高速剪切辅助提取蕨麻多糖工艺优化及抗氧化活性研究

目的研究料液比、剪切转速、剪切时间、剪切次数对蕨麻多糖提取率的影响,评估其最佳提取率条件。方法以青海蕨麻为试材,采用高速剪切辅助提取技术,单因素结合Box-Behnken响应面法对蕨麻多糖的最佳提取工艺条件进行优化,并对其抗氧化活进行评价,测定蕨麻多糖的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazine,DPPH)自由基清除率、羟基自由基清除率、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐[2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammonium salt,ABTS]阳离子自由基清除率及总抗氧化能力。结果在料液比1:40(g/mL),剪切转速19000 r/min,剪切时间50 s,剪切次数3次条件下得到的蕨麻多糖提取率为(25.58±0.42)%,理论提取率为26.87%,差值较小,说明提取工艺参数可靠。体外抗氧化活性表明,在试验浓度范围内,蕨麻多糖对DPPH自由基、羟自由基、ABTS阳离子自由基有良好的清除作用,且清除效果与多糖浓度呈剂量-效应关系。结论蕨麻多糖具有较好的抗氧化活性,本研究为蕨麻的进一步开发和应用提供数据支持。

蕨麻水溶性多糖的提取工艺与含量测定研究

本实验对蕨麻中水溶性多糖进行提取和测定研究。通过单因素试验和L9(33)正交试验优化提取工艺,结果显示最佳工艺为:料液比1:30,温度100℃,时间3.5h,蕨麻多糖提取率为8.78%。同时,采用改良苯酚-硫酸法,以葡萄糖为参照品,利用紫外分光光度法测定蕨麻中多糖的含量。葡萄糖含量在10.8～75.6μg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系。回归方程为A=0.0124C+0.0052,R2=0.9987,得到蕨麻多糖含量为9.26%,精密度为0.829%(n=6),样品加标平均回收率为99.33%。此法操作简便,结果稳定可靠,是蕨麻多糖含量测定的有效方法。

响应面试验优化超声波辅助双水相提取蕨麻多糖

应用单因素试验和响应面法优化超声波辅助双水相提取蕨麻多糖工艺。在单因素试验的基础上,利用Box-Behnken design模型对提取参数无水乙醇质量分数、硫酸铵质量分数、料液比和超声功率进行了优化,选取最优条件,并通过红外色谱、气相色谱质谱联用技术初步探讨蕨麻多糖的化学结构,体外活性实验研究其生物活性。结果显示,超声波辅助双水相提取蕨麻多糖最佳工艺条件在乙醇质量分数为31%,硫酸铵质量分数19%,料液比1∶22(g∶mL),超声功率240 W的条件下,蕨麻多糖提取率达到(9.04±0.12)%。红外光谱分析证实提取产物为多糖物质,气相色谱质谱联用技术分析蕨麻多糖是由鼠李糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比为1.00∶1.69∶10.61∶2.66。体外活性实验表明,在测试范围内超声波辅助双水相法提取的蕨麻多糖抗氧化活性优于传统水提蕨麻多糖。超声波辅助双水相技术是一种可靠高效的多糖提取方法。

蕨麻正丁醇部位对大鼠海马神经元缺氧致钙超载的抑制作用

目的细胞内钙超载被认为是诱发神经元变性和死亡的关键因素。文中研究蕨麻正丁醇部位(n-butanol extract of Potentilla anserina L,NP)对大鼠海马神经元急性缺氧所致钙超载的抑制作用。方法采用体外原代培养的海马神经元建立缺氧所致钙超载的实验模型,分为正常对照组、缺氧模型组、尼莫地平干预组以及NP高、中、低剂量干预组。通过免疫荧光双染观察蕨麻正丁醇部位对海马神经元急性缺氧所致微管相关蛋白2(microtuble-associated protein2,MAP2)的保护作用。利用荧光分光光度计检测各组细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)。通过半定量RT-PCR、免疫细胞化学染色及Western blot技术检测各组钙依赖中性蛋白酶1(Calpain 1)在基因及蛋白质水平的表达差异。结果缺氧3 h模型组与正常组相比较,神经元特异性细胞骨架蛋白MAP2被水解,细胞骨架形态的被破坏,[Ca2+]i显著升高,Calpain 1在基因和蛋白水平的表达量明显增加,细胞骨架发生破坏。NP各剂量干预明显抑制神经元特异性细胞骨架蛋白MAP2水解,减轻细胞骨架形态的破坏,且显著降低缺氧神经元[Ca2+]i(P<0.05);并且下调了Calpain 1在基因和蛋白的表达水平(P<0.05)。结论急性缺氧3 h可使神经元细胞内发生钙超载,NP可有效抑制缺氧所致神经元细胞钙超载,而发挥神经元作用。

响应曲面法优化蕨麻多糖的提取工艺

以藏药蕨麻为试材,优化蕨麻多糖的提取工艺。在单因素实验的基础上,利用响应曲面法考察提取时间、温度和液料比对蕨麻多糖提取得率的影响,优化提取工艺,得到最优提取工艺条件:提取温度72℃、液料比28mL/g、提取时间102 min。提取2次,验证得到蕨麻多糖提取得率可达21.28%,接近于模型预测理论值21.44%。

蕨麻正丁醇提取物抑制大鼠海马神经元缺氧所致一氧化氮生成的研究

目的研究蕨麻正丁醇提取物（NP）对大鼠海马神经元急性缺氧所致一氧化氮（NO）生成的抑制作用。方法建立体外原代培养海马神经元缺氧损伤实验模型，随机分为空白对照组、缺氧模型组、尼莫地平组（2μmol/L）及NP高（250.0 mg/L）、中（62.5 mg/L）、低（15.6 mg/L）剂量组。用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测海马神经元细胞活性，同时检测其一氧化氮（NO）含量；用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）分别检测各组神经型一氧化氮合酶（nNOS）mRNA及蛋白的表达，用免疫细胞化学染色法检测nNOS阳性率。结果与空白对照组比较，缺氧模型组神经元细胞活性〔吸光度（A）值〕明显降低（0.0826±0.0095比0.3315±0.0105），NO含量（μmol/g：0.0509±0.0027比0.0291±0.0032）、nNOS mRNA表达（A值：0.1463±0.0081比0.0801±0.0058）、nNOS阳性率〔（74.4238±3.9423）%比（28.3714±4.1361）%〕及nNOS蛋白表达（A值：1.9130±0.0471比0.5068±0.0368）均明显升高（均P＜0.01）。与缺氧模型组比较，各药物组缺氧神经元细胞活性均增加，NO含量、nNOS mRNA及蛋白表达均降低，以高剂量组变化更显著〔神经元细胞活性：0.1681±0.0118，NO含量：0.0319±0.0044，nNOS mRNA表达：0.0648±0.0032， nNOS阳性率：（40.1240±6.4900）%，nNOS蛋白表达：1.3924±0.0621，均P＜0.01〕；而NP低剂量组与模型组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论 NP能减轻缺氧对体外培养大鼠海马神经元的损伤，其机制可能为有效抑制nNOS合成NO的过度升高。

微波辅助萃取蕨麻多糖的工艺研究

对蕨麻中水溶性多糖进行微波辅助提取和测定研究。通过单因素试验和L9(34)正交试验优化微波辅助提取多糖的最佳工艺,结果表明:液固比为3,浸提温度90℃,浸提时间120 min。得到蕨麻多糖提取量为83.9 mg/kg。

蕨麻地上部分多糖提取工艺优化及其抗氧化活性

通过优化蕨麻地上部分多糖提取工艺,为蕨麻地上部分的综合利用提供试验依据。本研究以蕨麻地上部分多糖提取率为评估指标,以液料比、提取温度、提取时间为影响因素,在单因素试验基础上结合响应面法优化蕨麻地上部分多糖提取工艺,并采用2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除法以及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法测定其抗氧化活性。最佳提取工艺条件为:液料比41∶1(ml/g),提取温度80℃,提取时间97 min,提取率为2.68%。在最佳提取工艺条件下,多糖对DPPH自由基、ABTS自由基的半抑制质量浓度分别为0.76 mg/ml、0.64 mg/ml。本研究采用响应面法得到蕨麻地上部分多糖的最佳提取工艺,该工艺简便可行,提取的多糖具有较强的抗氧化活性。

蕨麻正丁醇提取物与有氧运动对高血压大鼠心肌纤维化调控机制

蕨麻(Potentilla anserina L.,PA)具有很高的营养价值和医疗保健功能,有很大的开发利用潜力。蕨麻正丁醇提取物(Potentilla anserina L.n-butanol extract,PABE)具有心脏保护作用。本研究旨在探讨蕨麻正丁醇提取物(PABE)与有氧运动(RE)协同作用对自发性高血压(SHR)大鼠心肌纤维化的影响及其潜在机制。通过设立正常对照组、单独高血压组、单独运动组、不同剂量PABE组以及PABE联合运动组,本研究通过RT-qPCR技术检测了心肌纤维化标志物α-SMA、collagenⅠ、collagenⅢ、MMP-2、MMP-9及TIMP-1的mRNA表达水平,评估了PABE与RE对心肌纤维化的调控效果。结果显示,与高血压模型组相比,PABE处理组和运动组均能显著降低α-SMA、collagenⅠ、collagenⅢ、MMP-2和MMP-9的表达,提高TIMP-1的表达,其中PABE与RE的联合应用效果更为显著。这表明蕨麻正丁醇提取物与有氧运动的结合更有效地抑制了高血压大鼠心肌纤维化的进展,可能通过调节心肌细胞外基质重塑相关基因的表达来发挥作用。本研究为高血压心肌纤维化的综合治疗提供了新的策略和理论依据。

蕨麻乙醇提取物对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用及相关机制

目的:研究蕨麻乙醇提取物对急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术对照组,模型组,蕨麻乙醇提取物干预组,阳性药物组。建立急性心肌缺血再灌注损伤模型,测定心功能变化,血清学检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量;透射电镜观察超微结构变化,免疫组化检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达。结果:与模型组相比,蕨麻乙醇提取物能够明显改善心功能指标及心肌细胞超微结构,降低LDH、CK水平,减少MDA、NO产生,提高SOD活性,抑制iNOS表达。结论:蕨麻乙醇提取物对急性心肌缺血再灌注所致心肌损伤具有保护作用,其可能是通过提高机体抗氧化能力,抑制NO生成而实现的。