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不同浓度芒柄花黄素对PC-3细胞增殖及ALDOA蛋白水平的影响 被引量:1
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作者 徐豪 郝建伟 +1 位作者 束坤鹏 石红林 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第9期2208-2212,共5页
目的探讨不同浓度芒柄花黄素对前列腺癌PC-3细胞增殖及醛缩酶(ALDOA)蛋白水平的影响。方法体外培养的PC-3细胞株分为4组,A组(无药物干预的PC-3细胞株)、B组(A组+20μmol/L芒柄花黄素)、C组(A组+40μmol/L芒柄花黄素)及D组(A组+80μmol/... 目的探讨不同浓度芒柄花黄素对前列腺癌PC-3细胞增殖及醛缩酶(ALDOA)蛋白水平的影响。方法体外培养的PC-3细胞株分为4组,A组(无药物干预的PC-3细胞株)、B组(A组+20μmol/L芒柄花黄素)、C组(A组+40μmol/L芒柄花黄素)及D组(A组+80μmol/L芒柄花黄素),显微镜观察PC-3细胞株数目及形态改变;噻唑蓝(MTT)比色法检测PC-3细胞株生长;荧光Hoechst法检测PC-3细胞株凋亡程度;采用Western印迹及qRT-聚合酶链反应(PCR)检测时添加E组(D组+shRNA-ALDOA)分别检测ALDOA、蛋白激酶B(AKT)蛋白及mRNA相对表达。结果A组:PC-3细胞呈现贴壁生长,呈现梭形生长,相邻细胞出现融合生长;B~D组:经多个浓度的芒柄花黄素干扰下细胞形态改变呈现圆形,体积减小,连片生长状态改变,出现脱落;PC-3细胞OD值在相同时间内,B组、C组和D组活性OD值均显著低于A组,B组、C组和D组之间随着芒柄花黄素浓度的不断增加而OD值降低,且组间相互比较具有明显差异(P<0.05);各组PC-3凋亡率均存在明显差异(P<0.001),B组PC-3凋亡率与A组差异较大(t=7.831,P=0.001),C组明显高于B组(t=7.576,P=0.001);D组PC-3凋亡率明显高于C组(t=6.840,P=0.001);各组ALDOA、AKT蛋白及mRNA均存在明显差异(均P<0.001),且B组明显低于A组,C组明显低于B组,D组明显低于C组(均P<0.05),E组ALDOA、AKT蛋白及mRNA与D组比较无明显差异(P>0.05)。结论芒柄花黄素能够加快PC-3细胞凋亡,生长受到抑制,并呈现时间浓度依赖性。 展开更多
关键词 芒柄花黄素 前列腺癌 醛缩酶(aldoa) 蛋白激酶B(AKT) PC-3生理活动
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MiR-122在AldoA介导的ob/ob小鼠肝脏代谢中的作用研究 被引量:1
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作者 方志娟 李鹏 +3 位作者 刁文丽 蒋珽 张辰宇 项阳 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第2期185-191,共7页
本实验室前期研究发现,2型糖尿病动物模型ob/ob小鼠血清中miR-122的含量较正常C57BL/6小鼠显著升高.本文进一步研究肝脏特异性miR-122及其靶蛋白AldoA(果糖1,6-二磷酸醛缩酶A)在ob/ob小鼠肝脏代谢中的作用.首先,经qRT-PCR技术检测发现ob... 本实验室前期研究发现,2型糖尿病动物模型ob/ob小鼠血清中miR-122的含量较正常C57BL/6小鼠显著升高.本文进一步研究肝脏特异性miR-122及其靶蛋白AldoA(果糖1,6-二磷酸醛缩酶A)在ob/ob小鼠肝脏代谢中的作用.首先,经qRT-PCR技术检测发现ob/ob小鼠肝脏miR-122水平较C57BL/6小鼠显著下降,而Western blotting分析发现ob/ob小鼠肝脏其靶蛋白AldoA的表达水平显著上升.进一步以miR-122分子转染293T细胞后收集其分泌的微囊泡(microvesicles,MVs),经qRT-PCR检测确认后采用特异性荧光染料DiI-C18标记MVs,以不同剂量尾静脉注射BALB/c小鼠体内,不同时间点取肝组织做冰冻切片.在荧光显微镜下观察证实,包裹有miR-122的MVs通过循环系统进入肝脏,同时qRT-PCR定量分析发现肝组织中miR-122含量显著升高,而蛋白质印迹检测发现其靶蛋白AldoA在肝脏中表达显著下降.AldoA主要催化糖酵解途径中果糖1,6-二磷酸和磷酸二羟丙酮及甘油醛-3-磷酸之间的转变,miR-122靶向作用AldoA可能在2型糖尿病的发生发展中发挥重要作用. 展开更多
关键词 MIR-122 ob ob小鼠 aldoa 2型糖尿病
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免疫共沉淀验证HBx蛋白与ALDOA、ALDOB和ALDOC相互作用
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作者 王卫红 《中文科技期刊数据库(全文版)医药卫生》 2021年第3期77-78,共2页
目的;利用免疫共沉淀技术验证乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与醛缩酶A(ALDOA)、ALDOB和ALDOC之间在肝细胞内存在直接相互作用。方法;利用脂质体法将含HBx;编码基因的FLAG标签真核表达载体pFLAG-CMV-2-HBx转染Huh7肝癌细胞;48h后裂解细胞;进行... 目的;利用免疫共沉淀技术验证乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与醛缩酶A(ALDOA)、ALDOB和ALDOC之间在肝细胞内存在直接相互作用。方法;利用脂质体法将含HBx;编码基因的FLAG标签真核表达载体pFLAG-CMV-2-HBx转染Huh7肝癌细胞;48h后裂解细胞;进行免疫共沉淀实验(CO-IP);并通过Western;blot检测免疫沉淀复合物确定HBx蛋白与肝细胞内源性ALDOA、ALDOB和ALDOC存在直接相互作用。结果;用Anit-FLAG抗体对细胞裂解液进行免疫沉淀实验;FLAG-HBx蛋白可以将ALDOA、ALDOB和ALDOC分别沉淀;用Anit-ALDOA、Anit-ALDOB和Anit-ALDOC抗体分别进行免疫沉淀实验;ALDOA、ALDOB和ALDOC均能将FLAG-HBx蛋白沉淀。结论;HBx蛋白与ALDOA、ALDOB和ALDOC在肝细胞内均存在直接相互作用;为进一步研究HBx蛋白的致病机制奠定基础;为阐述醛缩酶在乙型肝炎病毒相关肝癌过程发挥的作用提供依据。 展开更多
关键词 HBX蛋白 aldoa ALDOB ALDOC 免疫共沉淀
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应用组织芯片技术检测果糖二磷酸醛缩酶在肝癌与胰腺癌组织中的表达 被引量:3
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作者 迟鑫明 胡军 +2 位作者 张丽媛 赵皓琦 郝立宏 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2014年第6期506-510,共5页
目的探究果糖二磷酸醛缩酶ALDOA在肝癌、胰腺癌组织中的表达及临床意义。方法采用组织芯片和免疫组织化学方法检测ALDOA在肝癌、胰腺癌及其相应的正常组织中的表达。结果 ALDOA在肝癌组织中的阳性表达率为80%(24/30),在正常肝组织中的... 目的探究果糖二磷酸醛缩酶ALDOA在肝癌、胰腺癌组织中的表达及临床意义。方法采用组织芯片和免疫组织化学方法检测ALDOA在肝癌、胰腺癌及其相应的正常组织中的表达。结果 ALDOA在肝癌组织中的阳性表达率为80%(24/30),在正常肝组织中的阳性表达率为33.3%(2/6),二者之间表达差异具有统计学意义(P<0.05)。ALDOA在胰腺癌组织中的阳性表达率为66.7%(20/30),在正常胰腺组织中的阳性表达率为0%(0/6),二者之间表达差异具有统计学意义(P<0.01)。ALDOA在肝癌、胰腺癌组织中的表达与性别、年龄、分化程度无关(P>0.05);胰腺癌组织中的ALDOA高表达与淋巴结转移无关(P>0.05)。结论 ALDOA在肝癌、胰腺癌组织中表达上调。 展开更多
关键词 aldoa 组织芯片 肝癌 胰腺癌暡
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人醛缩酶A干扰RNA真核表达载体的构建
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作者 董莉 呼格吉乐 +2 位作者 易青 萨日娜 王悦喜 《现代检验医学杂志》 CAS 2014年第2期38-40,43,共4页
目的 构建4个人醛缩酶A (aldolaseA,ALDOA)公共序列的干扰RNA真核表达载体,转染人脑神经胶质细胞U251细胞,为醛缩酶A成为人脑肿瘤标志物提供实验基础和有价值的资料.方法 ①构建4个新靶点醛缩酶A干扰RNA真核表达载体并用双酶切和测序... 目的 构建4个人醛缩酶A (aldolaseA,ALDOA)公共序列的干扰RNA真核表达载体,转染人脑神经胶质细胞U251细胞,为醛缩酶A成为人脑肿瘤标志物提供实验基础和有价值的资料.方法 ①构建4个新靶点醛缩酶A干扰RNA真核表达载体并用双酶切和测序鉴定;②用脂质体法瞬时转染上述4个载体到U251细胞株.结果 ①成功构建了4个新靶点的醛缩酶A干扰RNA真核表达载体即pGPU6/GFP/Neo-ALDOA-1,pGPU6/GFP/Neo-ALDOA-2,pGPU6/GFP/Neo-ALDOA-3和pGPU6/GFP/Neo-ALDOA-4;②在U251细胞中有绿色荧光蛋白表达.结论 成功构建并筛选出效果最好的新靶点MBP干扰RNA真核表达载体. 展开更多
关键词 干扰RNA 醛缩酶A 神经胶质细胞 U251
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lncRNA GK-IT1通过调控醛缩酶A影响非小细胞肺癌细胞的恶性进展 被引量:2
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作者 刘子杨 王小文 陈力 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期591-601,共11页
目的·探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)GK-IT1通过调控醛缩酶A(aldolase A,ALDOA)对非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)细胞A549及H358恶性进展的影响。方法·应用实时荧光定量PCR(quantitative re... 目的·探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)GK-IT1通过调控醛缩酶A(aldolase A,ALDOA)对非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)细胞A549及H358恶性进展的影响。方法·应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测42对NSCLC组织和癌旁组织以及NSCLC细胞系中GK-IT1的表达。荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)实验检测GK-IT1在A549及H358中的亚细胞定位。RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)检测GK-IT1与ALDOA的相互作用关系。以2条GK-IT1的小干扰RNA序列(Si-GK-IT1#1和Si-GK-IT1#2)及空白对照(Si-NC)转染A549及H358细胞,再以Si-GK-IT1#2和ALDOA过表达质粒共转染上述细胞系。设置Si-NC组、Si-GK-IT1#1及Si-GK-IT1#2组,采用CCK-8及EdU实验检测细胞增殖能力,Transwell侵袭实验与细胞划痕实验检测细胞侵袭能力及迁移能力。Western blotting检测各实验组内波形蛋白(vimentin)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)及ALDOA的表达水平。结果·与正常组织相比,NSCLC组织中GK-IT1的表达量明显升高;与正常支气管上皮细胞BEAS-2B相比,H358、A549细胞中GK-IT1的表达量明显升高(均P<0.05)。FISH实验表明GK-IT1主要位于细胞质;RIP实验及生物信息学分析表明GK-IT1可能与ALDOA蛋白结合;CCK-8实验结果显示,Si-GK-IT1#1及Si-GK-IT1#2组较Si-NC组细胞增殖能力明显受到抑制(均P<0.05);EdU实验结果显示,Si-GK-IT1#1及Si-GK-IT1#2组较Si-NC组细胞EdU阳性率显著降低(均P<0.05);Transwell侵袭实验结果显示,与对照组相比,Si-GK-IT1#1及Si-GK-IT1#2组细胞侵袭能力明显受到抑制(均P=0.000);细胞划痕实验结果显示,Si-GK-IT1#1及Si-GK-IT1#2组较Si-NC组细胞迁移率明显降低(均P=0.000)。敲减GK-IT1后,ALDOA、vimentin表达水平降低,E-cadherin表达水平升高。过表达ALDOA可逆转敲低GK-IT1对NSCLC细胞增殖、侵袭、迁移及蛋白表达水平的影响(均P<0.05)。结论·GK-IT1可通过调控ALDOA蛋白促进NSCLC细胞的增殖、侵袭与迁移能力。 展开更多
关键词 长链非编码RNA GK-IT1 醛缩酶A 非小细胞肺癌 细胞侵袭 细胞迁移
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醛缩酶A基因真核表达载体的构建及其生物学活性分析 被引量:1
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作者 叶天星 张德宇 +1 位作者 梁迎春 张学武 《军事医学》 CAS 2021年第2期114-118,123,共6页
目的构建带FLAG标签的醛缩酶A(ALDOA)基因的真核表达载体,对其表达产物进行功能检测。方法利用PCR技术从人乳腺文库中扩增ALDOA基因,将其克隆至真核载体pcDNA3.0-FLAG中。经过酶切与测序验证,转染人胚肾293T细胞系,利用蛋白质免疫印迹... 目的构建带FLAG标签的醛缩酶A(ALDOA)基因的真核表达载体,对其表达产物进行功能检测。方法利用PCR技术从人乳腺文库中扩增ALDOA基因,将其克隆至真核载体pcDNA3.0-FLAG中。经过酶切与测序验证,转染人胚肾293T细胞系,利用蛋白质免疫印迹实验完成其表达鉴定。转染人乳腺癌细胞MCF7和ZR75-1,使用葡萄糖摄取试剂盒检测细胞糖摄取情况,乳酸试剂盒检测细胞外乳酸产量。通过细胞生长曲线及克隆形成实验探究pcDNA3.0-FLAG-ALDOA对乳腺癌细胞生长的影响,通过划痕实验探究ALDOA对乳腺癌细胞迁移能力的影响。结果通过PCR技术从人乳腺文库中扩增得到约1100 bp cDNA片段,克隆到pcDNA3.0-FLAG载体上,测序结果与目的序列完全一致。转染人胚肾293T细胞后,pcDNA3.0-FLAG-ALDOA基因表达成功。糖摄取及乳酸含量鉴定结果表明,pcDNA3.0-FLAG-ALDOA对乳腺癌MCF7和ZR75-1细胞糖摄取及乳酸的生成有促进作用;生长曲线及克隆形成实验结果表明,pcDNA3.0-FLAG-ALDOA可促进乳腺癌MCF7和ZR75-1细胞生长;迁移实验结果表明,pcDNA3.0-FLAG-ALDOA可促进乳腺癌MCF7和ZR75-1细胞迁移。结论FLAG-ALDOA真核表达载体构建成功,表达产物ALDOA具有生物学活性,可促进乳腺癌细胞的葡萄糖摄取、乳酸生成、细胞生长及迁移,为进一步研究ALDOA在肿瘤发展中的意义奠定了理论基础。 展开更多
关键词 aldoa基因 真核表达 克隆 乳腺肿瘤 醛缩酶
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Aldolase A promotes proliferation and G1/S transition via the EGFR/MAPK pathway in non-small cell lung cancer 被引量:5
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作者 Hailu Fu Huijun Gao +7 位作者 Xiaoyu Qi Lei Zhao Donghua Wu Yuxin Bai Huimin Li Xuan Liu Jun Hu Shujuan Shao 《Cancer Communications》 SCIE 2018年第1期202-216,共15页
Background:Our previous study demonstrated that aldolase A(ALDOA)is overexpressed in clinical human lung squamous cell carcinoma and that ALDOA promotes epithelial-mesenchymal transition and tumorigenesis.The pre-sent... Background:Our previous study demonstrated that aldolase A(ALDOA)is overexpressed in clinical human lung squamous cell carcinoma and that ALDOA promotes epithelial-mesenchymal transition and tumorigenesis.The pre-sent study aimed to explore the function of ALDOA in the modulation of non-small cell lung cancer(NSCLC)prolifera-tion and cell cycle progression and the potential mechanism.Methods:ALDOA was knocked down by short hairpin RNA in H520 and H1299 cells.ALDOA was overexpressed with vectors carrying the full-length ALDOA sequence in H1299 and H157 cells.The proliferation capacities were assessed with immunohistochemical staining,Cell Counting Kit-8 and colony formation assays.The cell cycle distribution was examined by flow cytometry,and molecular alterations were determined by western blotting.Cell synchronization was induced with nocodazole.The stability of cyclin D1 mRNA was tested.The pyruvate kinase M2 and ALDOA protein distributions were examined.Aerobic glycolysis was evaluated with Cell Titer-Glo assay,glucose colorimetric assay and lactate colorimetric assay.Results:ALDOA knockdown inhibited the proliferation and G1/S transition in H520 cells.Conversely,ALDOA over-expression promoted the proliferation and G1/S transition in H157 cells.The cell cycle synchronization assay showed that ALDOA expression increased in the G1 phase and G1/S transition.Furthermore,ALDOA knockdown reduced cyclin D1 expression by regulating epidermal growth factor receptor/mitogen-activated protein kinase(EGFR/MAPK)pathway.Similar results were found in H1299 and H157 cells.The inhibition of mitogen-activated protein kinase kinase 1/2 prompted the nuclear distribution of ALDOA.Additionally,ALDOA knockdown reduced nuclear distribution of PKM2,the extracellular lactate and intracellular adenosine triphosphate concentrations and elevated the extracellular glucose concentration.Conclusions:ALDOA contributed to activation of the EGFR/MAPK pathway,thus promoting cyclin D1 expression and enhancing proliferation and G1/S transition in NSCLC.Additionally,ALDOA facilitated NSCLC aerobic glycolysis. 展开更多
关键词 aldoa NSCLC PROLIFERATION G1/S EGFR/MAPK Cyclin D1 Aerobic glycolysis
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