只SPF级雄性Wistar大鼠分为正常组、模型组、西药组和中药组,每组10只。采用改良双侧颈总动脉结扎法复制VD模型。中药组、西药组分别给予加减薯蓣丸、尼莫地平灌胃,正常组和模型组均给予生理盐水灌胃,均连续灌胃6周。光镜下观察大鼠海马神经细胞的组织形态学变化,Western-blot法检测海马区GSK-3β表达水平,免疫荧光法检测海马区Cyclin D1表达水平。结果光镜下可见中药组、西药组VD大鼠海马神经细胞病变较模型组明显减轻。Western blot和荧光免疫法显示,中药组、西药组VD大鼠海马区GSK-3β水平较模型组显著降低(P<0.05),海马区Cyclin D1表达水平较模型组明显升高(P<0.05);中药组与西药组GSK-3β、Cyclin D1表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论加减薯蓣丸可能通过激活Akt通路抑制GSK-3β表达,上调Cyclin D1表达,从而保护VD大鼠海马神经细胞。

miR-20a靶向CCND1作用PI3K/AKT信号通路抑制皮肤鳞状细胞癌的发展

目的:探究miR-20a与CCND1蛋白在皮肤鳞状细胞癌(CSCC)中的作用关系,以及其可能涉及的信号通路分子机制。方法:分别收集皮肤鳞状细胞癌患者的皮肤癌组织及其邻近正常皮肤组织,采用qRT-PCR分析组织中miR-20a和CCND1基因表达水平。为探究miR-20a对CSCC细胞的影响,将SCL-1细胞分为对照组(不转染)、miR-NC组(转染miR-NC)和miR-20a mimics组(转染miR-20a mimics);为探究CCND1与PI3K/AKT信号通路的关系,将SCL-1细胞分为对照组(不转染)、si-NC组(转染si-NC)和si-CCND1组(转染si-CCND1);为探究miR-20a与CCND1间的作用关系及对CSCC细胞的影响,将SCL-1细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-20a mimics组(转染miR-20a mimics)、mimics+pcDNA组(共转染miR-20a mimics和pcDNA)和mimics+CCND1组(共转染miR-20a mimics和pcDNA-CCND1)。采用Western blot分析p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K和GSK-3β蛋白表达水平;采用MTT检测细胞增殖情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Transwell分析细胞迁移和侵袭情况;采用双荧光素酶报告基因检测分析miR-20a与CCND1的靶向关系。结果:CSCC癌组织和SCL-1中miR-20a均低表达,CCND1高表达。与对照组和miR-NC组比较,miR-20a mimics组SCL-1细胞增殖水平以及侵袭和迁移数量均降低(P<0.05),SCL-1细胞凋亡水平升高(P<0.05),PI3K和AKT蛋白磷酸化水平降低(P<0.05)。TargetScanHuman数据库分析和双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-20a与CCND1存在靶向作用关系。与对照组和si-NC组比较,si-CCND1组SCL-1细胞中CCND1和GSK-3β蛋白表达水平以及PI3K和AKT蛋白磷酸化水平均降低(P<0.01)。与miR-20a mimics组或mimics+pcDNA组比较,mimics+CCND1组SCL-1细胞增殖水平以及侵袭和迁移数量均升高(P<0.05),SCL-1细胞凋亡水平降低(P<0.05),PI3K和AKT蛋白磷酸化水平均升高(P<0.05)。结论:过表达miR-20a可能通过靶向抑制CCND1的表达而抑制PI3K/AKT信号通路的激活,从而抑制CSCC细胞的增殖、侵袭和迁移,并促进癌细胞凋亡。

基于网络药理学、分子对接及细胞实验验证探讨二至丸治疗多发性骨髓瘤的作用机制

【目的】基于网络药理学、分子对接及细胞实验验证探讨二至丸治疗多发性骨髓瘤(MM)的潜在作用机制。【方法】应用网络药理学、分子对接筛选药物-疾病-靶标-通路关键指标。培养多发性骨髓瘤细胞株RPMI-8226,给予二至丸干预,采用膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)染色法检测细胞凋亡,Transwell实验测定细胞侵袭能力,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测蛋白激酶B(Akt)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、c-MycmRNA表达,Western Blot法检测细胞Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、CCND1、c-Myc、GSK-3β、磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK-3β)蛋白表达。【结果】获得二至丸14个有效成分。二至丸治疗MM涉及靶点142个,通路富集分析结果显示关键靶点可能主要集中在癌症通路、脂质与动脉粥样硬化等。分子对接结果显示,木樨草素和槲皮素与GSK-3β有较好的结合活性及稳定性。进一步细胞实验验证发现,与空白组比较,二至丸低、中、高剂量组细胞凋亡率显著升高,细胞侵袭数减少,GSK-3β的mRNA和蛋白水平显著升高,CCND1、Akt和c-Myc的mRNA和蛋白水平显著降低,呈剂量依赖性,其中,中、高剂量组差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。【结论】二至丸对MM的治疗作用可能是通过木犀草素和槲皮素等关键活性成分,促进GSK-3β表达,并抑制Akt/GSK-3β/CCND1/c-Myc信号通路来实现的。

miR-377-5p通过抑制AKT1/GSK-3β通路增强食管癌细胞TE-1的放射敏感性

目的探究miR-377-5p对食管癌细胞TE-1放射敏感性的影响及机制。方法TE-1细胞转染miR-377-5pmimic和miR-377-5pmimic NC构建过表达miR-377-5p细胞。对转染后的TE-1细胞照射后采用平板集落形成实验检测细胞放射生物学参数(D0、Dq、SF2),Transwell小室法检测细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,CCK8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,免疫印迹检测AKT1和GSK-3β磷酸化水平。结果2、4、6、8 Gy照射的集落形成率均显著下降(P<0.05),且在同一剂量下miR-377-5pmimic组细胞集落形成率均显著低于miR-377-5pmimic NC组(P<0.05)。相比于miR-377-5pmimic NC组,miR-377-5pmimic组D0、Dq、SF2均显著下降(P<0.05),放射增敏比为1.34(D0值比);0 Gy照射后细胞侵袭、迁移、增殖能力显著下降,细胞凋亡水平显著上升,细胞周期被阻滞于G1期,AKT1和GSK-3β磷酸化水平显著下降(P<0.05);4 Gy照射后细胞侵袭、迁移、增殖能力下降,细胞凋亡水平显著上升,G1期显著延长,AKT1和GSK-3β磷酸化水平亦显著下降(均P<0.001)。结论miR-377-5p能够增加食管癌细胞TE-1的放射敏感性,其机制可能是抑制AKT1/GSK-3β信号通路。

IGF-1通过Akt/GSK-3β信号通路调控子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖及迁移能力的影响及机制分析

目的探究IGF-1对子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖及迁移能力的影响及其作用机制。方法Ishikawa细胞经不同浓度的IGF-1处理后,采用MTT法检测细胞增殖能力,划痕法检测细胞迁移能力以及采用ELISA法检测Akt/pAkt、GSK-3β/pGSK-3β蛋白表达情况。结果经IGF-1处理后的Ishikawa细胞增殖能力及迁移能力均受到提高,且呈现剂量依赖性趋势;随着IGF-1浓度的提高,Akt/pAkt表达发生显著性上升(P<0.05),GSK-3β/pGSK-3β表达发生显著性下降(P<0.05)。结论IGF-1可能通过激活Akt/GSK-3β信号通路实现的促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖及迁移作用。

肝脏胰岛素信号通路对改善胰岛素抵抗的影响

胰岛素抵抗（Insulin resistance，IR）是引起人体一系列代谢综合征的一种常见病理基础，容易导致肥胖、高血压、高血脂、葡萄糖耐量受损以及2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus，T2DM）等症状的产生。T2DM又是一种由胰岛素敏感性降低，胰岛B细胞功能异常，胰岛素抵抗等引起的代谢紊乱性疾病。

NADPH氧化酶4调控组蛋白脱乙酰酶4在内皮素1诱导的体外大鼠心肌细胞肥大中的作用

目的:探讨NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)在体外大鼠心肌细胞肥大中的作用及其信号机制。方法:分离SD乳大鼠原代心肌细胞,通过内皮素1(endothelin-1,ET-1;0.1μmol/L)诱导建立体外大鼠心肌细胞肥大模型,采用NOX4抑制剂GKT137831抑制肥大心肌细胞中NOX4表达。实验分为空白对照组、GKT137831组、ET-1组和GKT137831+ET-1组。采用RT-qPCR检测心肌细胞肥大标志物心房钠尿因子(atrial natriuretic factor,ANF)和β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)的mRNA表达水平。采用二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)染色检测心肌细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。采用Western blot法检测NOX催化亚基NOX4和调节亚基p47^(phox)的蛋白表达,以及蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)、糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)和组蛋白脱乙酰酶4(histone deacetylase 4,HDAC4)的磷酸化水平。结果:ET-1可以诱导体外大鼠心肌细胞肥大,GKT137831显著抑制了ET-1诱导的心肌肥大,降低了心肌细胞表面积及肥大标志物ANF和β-MHC的mRNA表达水平(P<0.01)。GKT137831抑制了NOX中催化亚基NOX4和调节亚基p47^(phox)的蛋白表达(P<0.05或P<0.01),降低了ET-1诱导的心肌细胞中ROS的生成(P<0.05或P<0.01)。GKT137831抑制了ET-1诱导的心肌细胞中Akt、GSK-3β和HDAC4蛋白的磷酸化(P<0.05或P<0.01)。结论:抑制NOX4减轻了ET-1诱导的体外大鼠心肌细胞肥大,该作用可能与其抑制肥大信号通路Akt/GSK-3β的激活,进而抑制转录因子HDAC4蛋白的磷酸化有关。

远志汤有效成分对APP/PS1小鼠氧化损伤的保护作用机制研究

目的通过观察远志汤有效成分即β-细辛醚+远志皂苷(TEN)对APP/PS1双转基因小鼠磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成激酶3β(GSK-3β)信号通路的调控,探讨远志汤防治阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法将3月龄APP/PS1双转基因小鼠分为模型组、盐酸多奈哌齐组(0.33 mg/kg·d)、β-细辛醚+TEN低、中和高剂量组[18.5、37.0和74.0 mg/(kg·d)],选同月龄C57BL/6小鼠为空白对照组,采用Morris水迷宫法和新物体识别实验检测小鼠的学习记忆能力,采用分光光度法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)活性,以及丙二醛(MDA)含量。采用Western blot检测GSK-3β、Akt,以及两者磷酸化蛋白表达。结果β-细辛醚协同TEN可增强APP/PS1双转基因小鼠的学习记忆功能,同时还能升高SOD、CAT和GSH-PX的活性,降低MDA含量,诱导Akt的蛋白表达,抑制GSK-3β的表达。结论远志汤有效成分即β-细辛醚+TEN可通过调控PI3K/Akt/GSK-3β信号通路,对APP/PS1双转基因小鼠氧化应激损伤发挥保护作用。

土木香内酯对人胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨土木香内酯对人胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人胶质瘤U251细胞,取对数期生长的U251细胞分为空白对照组和土木香内酯(浓度分别为2.5、5.0、10.0μmol/L)组,每组各10个复孔。使用MTT法检测U251细胞的增殖抑制率,采用流式细胞术检测U251细胞的凋亡率,免疫印迹法检测PDK1/Akt/GSK3β蛋白表达,使用RTPCR检测c-Myc, Cyclin D1 mRNA的表达水平。结果随土木香内酯浓度增加,U251细胞增殖抑制率明显增高(P<0.05),细胞调亡率明显增高(P<0.05)。与空白对照组相比,木香内酯组U251细胞PDK1、Akt和GSK3β蛋白表达水平均无明显差异(P>0.05),但PDK1、Akt和GSK3β蛋白的磷酸化水平均显著降低(P<0.05)。随着土木香内酯浓度的增加,U251细胞c-Myc、CyclinD1mRNA的表达水平明显降低(P<0.05)。结论土木香内酯抑制人胶质瘤U251细胞的增殖并促进其凋亡,其作用机制可能是通过调节PDK1/Akt/GSK3β信号通路有关,且在一定范围内呈浓度依赖性。

基于网络药理学研究活血调脂方对糖尿病性脂肪肝糖脂代谢的作用

目的 基于网络药理学分析活血调脂方对糖尿病性脂肪肝的通路调节机制,并通过体外实验对关键通路进行验证。方法 收集活血调脂方的化学成分并通过SwissADME筛选出有效成分,对有效成分进行靶点预测;从DisGeNET、DrugBank、OMIM、TTD获得与糖尿病性脂肪肝有关的疾病基因;构建有效成分-靶点-疾病网络图,对靶点基因进行GO功能和KEGG富集分析,并对关键成分和靶点进行分子对接验证。基于靶点基因在通路中的分布,用活血调脂方干预HepG2细胞疾病模型进行体外验证。结果 KEGG富集得到的非酒精性脂肪性肝病、胰岛素抵抗、PPAR信号通路与疾病关系最密切。分子对接显示关键成分和靶点结合稳固。体外实验显示,与模型组比较,活血调脂方能增加细胞葡萄糖消耗(P<0.05),改善胰岛素敏感性(P<0.05),降低TG水平(P<0.05),减少脂质沉积,降低p-IRS-1、SREBP-1C、SOCS-3蛋白表达(P<0.05),升高p-Akt、p-GSK-3β、Adiponectin、PPARγ蛋白表达(P<0.05)。结论 活血调脂方通过IRS-1/AKT/GSK-3β信号通路改善胰岛素信号传导,并且通过下调SREBP-1C、SOCS-3蛋白表达,上调Adiponectin、PPARγ蛋白表达调节糖脂代谢和改善胰岛素抵抗,进而达到治疗糖尿病性脂肪肝的作用。