Alb-cre/DTR小鼠可诱导性肝损伤模型的建立

目的建立Alb-cre/DTR双转基因小鼠模型并进行相关表型分析,在此基础上建立可诱导性肝损模型,用于肝脏疾病的相关研究。方法将引进的Alb-cre和DTR小鼠扩繁后,通过杂交的方式获得双转基因小鼠。提取小鼠尾部组织DNA,利用PCR方法进行基因型鉴定。在双转基因小鼠上腹腔注射白喉毒素,之后在不同时间点进行称重、采血,检测血清ALT、AST水平。结果将Alb-cre和DTR小鼠杂交、筛选后获得了Alb-cre/DTR双转基因小鼠,对该小鼠使用0.625 ng/g剂量的白喉毒素,可使小鼠血清中ALT与AST水平显著升高,解剖小鼠后观察到肝整体变白,HE染色结果显示肝细胞明显坏死。结论成功建立可诱导特异性肝损伤小鼠模型。

KCNH6基因肝脏特异性敲除小鼠的构建及其初步应用

目的构建KCNH6基因肝脏细胞特异性敲除小鼠,并监测其肝脏血脂变化。方法运用Cas9技术构建KCNH6 flox/flox转基因小鼠,将其与肝脏细胞特异性表达Cre重组酶工具鼠(Alb-cre)进行杂交,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法鉴定基因型。监测基因敲除小鼠和同窝对照小鼠的体质量和进食量。分别检测8周和20周雌雄各两组小鼠的三酰甘油、胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇。结果成功构建KCNH6基因肝脏细胞特异性敲除小鼠,其基因型为KCNH6 flox/flox/Cre T。与同窝对照组相比,基因敲除小鼠的体质量和进食量均无明显变化。8周雄性和雌性小鼠的血脂无明显变化。20周时雄性小鼠的胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇均有明显升高。结论成功构建了KCNH6基因肝脏细胞特异性敲除小鼠动物模型,成年雄性小鼠存在肝脏血脂代谢异常。动物模型的构建为探讨KCNH6基因在肝脏脂代谢中的作用提供重要研究平台。

miR-17-92在急性肝脏损伤中的功能和作用

目的利用体外细胞模型和基因敲低模型评价miR-17-92在急性肝脏损伤中的作用。方法利用慢病毒LV-miR-17-92感染正常人肝细胞系L02,获得稳定过表达miR-17-92肝脏L02细胞,利用四氯化碳模拟肝细胞损失,MTS法检测miR-17-92高表达L02细胞和对照细胞的存活率。利用Alb-cre转基因小鼠和miR-17-92-loxp转基因小鼠杂交,获得肝脏组织特异的miR-17-92基因敲低小鼠。利用四氯化碳和伴刀豆球蛋白A,分别建立两种急性小鼠肝损伤模型。取肝脏组织进行HE染色,眼球取血检测谷丙转氨酶、谷草转氨酶,进而评价miR-17-92在急性肝脏损伤中的功能和作用。结果 Q-PCR结果显示慢病毒感染显著提高了L02细胞中miR-17-92的表达。MTS结果显示四氯化碳处理明显抑制了L02细胞的生长,而与对照组相比,miR-17-92过表达提高了四氯化碳处理后细胞的存活率(P<0.05)。基因组PCR结果和肝脏Q-PCR分析均显示肝脏特异miR-17-92基因敲低小鼠肝脏中miR-17-92的表达显著降低。小鼠腹腔四氯化碳给药能够显著诱导野生型小鼠肝脏miR-17-92的水平,而基因敲低小鼠中miR-17-92表达无明显变化。在四氯化碳和伴刀豆球蛋白A肝脏损伤模型中,与对照组相比,miR-17-92肝脏特异性敲低小鼠的肝脏病理学损伤明显加重,提示miR-17-92可能参与了急性肝损伤的修复过程。结论肝脏损伤能够诱导miR-17-92表达增加,而miR-17-92过表达对四氯化碳诱导的肝细胞损伤具有保护作用,miR-17-92敲除则加重了四氯化碳和伴刀豆球蛋白A诱导的急性肝损伤。因此,miR-17-92在急性肝脏损伤中起保护作用。