高糖对肾小管上皮细胞PTEN蛋白表达影响

目的观察高糖条件下肾小管上皮细胞第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白的表达变化,探讨其在肾小管纤维化病变中的作用及可能机制。方法体外培养大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E),随机分为对照组和高糖组,每组分别设2、12、24、48 h 4个时间点进行动态观察;采用免疫荧光细胞化学染色检测E-钙黏素(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化,Western blotting检测各组PTEN、磷酸化蛋白激酶B[p-Akt1(Ser473)]、E-caderin和α-SMA蛋白表达变化。结果与对照组比较,高糖组培养24、48 h时,PTEN、E-caherin蛋白表达量[分别为(1.15±0.13)、(1.10±0.13)和(1.23±0.11)、(1.22±0.11)]均减少(均P<0.05),而p-Akt1(Ser473)、α-SMA蛋白表达量[分别为(1.53±0.13)、(1.60±0.13)和(1.86±0.10)、(1.91±0.10)]均增多(均P<0.05);PTEN与E-cadherin蛋白表达量呈正相关(r=0.58,P<0.05),与α-SMA蛋白表达量呈负相关(r=-0.61,P<0.05)。结论高糖培养的肾小管上皮细胞中PTEN蛋白表达明显减少,可能通过PI3K/Akt信号通路参与了肾小管纤维化病变的发生发展过程。

胰岛素对百草枯诱导损伤PC12细胞的保护机制的研究

目的探讨胰岛素对百草枯（PQ）诱导损伤的多巴胺能神经元PC12细胞保护作用的可能机制。方法在前期实验证明胰岛素对PQ诱导损伤的PC12细胞具有保护作用的基础上，应用免疫沉淀Western印迹分析技术检测空白对照PC12细胞组、PQ干预PC12细胞组（PQ组）、胰岛素干预PC12细胞组（胰岛素组）和PQ与胰岛素共同干预PC12细胞组（胰岛素＋PQ组）INR Tvr^1162/1163和AktSer^473磷酸化蛋白的表达情况。结果免疫沉淀Western印迹分析技术显示：胰岛素组和胰岛素＋PQ组通道上出现了表示INRTyr^1162/1163磷酸化蛋白表达的棕色带，没有胰岛素干预的通道均未出现棕色带：INR TVr“^1162/1163磷酸化蛋白表达量化统计分析显示胰岛素组INRTyr^1162/1163磷酸化程度高于胰岛素＋PO组，但差异无统计学意义（P〉0．05）；而AktSer^473磷酸化蛋白表达量化统计分析显示胰岛素组AktSer^473磷酸化程度明显高于胰岛素＋PQ组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论INRTyr^^1162/1163磷酸化增加和胰岛素受体后信号传导通路AktSer^473磷酸化增加可能是胰岛素保护PQ诱导损伤PC12细胞的机制之一。

FLAG-PIPP^(H557A)在小鼠1-细胞期受精卵中对PKB/Akt表达的调节作用

目的:研究富含脯氨酸的肌醇多磷酸5-磷酸酶(proline-rich inositol polyphosphate 5-phosphatase,PIPP)在组氨酸557位点突变为丙氨酸(FLAG-PIPPH557A)时对小鼠受精卵中磷酸化苏氨酸蛋白激酶(pAkt)的影响。方法:将FLAG-PIPPH557A、FLAG-PIPP以及FLAG vector重组质粒转染到小鼠受精卵,用蛋白印记、免疫荧光染色以及活性检测方法分析FLAG-PIPPH557A对小鼠受精卵中丝氨酸(Ser)473位点磷酸化的苏氨酸蛋白激酶(pAkt Ser473)表达、定位以及活性的影响。结果:FLAG-PIPPH557A在小鼠受精卵中对pAkt Ser473的表达和活性的调节作用明显低于FLAG-PIPP的作用,两者间有显著差异(P<0.001);而且在小鼠受精卵中FLAG-PIPPH557A不能调节pAktSer473在细胞膜的定位。结论:PIPPH557A在小鼠1-细胞期受精卵中可以通过改变PIPP的活性,影响pAkt Ser473的表达、定位以及活性。

PI3K/AKT及其相关因子在结肠癌中的表达

目的探讨PI3K/AKT信号通路中相关细胞因子PI3Kp110α、p-AKTser473、p-m TORser2448、Cyclin D1在结肠癌组织中的表达及其与临床各病理参数之间的关系。方法采用免疫组织化学法检测65例结肠癌组织(结肠癌组)和15例结肠腺瘤组织(结肠腺瘤组)的PI3Kp110α、p-AKTser473、p-m TORser2448、Cyclin D1的表达,分析各指标在结肠癌组的表达与临床各病理参数之间的关系。结果PI3Kp110α、p-AKTser473、p-m TORser2448、Cyclin D1在结肠癌组中的阳性表达率均显著高于结肠腺瘤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。PI3Kp110α、p-AKTser473、p-m TORser2448在结肠癌组的表达与性别、年龄、分化程度、是否淋巴结转移及TNM分期之间差异无统计学意义(P>0.05)。Cyclin D1在不同分化程度及不同TNM分期的结肠癌组织中的表达有统计学差异(P<0.05),在不同性别、年龄及是否有淋巴结转移之间无明显差异(P>0.05)。PI3Kp110α、p-AKTser473、p-m TORser2448、Cyclin D1在结肠腺瘤组的阳性表达与性别、年龄、分化程度、是否淋巴结转移及TNM分期之间无统计学差异(P>0.05)。结论 PI3Kp110α、p-AKTser473、p-m TORser2448、Cyclin D1的表达与结肠癌的发生发展密切相关,对结肠癌的预后评估及新靶点的研发具有重要意义。