多巴胺D_1受体Ala229Thr多态性对受体信号转导功能的影响

目的:构建表达不同基因型的人多巴胺D_1受体(DRD_1)真核细胞表达载体,明确DRD_1Ala229Thr多态性对受体信号转导功能的影响。方法:从人基因组经PCR扩增DRD_1基因编码区全长,将纯化后的PCR产物与pMD_19-T载体进行T连接,得到DRD_1229Ala(野生型)重组克隆载体。在野生型重组克隆载体的基础上,应用定点突变方法构建229Thr(突变型)重组克隆载体。用KpnⅠ和EcoR Ⅰ双酶切野生型和突变型重组克隆载体,将酶切后得到的目的片段纯化后与经相同双酶切的pc DNA3.1(+)表达载体连接,即得到野生型和突变型DRD_1-pcDNA3.1(+)重组真核细胞表达载体。将pc DNA3.1(+)空载体、野生型和突变型DRD_1-pcDNA3.1(+)重组真核细胞表达载体瞬时转染入COS-7细胞,用c AMP ELISA试剂盒分别检测forskolin和不同浓度多巴胺及(±)-SKF38393处理下细胞内基础cAMP的水平及激动剂诱导的cAMP的水平。结果:经双酶切及测序证实野生型和突变型DRD_1-pcDNA3.1(+)重组真核细胞表达载体构建正确。在forskolin处理的情况下,空载体组和阴性对照组细胞内cAMP的水平分别为(0.40±0.14)和(0.78±0.24)pmol/well,两者之间并没有显著差异(P=0.082),野生型组和突变型组细胞内c AMP的水平分别为(2.06±0.35)和(1.37±0.12)pmol/well,野生型组细胞内c AMP水平显著高于空载体组(P<0.001)和突变型组(P=0.007);在多巴胺及SKF38393处理的情况下,细胞内cAMP的水平均呈浓度依赖性升高,但突变型组细胞内的cAMP水平均显著低于野生型组(P<0.001)。多巴胺的EC_(50)值在野生型组为625 nmol/L,突变型组为9 612 nmol/L,比野生型组增加15倍;SKF38393的EC_(50)值在野生型组为421 nmol/L,突变型组为417 nmol/L,两者之间不存在明显差异。结论:本研究成功构建了野生型和突变型DRD_1-pcDNA3.1(+)重组真核细胞表达载体;DRD_1Ala229Thr多态性影响受体的激活和信号转导功能,与野生型相比,229Thr型受体信号转导功能显著降低。

FSHR基因Thr307Ala和Asn680Ser位点多态性与男性不育关系的Meta分析

目的:用Meta分析的方法综合评价FSHR Thr307Ala-Asn680Ser等位基因多态性与男性不育的关联性。方法:检索Pub Med、EMBASE、Web of Science、中国知网和万方等中英文数据库2005至今文献,依据选择标准收集相关病例对照研究数据,应用Stata 11.0软件对符合条件的研究结果进行Meta分析。结果:符合纳入标准的共12篇文献,包含病例组2 893例和对照组3 312例。经综合分析:在3种比较模型(纯合比较模型、杂合比较模型和显性比较模型)中,Thr307Ala(rs6165)位点多态性是男性不育的危险因素,OR值分别为1.26(95%CI:1.03~1.54),P=0.023;1.18(95%CI:1.03~1.36),P=0.018;1.20(95%CI:1.05~1.37),P=0.006)。而Asn680Ser(rs6166)位点多态性在两种比较模型(纯合比较模型和隐性比较模型),是男性不育的危险因素,OR值分别为1.24(95%CI:1.05~1.45),P=0.009;1.20(95%CI=1.04~1.39),P=0.013。分层Meta分析结果则表明,在纯合比较模型中,Thr307Ala和Asn680Ser位点多态性在白种人群中是男性不育的危险因素,OR值分别为1.37(95%CI:1.03~1.82),P=0.003;1.21(95%CI:1.00~1.47),P=0.048。结论:在纯合比较模型中,FSHR Thr307Ala和Asn680Ser位点多态性可能是男性不育发生的影响因素之一。

脂肪酸蛋白2基因多态性与脑梗死相关性的研究

目的:探讨脂肪酸结合蛋白2(Fatty Acid-Binding Protein2,FAbp2)Ala54 Thr基因多态性与内蒙古呼和浩特地区蒙古族人群脑梗死(cerebral infarction,CI)发病的关系。方法:本实验采用聚合酶链反应(ploymerase chain eaction,PCR)、限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism;RFLP)检测75例脑梗死患者、35例正常对照者FAbp2 Ala54 Thr基因多态性。结果:①内蒙古呼和浩特地区蒙古族人群中,脑梗死组FABPZAla54 Thr基因型分布分别为Ala54Ala、Ala54Thr、Thr54Thr基因型频率分别为46.7%、46.7%、6.7%;正常组FABPZAla54Thr基因型分布分别为5Ala54Ala、Ala54 Thr、Thr54 Thr基因型频率分别为28.6%、71.4%、0%。②试验样本内Ala54Thr基因型在脑梗死患者实验组中出现频率大于对照组。结论:脑梗死组基因分布频率与对照组差异有显著性,对照组中未出现突变纯合子型Thr54Thr,结果显示FAbp2 Thr54 Thr基因型可能是脑梗死发病的独立危险因素。

老年男性肠脂肪酸结合蛋白基因Ala54Thr多态性与血脂水平关系的研究

目的探讨老年男性肠脂肪酸结合蛋白(intestinal fatty acid binding protein,IFABP)基因exonⅡ54位点编码丙氨酸或苏氨酸(A/T)单核苷酸多态性(single nucleo-tide polymorphisms,SNP)与血清血脂水平的关系。方法研究对象为114例老年男性,平均年龄71.3±7.2岁;对照组102例年轻男性,平均年龄38.2±3.1岁。利用聚合酶链反应(PCR),HhaI内切酶酶切,基因测序等技术检测各组IFABP基因型;血清总胆固醇(TC)、三酯酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、载脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ)、载脂蛋白B(ApoB)等指标的检测采用生物化学方法。结果老年男性组IFABP基因型A/A、A/T、T/T频率为0.29,0.53,0.18;对照组IFABP基因型A/A、A/T、T/T频率为0.52,0.35,0.13。突变型54T等位基因频率分别为:老年男性组0.45,对照组0.30。与对照组比较,老年男性组54T等位基因频率明显增高,差异显著(x2=9.41,p<0.01;)。在老年男性组,与54A等位基因携带者比较,54T等位基因携带者血清三酯酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B明显升高(分别为1.83±0.67vs1.48±0.67mmol/L,p<0.05;2.39±0.42vs2.21±0.41mmol/L,p<0.05;0.69±0.17vs0.61±0.19g/L,p<0.05)。结论突变型54T等位基因频率在老年男性人群中明显升高,并且与老年男性较高水平的血清三酯酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B有关。

α-纤维蛋白原Thr312Ala基因多态性与静脉血栓栓塞症的相关性研究

目的探讨α-纤维蛋白原rs6050(Thr312Ala)基因多态性与静脉血栓栓塞症(venous thromboembolism,VTE)的相关性。方法选取2016年8月至2017年3月河南省人民医院确诊为静脉血栓栓塞症患者61例(病例组),与病例组年龄、性别相匹配的61例健康体检者(对照组)。采集受试者空腹外周静脉血3 mL,利用DNA提取试剂盒提取全血DNA,通过PSTAR高通量基因测序技术测定Thr312Ala基因的多态性,应用Logistic回归分析Thr312Ala基因多态性与VTE的相关性,并计算优势比与95%置信区间,对病例组、对照组进行组间分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果α-纤维蛋白原Thr312Ala三种基因型CC、CT、TT在病例组分布频率分别为32.8%、49.2%、18.0%,对照组三种基因型分布频率分别为16.4%、45.9%、37.7%,有统计学差异(P<0.05);Thr312Ala基因在显性遗传模型(CC+CT比TT)下基因型CT、CC是VTE的危险因素(P=0.017),隐性遗传模型(CC比CT+TT)下基因型CC是VTE的危险因素(P=0.039);在≤65岁的人群中,与对照组相比,VTE病例组基因型CC、CT和等位基因C的OR值分别为4.182、3.137和2.320,置信区间下限均大于1,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Thr312Ala基因位点携带C等位基因的人群具有VTE易感性,且通过亚组分析发现Thr312Ala多态性在较年轻人群差异更显著。