靶向PIK3CA和AKT3基因RNA干扰对家兔SCs增殖的影响

PI3K与AKT组成的PI3K-AKT信号通路在细胞的增殖以及凋亡具有重要意义,本试验旨在研究该信号通路在家兔SCs增殖过程中发挥的作用。采用siRNA介导的PIK3CA和AKT3基因进行基因的沉默表达。结果发现对处于对数生长期的细胞转染si-PIK3CA-03或si-AKT3-01后48 h,分别对靶基因和上下游基因PTEN和Fox O1进行qRT-PCR反应,并采用CCK-8试剂盒通过酶标仪检测其在转染si-PIK3CA-03或si-AKT3-01后对细胞增殖能力的影响。结果表明:在转染si-PIK3CA-03后,PIK3CA和AKT3基因的相对表达量均显著下调,PTEN和Fox O1基因的表达量均显著上调;当转染了si-AKT3-01后,PTEN和FoxO1基因表达量均显著上调。表明PTEN、Fox O1基因与PIK3CA、AKT3基因的相对表达量呈负相关。转染实验组OD值显著低于空白对照组(P<0.05),说明通过转染实验下调PIK3CA和AKT3基因表达后,细胞增殖能力均有显著的下降。由此说明,分别抑制表达PIK3CA、AKT3基因后,靶基因的表达量显著下降,家兔SCs的增殖能力也显著下降,说明PIK3CA、AKT3基因能够正向调控肌细胞的增殖。

家兔PIK3CA和AKT3基因多态性及其与生长性状的关联性分析

【目的】探讨家兔PIK3CA和AKT3基因的多态性及其与家兔生长性状的相关性。【方法】采用PCR产物直接测序法寻找PIK3CA和AKT3基因的遗传变异,应用PCR-RFLP技术对欧洲大白兔、伊拉兔和福建黑兔3个肉兔品种共711个个体进行基因型分析。【结果】在PIK3CA和AKT3基因编码区发现了2个同义突变,分别是PIK3CA基因的c.3068 A>G,和AKT3基因的c.1213 A>C。对于c.3068 A>G,在欧洲大白兔和福建黑兔中,GG基因型个体的体重在各生长阶段均显著低于AA和AG基因型个体(P<0.05);对于c.1213 A>C位点,CC基因型的欧洲大白兔体重显著低于AA和AC基因型个体(P<0.05);综合考虑两位点,发现GGCC基因型的欧洲大白兔个体重极显著低于AAAA,AGAA和AGAC基因型个体。【结论】PIK3CA和AKT3基因与家兔的生长性能相关,可以作为家兔分子育种的遗传标记。

Akt3基因在新山西黑猪及晋汾白猪不同组织中的mRNA表达

Akt3是Akt(蛋白激酶B)的其中一种亚型,是细胞内一种重要的信号传导分子,在促进细胞增殖、凋亡等进程中具有关键作用。笔者以新山西黑猪和晋汾白猪为研究对象,提取这2种猪的心、肝、脾、肺、皮肤等20种组织总RNA,通过RT-PCR技术检测Akt3基因在这2种地方猪种不同组织中的表达情况。结果显示,Akt3基因在2种猪体力的表达情况有差异。此外,通过SPSS 19软件对这2种猪的4种组织(肝、肺、大脑、直肠)中Akt3基因的表达进行方差分析及多重比较。结果显示:Akt3基因在新山西黑猪的大脑与肺、肝、直肠间的表达差异极显著(P<0.01);在晋汾白猪的大脑与直肠、肝,肺与直肠、肝间的表达差异极显著(P<0.01);在新山西黑猪和晋汾白猪的肺(P=0.001)组织间差异极显著;在大脑(P=0.032)、直肠(P=0.011)、肝(P=0.21)。组织间差异显著。本研究提示,猪Akt3基因在代谢调控中发挥重要作用,为进一步研究Akt3基因在猪的疾病预防方面提供指导和依据。

微小RNA-497抑制甲状腺乳头状癌细胞活力、侵袭和迁移

目的:研究微小RNA-497(miR-497)抑制甲状腺乳头状癌(PTC)细胞活力、侵袭和迁移的作用机制。方法:采用Target Scan 6. 0软件预测miR-497的靶基因,通过萤光素酶报告基因检测法、RT-qPCR和Western blot进行靶基因验证,再通过RT-qPCR检测PTC组织中miR-497及其靶基因的表达,并通过基因转染研究miR-497及其靶基因对PTC细胞活力、侵袭和迁移的影响。结果:Target Scan 6. 0软件预测、萤光素酶报告基因检测法、RTq PCR和Western blot均证明AKT3是miR-497的直接靶基因。此外,PTC组织中的AKT3表达水平较正常组织高(P <0. 05),且与miR-497表达呈负相关(r=-0. 573 7,P <0. 01)。下调AKT3可以抑制PTC细胞的活力、迁移和侵袭,与miR-497过表达在PTC细胞中具有相似的作用。结论:miR-497通过直接靶向调节AKT3抑制甲状腺乳头状癌细胞的活力、侵袭和迁移。

肝癌细胞辐射敏感性影响因素的研究进展

肝癌细胞的辐射敏感性与肝癌放疗的临床疗效显著相关。影响肝癌细胞辐射敏感性的因素包括PI3K/AKT信号通路相关基因和蛋白表达情况、p53基因突变、DNA损伤修复相关基因和蛋白表达情况、细胞周期时相、端粒酶活性、miR34a表达等。这些因素通过诱导凋亡、影响DNA损伤后修复的关键环节或者关键酶、改变细胞周期分布、改变肿瘤细胞糖代谢等影响肝癌细胞的辐射敏感性。