PGE2/PGE2-R介导的RAS/ERK及PI3K/AKT信号途径与子宫肌瘤发病机制的研究

目的探讨前列腺素E2(PGE2)/前列腺素E2受体(PGE2-R)介导的RAS/ERK及PI3K/AKT信号途径与子宫肌瘤发病机制的关联。方法收集30例子宫肌瘤和其邻近正常的平滑肌组织,Real-time PCR检测样本PGE2-R(EP1)表达,Western blot检测PGE2和PGE2-R(EP1)的表达;培养子宫肌瘤原代细胞,分别加入PGE2-R(EP1)抑制剂sc-51322或激动剂17-PT-PGE2,分为原代细胞组、原代+sc-51322组和原代+17-PT-PGE2组;采用CCK8检测细胞增殖;RT-PCR检测增殖细胞核抗原(PCNA)、转化生长因子β(TGF-β)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)的表达;Western blot检测PGE2、PGE2-R(EP1)、PCNA、TGF-β、IGF-1、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、p-ERK1/2的表达。结果子宫肌瘤的PGE2-R(EP1)的mRNA表达量显著高于平滑肌组织(P<0.01)。子宫肌瘤组织PGE2和PGE2-R(EP1)的蛋白表达量亦显著高于正常平滑肌组织(P<0.01)。在培养72 h后,与原代细胞组比较,原代+sc-51322组细胞增殖受到显著抑制(P<0.01),而原代+17-PT-PGE2组中细胞的增殖活性显著增加(P<0.01)。原代+sc-51322组中细胞PCNA、TGF-β、IGF-1 mRNA表达量显著低于原代细胞组,原代+17-PT-PGE2组中细胞PCNA、TGF-β、IGF-1 mRNA表达量显著高于原代细胞组。原代+sc-51322组中的细胞PGE2、PGE2-R(EP1)、PCNA、TGF-β、IGF-1、p-AKT和p-ERK1/2蛋白表达量显著低于原代细胞组,原代+17-PT-PGE2组PGE2、PGE2-R(EP1)、PCNA、TGF-β、IGF-1、p-AKT和p-ERK1/2蛋白表达量显著高于原代细胞组(P<0.01)。结论 PGE2和PGE2-R(EP1)通过介导的RAS/ERK及PI3K/AKT信号途径来参与调控子宫肌瘤发病。

受体诱导一氧化碳经PI3 K/Akt信号途径抑制冷缺血再灌注诱导的移植心细胞凋亡

目的 观察受体诱导一氧化碳（CO）对移植心冷缺血再灌注（I/R）损伤中细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法 以BALB/C小鼠建立同系移植心冷I/R损伤模型.受体麻醉前3 h以二氯甲烷（MC）500 mg/kg灌胃诱导CO（MC组,n=12）,或橄榄油灌胃（IR组,n=12）;在MC组的基础上受体在移植心恢复血供前1 h腹腔注射PI3K抑制剂LY294002（40 mg/kg,LY组,n=10）或二甲亚砜（DMSO组,n=10）;检测移植后3、24 h移植心细胞凋亡指数（AI）、磷酸化Akt（p-Akt）蛋白、bcl-2与bax蛋白表达比值;设正常对照组（N组,n=5）.结果 受体以MC灌胃后血液中碳氧血红蛋白（COHb）浓度与心肌组织CO含量均在3 h达到峰值,分别为（9.82±0.84）%和（2.25±0.08）pmol/mg;与IR组比较,MC组明显降低移植心AI[3 h：（8.65±2.01）%比（19.28±4.94）%,P＜0.01;24 h：（5.82±2.36）%比（10.54±3.66）%,P＜0.05]、激活Akt蛋白（3 h：P＜0.01;24 h：P＜0.05）、上调bcl-2/bax比值（3 h：1.97±0.16比0.46±0.07,P＜0.01;24 h：1.89±0.10比0.51±0.04,P＜0.01）;与MC组比较,LY组明显增加AI[3 h：（17.95±4.92）%,P＜0.01;24 h：（9.75±3.14）%;P＜0.01]、抑制Akt蛋白激活（P＜0.01）、下调bcl-2/bax比值（3 h：0.47±0.06,P＜0.01;24 h：0.52±0.03,P＜0.01）;DMSO组与MC组的各个指标差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 受体诱导C0能明显抑制冷I/R诱导的移植心细胞凋亡,其机制可能与通过PI3K/Akt信号途径上调bcl-2/bax比值有关.

PI3K/Akt信号途径在二氮嗪抑制缺氧-复氧大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡中的意义

目的研究磷脂酰肌醇-3-激酶/Akt(PI3K/Akt)信号途径在二氮嗪抑制缺氧-复氧(H-R)大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)凋亡中的意义。方法将培养的SD大鼠MMECs随机分为正常对照组(C组)、缺氧-复氧组(H-R组,缺氧2h复氧2h)、二氮嗪+缺氧-复氧组(DZ组,二氮嗪100μmol/L预处理2h+缺氧2h复氧2h)、PI3K特异性阻滞剂LY294002+二氮嗪+缺氧-复氧组(LY294002组,LY294002 100μmol/L预处理2h+二氮嗪100μmol/L预处理2h+缺氧2h复氧2h)。Hoechst染色观察凋亡细胞结构,Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot分别检测Akt的mRNA和蛋白表达水平。结果与C组比较,H-R组细胞凋亡率升高,Akt mRNA和蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01);与H-R组比较,DZ组细胞凋亡率降低,AktmRNA和蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01);与DZ组比较,LY294002组细胞凋亡率升高,AktmRNA和蛋白表达减少(P<0.01)。结论 H-R损伤引起MMECs凋亡。线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道(mito-KATP)开放后通过PI3K/Akt信号途径能部分抑制该作用。

TRPM7通过PI3K/AKT/ERK信号途径影响脑胶质瘤细胞增殖、上皮-间质转化

目的探讨沉默M型顺时受体电位通道7(melastatin transient receptor potential channel 7,TRPM7)对脑胶质瘤细胞增殖、上皮-间质转化的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR和Western blot检测TRPM7在人正常星形胶质HA1800细胞株以及脑胶质瘤细胞株(U251、U87、U373)中的表达。将U251细胞分为U251组(未转染的U251细胞)、U251/shNC组、U251/shTRPM7组,然后采用qRT-PCR和Western blot检测TRPM7的表达,细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;细胞免疫荧光实验检测E-cadherin和Vimentin表达情况;Western blot检测PI3K/AKT/ERK信号途径相关蛋白的表达情况。结果与HA1800细胞比较,TRPM7在脑胶质瘤细胞系中高表达(P<0.05);沉默TRPM7后,U251细胞中TRPM7表达降低(P<0.001),细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降(P<0.01);E-cadherin表达增加(P<0.001),Vimentin表达降低(P<0.01);PI3K蛋白表达水平下调(P<0.01),AKT和ERK1/2蛋白磷酸化程度明显降低(P<0.01)。结论沉默TRPM7可抑制U251细胞增殖、迁移和侵袭能力及上皮-间质转化,其作用机制可能与激活PI3K/AKT/ERK信号途径有关。

AKT信号转导途径在尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨AKT信号途径在尼古丁诱导大鼠气道平滑肌细胞增殖中发挥的作用。方法 (1)Western blot检测不同浓度尼古丁作用原代培养的大鼠气道平滑肌细胞不同时间段,AKT/磷酸化AKT、GSK3β/磷酸化GSK3β在气道平滑肌细胞上的表达水平;(2)细胞分析计数仪检测AKT抑制剂和GSK3β抑制剂对尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞增殖活性的影响。实验分组:对照组、尼古丁单独作用组、AKT抑制剂LY294002组、AKT抑制剂LY294002+尼古丁组、GSK3β抑制剂SB216763组、GSK3β抑制剂SB216763+尼古丁组;(3)EDU摻入法测定AKT抑制剂和GSK3β抑制剂对尼古丁处理大鼠气道平滑肌细胞DNA复制活性的影响,实验分组同上。对照组应用1%胎牛血清培养基,各抑制剂和尼古丁应用1%胎牛血清培养基配制,分别在尼古丁加入前30 min应用。结果 (1)大鼠气道平滑肌细胞上有AKT和GSK3β的表达;尼古丁引起AKT和GSK3β的快速磷酸化,且尼古丁促进AKT和GSK3β的磷酸化作用具有时间依赖性;(2)细胞计数法显示,AKT抑制剂与尼古丁联合组细胞计数明显低于尼古丁单独作用组,差异有统计学意义(P<0.05);(3)EDU摻入法测定显示,AKT抑制剂与尼古丁联合组细胞DNA复制水平明显下降,与尼古丁单独作用组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞的增殖作用依赖AKT/GSK3β信号途径。

PI3K/AKT/mTOR信号转导途径在嗜铬细胞瘤发生和发展中的作用及其联合靶向治疗

PI3K/AKT/m TOR信号途径在嗜铬细胞瘤的发生和发展中发挥着重要的作用。单独抑制其中某个靶点却会导致对于上游靶点的反馈激活以及平行信号途径的激活,导致肿瘤对针对这一信号途径抑制剂的抵抗。该文就PI3K/akt/m TOR信号通路在嗜铬细胞瘤发生和发展中的作用以及针对这一信号通路的靶向治疗,特别是多靶点多信号途径的联合靶向治疗的最新研究进展进行综述。

二氢杨梅素通过抑制Akt/stat3信号途径的活化和HMGB1的表达降低胃癌细胞的增殖和迁移能力

目的探讨二氢杨梅素(DHM)对胃癌细胞增殖和迁移的抑制作用及潜在分子机制。方法BGC-823细胞常规培养,实验分为对照组和不同浓度的DHM处理组。不同浓度的DHM(0、40、60、80、100、120μg/mL)处理细胞24 h,CCK-8实验检测细胞存活率;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Tranwell实验检测细胞迁移能力;ELISA检测MMP-2和MMP-9的表达水平;Western blot检测N-cadherin、E-cadherin、CyclinD1、CyclinE1、HSP70、HMGB1的表达及Akt、stat3的磷酸化。结果CCK-8表明,DHM浓度依赖性的抑制胃癌细胞的存活;克隆形成实验显示,DHM处理组,细胞克隆数明显低于与对照组(P<0.05);Transwell结果发现,DHM处理组,迁移的细胞数量明显低于对照组(P<0.05);Western blotting结果表明,DHM能够抑制周期蛋白Cyclin D1,E1和间质细胞标志蛋白N-cadherin的表达,增强上皮细胞标志蛋白E-cadherin的表达;明显抑制Akt和stat3的磷酸化和HMGB1的表达;ELISA结果显示,DHM浓度依赖性的抑制MMP-2,MMP-9的水平(P<0.05)。结论DHM通过抑制Akt/stat3信号途径的活化以及HMGB1的表达,抑制胃癌细胞的增殖和迁移。

不同时间的热处理对大鼠肌肉Akt/mTOR信号途径的影响

热处理会诱导骨骼肌中肌肉蛋白的合成及肌肉肥大,同时刺激细胞信号途径.另外,有报道表明38℃以上的热处理以温度依赖性方式激活细包内信号途径.然而,骨骼肌细胞中热刺激对信号途径的持续性影响方面鲜有报道.因此,分析了热处理对大鼠骨骼肌中信号途径的作用.利用Western blot技术检测热处理后不同时间点(30,60和90min)的腓肠肌及比目鱼肌中Akt/mTOR信号途径蛋白Akt,mTOR,p70S6K及4E-BP1的磷酸化水平及热激蛋白HSP72的表达水平.结果表明,Akt及mTOR的磷酸化水平没有变化,磷酸化的p70S6K及4E-BP1水平有所上调,而热激蛋白HSP72的水平有所下调.

白花前胡合剂对脑缺血再灌注大鼠PI3-K/AKt信号传导途径的影响

目的探讨白花前胡合剂对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血脑组织PI3-K/AKt信号传导途径的影响。方法将大鼠随机分为正常组,假手术组,模型组、白花前胡合剂组、抑制剂组,连续7日分别灌胃白花前胡合剂及生理盐水,最后一次灌胃后采用线栓法制作大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型,抑制剂组于再灌注前15 min经尾静脉注射LY294002。再灌注24h后将大鼠处死,取组织进行相关检测。结果免疫组化结果显示,假手术对照组脑组织PI3-K和p-Akt阳性细胞比较散在;脑缺血再灌注24h,模型组缺血侧脑组织PI3-K、p-Akt阳性细胞数较正常组无明显变化;脑缺血再灌注前予白花前胡合剂处理显著增加缺血侧脑组织PI3-K和p-Akt的表达。Western blot检测发现,脑缺血再灌注24h后,模型组PI3-K、p-AKT的表达量未见明显变化,假手术组亦趋于稳定。与模型组相比较,白花前胡合剂处理后能显著增加PI3-K、p-AKT的表达(P<0.01)。给予PI3-K选择性抑制剂LY294002后,可以消除白花前胡合剂增加PI3-K、p-AKT的效应。结论白花前胡合剂是通过PI3-K/Akt信号通路减轻大鼠的脑缺血再灌注损伤。

shRNA干扰NOTCH1基因对套细胞淋巴瘤Akt/mTOR信号通路的影响

本研究旨在探讨RNA干扰沉默NOTCH1基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的增殖、凋亡及Akt/m TOR信号通路的影响。针对NOTCH1基因设计短发夹RNA并将其连入p GPU6/GFP/Neo质粒中,构建NOTCH1 shRNA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞;应用RT-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,M TT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、procaspase-3、procaspase-9及Akt/m TOR信号通路相关蛋白Akt、p-Akt、p-m TOR、p-P70S6K的表达。结果表明:NOTCH1 shRNA转染Jeko-1细胞后,NOTCH1基因的mRNA和蛋白表达均明显下调,有统计学差异(P<0.05);转染组增殖率明显低于NegshRNA组和空白组(P<0.05),NOTCH1 shRNA转染48 h后,凋亡率为(34.58±3.46)%,而Neg-shRNA组和空白组分别为(2.44±1.35)%、(1.72±0.64)%,有统计学差异(P<0.05);凋亡相关蛋白BCL-2、procaspase-3、procaspase-9的表达下调,而BAX表达上调;干扰NOTCH1基因后Akt总蛋白未见明显变化,而p-Akt、p-m TOR、pP70S6K的表达下降。结论:干扰沉默NOTCH1基因可抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,通过去磷酸化抑制Akt/m TOR信号通路可能是其机制之一。

紫檀芪调节PI3K/Akt/mTOR信号通路保护心肌缺血再灌注损伤大鼠的作用机制研究

目的构建心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)大鼠模型,观察紫檀芪对其的作用,并从磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路研究其作用机制。方法按随机数字法将清洁级SD大鼠72只分为假手术组、心肌缺血再灌注损伤组(MI/RI组)、紫檀芪低剂量组、紫檀芪中剂量组、紫檀芪高剂量组和阿司匹林组,每组12只。假手术组和MI/RI组给予10 mL/kg生理盐水灌胃治疗,紫檀芪低剂量组、紫檀芪中剂量组、紫檀芪高剂量组分别给予紫檀芪10 mg/kg、20 mg/kg和40 mg/kg灌胃,阿司匹林组则给予30 mg/kg阿司匹林灌胃,每日1次,连续灌胃2周。经冠状动脉左前降支结扎30 min,后再灌注2 h构建MI/RI模型,彩超检测心脏功能后处死,收集心脏检测心肌梗死面积、心肌组织病理学及心肌PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达水平,收集血液检测心功能肌酸激酶同工酶(CK-MB)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及乳酸脱氢酶(LDH)活性,以及炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果与假手术组比较,MI/RI组左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)明显升高(P<0.05),左室短轴缩短率(LVFS)和左室射血分数(LVEF)明显降低(P<0.05),而紫檀芪低、中和高剂量组和阿司匹林组均能降低LVESD(P<0.05),升高LVEF和LVFS(P<0.05),但LVEDD无明显变化(P>0.05);与假手术组比较,MI/RI组心肌梗死面积明显升高(P<0.05),紫檀芪低、中和高剂量组和阿司匹林组均可明显降低梗死面积(P<0.05);与假手术组比较,MI/RI组心肌组织病理学可见有明显损伤,而紫檀芪低、中和高剂量组相较于假手术组损伤程度明显减轻;与假手术组比较,MI/RI组大鼠血清CK-MB、AST、LDH、IL-1β、IL-6和TNF-α均明显升高(P<0.05),而紫檀芪低、中和高剂量组均明显降低(P<0.05);与假手术组比较,MI/RI组PI3K、Akt和mTOR磷酸化水平明显降低(P<0.05),而紫檀芪低、中和高剂量组和阿司匹林组均可有效提高PI3K、Akt和mTOR磷酸化水平(P<0.05)。结论紫檀芪对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌具有明显保护作用,其作用机制可能是通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路实现的。

不同温度热处理对大鼠骨骼肌Akt/mTOR信号通路的影响

热处理会诱导应急蛋白,从而促进细胞蛋白质合成并进一步导致肌肉肥大.但热处理对细胞内蛋白质合成中主要信号通路Akt/mTOR信号途径的影响鲜有报道.本研究分析了热处理对大鼠骨骼肌中Akt/mTOR信号途径的作用.利用Western blot技术检测了不同温度(37℃、38℃、39℃、40℃)的热处理对大鼠腓肠肌及比目鱼肌中Akt/mTOR信号途径蛋白Akt,mTOR,p70S6K及4E-BP1的磷酸化水平及热激蛋白HSP72的表达水平.结果表明39℃、40℃的热处理能够激活Akt及下游p70S6K的活性而对于热激蛋白HSP72的表达水平没有影响.

PI3K/AKT通路在低氧环境下对结肠癌细胞HIF-1α及糖酵解的作用

目的探讨缺氧环境培养下,阻断磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(serine-threoninekinase,AKT)信号途径后结肠癌细胞中缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及糖酵解相关蛋白葡萄糖转运蛋白(glucose transporter 1,GLUT-l)和乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDH-A)的表达,分析PI3K/AKT信号通路与结肠癌细胞糖酵解之间的关系。方法选择人结肠癌SW480细胞予以缺氧环境培养,分为4组:缺氧对照组、PI3K抑制剂组、AKT抑制剂组、PI3K+AKT抑制剂组,培养时间为24h。采用RT-PCR和Western blot法检测各组结肠癌细胞HIF-1α及糖酵解相关基因(GLUT-1,LDH-A)的表达。比色法测定各组结肠癌细胞培养上清液中的乳酸浓度。结果与缺氧对照组相比较,PI3K抑制剂组和AKT抑制剂组结肠癌细胞中HIF-1α、GLUT-1、LDH-A表达下降(均P<0.05),结肠癌细胞上清液中乳酸浓度降低(P<0.05)。PI3K+AKT抑制剂组与缺氧对照组及单项抑制剂组相比,各项指标下降明显(P<0.01)。结论阻断PI3K/AKT信号途径,结肠癌细胞中HIF-1α表达下调,并可导致糖酵解相关基因GLUT-1、LDH-A的表达下降,提示PI3K/AKT信号途径参与了结肠癌细胞的糖酵解过程。

萝卜硫素及其衍生物BSFN通过激活PI3K/Akt途径诱导SH-SY5Y细胞凋亡

目的研究萝卜硫素(SFN)及其衍生物(BSFN)对SH-SY5Y细胞的增殖抑制活性及通过PI3K/Akt途径探讨其抗肿瘤作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝比色法测定其对SH-SY5Y细胞增殖抑制率;通过免疫荧光法、流式细胞术、蛋白质印迹法对其进行抗癌机制研究。结果四甲基偶氮唑蓝结果显示,萝卜硫素和萝卜硫素衍生物处理细胞72 h的IC50值分别为13.27和5.21μmol·L-1,且呈现时间剂量依赖性;Hoechst33258染色荧光显微镜观察发现,萝卜硫素、萝卜硫素衍生物能诱导SHSY5Y细胞核形态学改变,部分细胞呈现典型的凋亡形态学特征;AnnexinⅤ-FITC/PI荧光双染结果亦证实萝卜硫素、萝卜硫素衍生物可以诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡;DAPI和DCFH-DA染色流式细胞术分析显示,萝卜硫素衍生物诱导SH-SY5Y细胞S期阻滞、细胞活性氧产生增加,且较萝卜硫素作用明显;蛋白质印迹分析发现萝卜硫素和萝卜硫素衍生物能调节PI3K/Akt途径中凋亡相关蛋白的表达,同时检测细胞内Nrf2与Keap-1蛋白表达,发现Nrf2蛋白表达增加,Keap-1蛋白表达减少。结论萝卜硫素衍生物通过PI3K/Akt信号途径诱导SH-SY5Y细胞凋亡和S期阻滞,且作用优于萝卜硫素,可能成为一种新型的抗癌药物。

辛伐他汀对高糖高脂诱导人骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景:研究表明,他汀类药物能够促进骨髓间充质干细胞的增殖与黏附能力,抑制高糖高脂培养下骨髓间充质干细胞的凋亡。目的:观察辛伐他汀对高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法:将0.001,0.01,0.1,1.0μmol/L辛伐他汀分别与高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞培养48h,以正常培养骨髓间充质干细胞及高糖高脂诱导条件下培养的骨髓间充质干细胞为对照。倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法比较不同浓度辛伐他汀对高糖高脂环境下骨髓间充质干细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡,加入PI3K/Akt信号转导通路抑制剂LY294002后辛伐他汀对骨髓间充质干细胞凋亡的影响。结果与结论:与高糖高脂诱导组比较,辛伐他汀0.01,0.1,1.0μmol/L组骨髓间充质干细胞存活率均升高(P<0.01),其中辛伐他汀浓度在0.1μmol/L时骨髓间充质干细胞存活率升高最显著(P<0.01);同时流式细胞仪检测结果显示,辛伐他汀0.01,0.1,1.0μmol/L组细胞凋亡率下降(P<0.01),其中0.1μmol/L组凋亡率下降最显著(P<0.01)。0.1μmol/L辛伐他汀对骨髓间充质干细胞的影响可被LY294002阻断。说明辛伐他汀能抑制高糖高脂诱导条件下骨髓间充质干细胞的凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号途径有关。

PIK3CA基因异常扩增对胶质瘤患者预后预测价值的研究

目的探讨胶质瘤患者PIK3CA基因突变和扩增与临床结局相的相关性,为临床胶质瘤预后提供参考。方法使用直接测序和实时定量PCR的方法,检测PIK3CA基因突变和异常扩增,并利用回归分析和相关性分析的方法分析二者与临床病例特性及结局的相关性,探讨二者与胶质瘤患者3年生存率的相关性。结果在50名胶质瘤患者中,有6例患者具有PIK3CA基因的突变,有41例患者具有PIK3CA基因的异常扩增。PIK3CA基因的异常扩增与磷酸化Akt有显著的相关性。在胶质瘤患者中,未发现PIK3CA基因的突变与其临床病例特性及临床结局的相关性。PIK3CA基因的异常扩增与胶质瘤患者的生存率具有显著的正相关性。胶质瘤患者的3年生存率分析显示,PIK3CA基因异常扩增的患者的3年生存率显著的低于无PIK3CA患者。结论 PIK3CA基因的异常扩增可能是胶质瘤患者中PI3K/Akt途径被激活的主要机制。PIK3CA基因异常扩增与胶质瘤患者预后差生存率低呈显著的正相关性。因此,PI3K/Akt途径可能成为胶质瘤治疗的有效治疗靶点。

促红细胞生成素对缺氧诱导大鼠心肌细胞凋亡的影响及机制

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对缺氧诱导大鼠心肌细胞凋亡的影响及机制。方法建立体外培养的缺氧新生大鼠心肌细胞模型,设立正常对照组、缺氧组及低、中、高EPO干预组、LY294002干预组、IGF-1干预组共7组,正常对照组于CO2培养箱中培养,不经缺氧处理或药物干预。缺氧组细胞经缺氧处理,不予任何药物干预。低EPO干预组:以6.25 IU/mL的EPO预处理细胞24 h,再予缺氧处理。中EPO干预组:以25 IU/mL的EPO预处理细胞24 h,再予缺氧处理。高EPO干预组:以100 IU/mL的EPO预处理细胞24 h,再予缺氧处理。LY294002干预组:以LY294002(终浓度50μmol/L)预处理1 h,后予缺氧处理。IGF-1干预组:以IGF-1(200 ng/mL)预处理细胞1 h,后予缺氧处理。采用比色法检测肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活力,采用流式细胞术检测细胞Caspase-3阳性表达率和细胞凋亡率。结果经EPO预处理,缺氧诱导的心肌细胞CK、LDH活力降低,呈剂量依赖性,低EPO干预组、中EPO干预组、高EPO干预组组间CK、LDH活力比较,P均<0.01;LY294002干预组与缺氧组CK、LDH活力增加;IGF-1干预组CK、LDH活力降低(P均<0.01)。缺氧组Caspase-3蛋白阳性表达率高于正常对照组(P<0.01)。低、中、高EPO干预组Caspase-3蛋白阳性表达率均低于缺氧组(P均<0.01),低、中、高EPO干预组间比较差异有统计学意义(P均<0.01)。正常对照组、缺氧组、低、中、高EPO干预组、LY294002干预组及IGF-1干预组心肌细胞凋亡率分别为0.63%±0.1%、35.6%±1.3%、22.4%±2.1%、12.9%±2.3%、5.39%±1.1%、83.5%±2.1%、5.01%±1.1%,各组间比较,P均<0.01。结论 EPO可抑制缺氧诱导大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号通路有关。

姜黄素对大鼠肾系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的观察姜黄素对大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,并探讨其可能的影响机制。方法体外培养大鼠肾系膜细胞,同步后用血清刺激,并用不同浓度的姜黄素、姜黄素联合mTOR特异阻断剂雷帕霉素、姜黄素和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)特异抑制剂LY294002进行干预处理。采用RT-PCR检测CTGF和纤维连接蛋白(Fn)mRNA表达;Western blot检测CTGF蛋白和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达。结果①血清刺激系膜细胞6 h,姜黄素浓度依赖性抑制CTGF和Fn mRNA的表达;姜黄素联合雷帕霉素对CTGF和Fn mRNA表达的抑制作用较单用同浓度姜黄素明显;LY294002预处理后,姜黄素对CTGF和Fn mRNA表达的抑制作用较未预处理组减弱。②25μmol/L姜黄素作用细胞301、20 min,p-Akt蛋白表达较同时间点血清对照组明显减弱;且LY294002预处理后姜黄素对p-Akt表达的抑制作用较未预处理组亦明显减弱。③血清刺激系膜细胞24 h,姜黄素对CTGF蛋白的表达亦起抑制作用;姜黄素联合雷帕霉素对CTGF蛋白表达抑制更明显;LY294002预处理后,姜黄素对CTGF蛋白表达的抑制效果较未预处理组减弱。结论姜黄素可抑制血清刺激的肾小球系膜细胞CTGF的表达,其机制可能与PI3K/Akt信号途径和mTOR信号途径有关。

下调Notch1基因促进人肝癌细胞系HepG2自噬

目的探讨Notch1基因对人肝癌细胞系HepG2的增殖、凋亡、自噬及Akt/mTOR信号通路的影响。方法选择于新乡医学院第三附属医院行肝癌手术治疗患者的肝癌组织32例,荧光定量PCR检测Notch1 mRNA的表达。构建Notch1 siRNA真核表达载体,经脂质体转染入HepG2细胞中,应用RT-qPCR及Western blot鉴定Notch1的干扰效果,MTT法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、cleared-caspase-3,自噬相关蛋白LC3B、Beelinl、ATG7、ATG5及Akt/mTOR信号通路相关蛋白Akt、p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K的表达。结果Notch1基因在原发性肝细胞癌组织中的相对表达量(1.865±0.791)显著高于癌旁组织(0.709±0.414)(P<0.001)。Notch1 siRNA转染HepG2细胞后,Notch1 siRNA组中Notch1 mRNA及蛋白的表达均显著低于NC siRNA组和对照组(P<0.001)。Notch1 siRNA组24、48、72及96 h的细胞增殖率显著低于NC siRNA组和对照组(P<0.001)。转染48 h后,Notch1 shRNA组细胞的凋亡率及Bax水平显著高于NC siRNA和对照组,而Bcl-2、cleaved caspase-3的表达显著低于NC siRNA组和对照组(P<0.001)。Notch1 siRNA组细胞中自噬相关蛋白LC3B、Beelinl、ATG7、ATG5的表达量显著高于NC siRNA组和对照组(P<0.001)。而Notch1 siRNA组的p-Akt、p-mTOR、p-P70S6K表达量显著低于NC siRNA组和对照组(P<0.001)。结论下调Notch1基因的表达可显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,提高细胞的自噬水平,其机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路有关。

桔梗皂苷D联合伊马替尼对K562细胞的增殖抑制作用及机制研究

目的探讨桔梗皂甙D(platycodin,PD)与伊马替尼(imatinib,IM)联合用药抑制慢性粒细胞白血病细胞株K562的作用及机制研究。方法体外培养CML细胞株K562,CCK-8测定PD和IM单药及联合用药对K562细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测Annexin V/PI标记的细胞凋亡率,Western blot方法检测cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、PARP、cleaved PARP、Bcr/abl、p-AKT、p-m TOR蛋白表达。结果联合用药组对K562细胞的增殖抑制作用和诱导细胞凋亡率较单独用药组效果明显,差异均有统计学意义(均P<0.01)。与单药组比较,联合用药组可以明显上调cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、cleaved PARP蛋白表达,同时下调PARP、Bcr/abl、p-AKT、p-m TOR蛋白的表达,差异均有统计学意义(P<0.01或0.05)。结论 PD与IM联合用药在抑制细胞增殖、诱导凋亡、抑制Bcr/abl蛋白和PI3K/AKT/m TOR信号通路方面明显优于单独用药。