全反式维甲酸对糖尿病肾病模型大鼠转化生长因子β1基因甲基化水平影响的实验研究

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对糖尿病肾病(DN)模型转化生长因子β1(TGF-β1)基因甲基化水平的影响。方法:将30只成年雄性SD大鼠随机分为对照组、DN组、DN+ATRA组,每组10只。采用高糖高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素建立DN大鼠模型,对照组和DN组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,DN+ATRA组给予5 mg/kg ATRA灌胃,连续干预4周。观察各组大鼠24 h尿蛋白和血液生化指标,肾脏组织行HE染色和PAS染色,选择MS-PCR检测各组大鼠肾脏中TGF-β1基因的DNA甲基化水平,选择逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western blot法及免疫组织化学检测肾脏组织TGF-β1 mRNA及蛋白表达。结果:与对照组比较,DN组大鼠空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白升高(均P<0.05)。与DN组比较,DN+ATRA组大鼠FBG、BUN、Scr、24 h尿蛋白降低,但高于对照组(均P<0.05)。HE染色和PAS染色DN组肾小球形状不规则,系膜基质增多着玫瑰红色,部分肾小管有萎缩且存在管腔扩张,肾小管周围有较多炎症细胞浸润和组织增生,DN+ATRA组大鼠肾脏组织病变情况明显减轻。DN组大鼠肾脏组织TGF-β1基因的DNA甲基化水平相较于对照组显著降低,DN+ATRA组大鼠肾脏组织TGF-β1基因的DNA甲基化水平相较于DN组显著升高(P<0.05)。对照组大鼠肾脏组织TGF-β1mRNA及蛋白水平显著低于DN组,DN+ATRA组大鼠肾脏组织TGF-β1mRNA和蛋白水平显著高于对照组,低于DN组(均P<0.05)。结论:ATRA能通过升高TGF-β1基因的DNA甲基化水平,抑制DN大鼠肾脏组织TGF-β1mRNA和蛋白表达,改善DN大鼠肾脏组织的纤维化程度。

全反式维甲酸对糖尿病肾病肾小球p-cadherin表达的影响

目的观察全反式维甲酸(ATRA)对糖尿病肾病(DN)肾小球p-cadherin表达的影响,明确其对肾脏的保护作用。方法应用链脲佐菌素(STZ)建立DN大鼠模型。ATRA治疗组(n=10)给予ATRA每天20mg/kg灌胃,对照组(C组,n=10)、DN组(n=10)以等量蒸馏水灌胃。采用ELISA法检测大鼠24h尿液中白蛋白及肌酐值;免疫组织化学和胶体金免疫电镜法观察p-cadherin蛋白表达的部位及数量;RT-PCR法检测p-cadherin mRNA表达。结果ATRA组肾重及尿白蛋白/尿肌酐比值较DN组明显下降(P<0.01)。免疫组化检测结果示ATRA组p-cadherin蛋白表达较DN组上调,与C组相比无明显下降。电镜结果示DN组免疫金染色的p-cadherin蛋白较C组减少。RT-PCR结果示ATRA组p-cadherin mRNA表达较DN组上调,与C组无明显差异。结论ATRA可逆转DN大鼠早期DN肾小球足细胞p-cadherin蛋白的下调,由此降低早期DN尿白蛋白排泄量,延缓DN进展。

全反式维甲酸延缓糖尿病肾脏纤维化进展的实验研究

目的:探讨全反式维甲酸对延缓糖尿病大鼠肾脏纤维化的保护作用。方法:随机选择雄性SD大鼠分为空白对照组(NC)与造模组,制作糖尿病模型分为模型组(DM)与维甲酸治疗组(DM+atRA)。于模型成型后分别于第8、12周观察各组大鼠24 h尿蛋白(Ualb),内生肌酐清除率(Ccr),肾重/体重。肾脏病理及电镜观察肾小球基底膜厚度,免疫组织化学方法观察肾组织Ⅳ、Ⅲ型胶原表达。结果:维甲酸组肾重/体重、Ualb、Ccr较同时期模型组下降(P<0.05),且12周大鼠肾组织细胞外基质(ECM)重要成分ColⅣ表达(5.75±0.41)、ColⅢ表达(4.98±1.37)与模型组比较显著减少(P<0.01)。病理观察维甲酸组与模型组比较肾小球系膜细胞和内皮细胞增生减轻,足突融合改善,系膜基质增生缓解,基底膜厚度变薄,减轻了肾脏病理损害。结论:全反式维甲酸能减轻糖尿病大鼠早期肾脏病理损伤,减少细胞外胶原基质积聚,延缓肾脏纤维化。

全反式维甲酸对糖尿病大鼠肾脏nephrin和COX-2表达的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对糖尿病大鼠肾脏nephrin、环氧化酶-2(COX-2)表达的影响。方法链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型,将其随机分为模型组(D组)和全反式维甲酸干预组(A组),并以正常组(N组)作对照。干预8周后,观察各组大鼠尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)及肾脏病理变化;用免疫组化及实时荧光定量PCR检测肾脏nephrin、COX-2蛋白及mRNA的表达。结果用A-TRA干预后,可以明显减轻糖尿病大鼠肾脏病理损害,大鼠尿蛋白、BUN、Scr下降,免疫组化分析及实时荧光定量PCR显示nephrin表达升高、COX-2表达降低。结论全反式维甲酸可以减轻肾脏病理损害,减少蛋白尿,其机制可能通过上调nephrin表达、下调COX-2表达来发挥肾保护作用。

ATRA对糖尿病肾病大鼠模型TGF-β1基因甲基化水平的影响

分析全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠模型中,对转化生长因子-β1(TGF-β1)基因甲基化水平的影响。选取8周龄SD大鼠30只,随机分为对照组、DN组和DN+ATRA组。检测大鼠空腹血糖值、24 h尿蛋白定量、血肌酐及尿素氮水平。观察各组大鼠的肾脏结构及纤维化程度。对大鼠肾脏中TGF-β1基因进行甲基化筛选,检测大鼠肾脏组织中TGF-β1的mRNA水平和蛋白表达。结果显示:ATRA降低了DN大鼠的24 h尿蛋白定量、血肌酐和尿素氮水平;ATRA能减轻DN大鼠肾纤维化程度;ATRA能够提高DN大鼠TGF-β1基因的甲基化水平。研究结果表明:ATRA可能通过影响TGF-β1基因甲基化水平来减轻DN大鼠的肾纤维化程度。

全反式维甲酸对糖尿病大鼠肾脏组织BMP-7表达及细胞外基质代谢的影响

目的探讨全反式维甲酸(atRA)对糖尿病大鼠肾脏组织骨形成蛋白-7(BMP7)、转化生长因子-β1(TGFβ1)表达和细胞外基质(ECM)Ⅳ、Ⅲ型胶原代谢的影响。方法随机选择24只♂SD大鼠制作糖尿病模型,其中12只入糖尿病模型(DM)组,另12只入糖尿病模型+atRA(DM+atRA)组,此外再随机选择12只正常大鼠作为空白对照(NC)组。分别于第8、12周末各组处死6只大鼠,通过光镜、电镜观察各组大鼠肾脏病理结果;通过免疫组织化学方法观察BMP7,TGFβ1,Ⅳ、Ⅲ型胶原表达,并进行半定量分析;通过实时荧光定量PCR方法对TGFβ1mRNA、BMP7mRNA进行相对定量分析。结果 DM+atRA组大鼠肾组织BMP7表达较同时期DM组增加(P<0.01),主要表达于大鼠肾小管上皮细胞,而TGFβ1表达较同时期DM组减少(P<0.01);且DM+atRA组大鼠肾组织ECM重要成分Ⅳ、Ⅲ型胶原表达与DM组相比较显著减少(P<0.01)。同时观察到BMP7蛋白与Ⅳ型胶原蛋白表达呈负相关(r=-0.75,P<0.01),与Ⅲ型胶原蛋白表达呈负相关(r=-0.71,P<0.01),与TGFβ1蛋白表达呈负相关(r=-0.86,P<0.01)。荧光定量PCR结果表明,DM+atRA组BMP7mRNA水平升高,TGFβ1mRNA水平下降,且两者呈显著负相关(r=-0.83,P<0.01)。结论 atRA能减轻糖尿病大鼠肾脏病理损伤,延缓肾脏纤维化,这一防治作用可能与其增加BMP7表达,下调TGFβ1表达从而减少肾组织ECM沉积有关。

全反式维甲酸对SD大鼠系膜细胞株增殖和Ⅳ型胶原的影响

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)对高糖环境大鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖及Ⅳ型胶原的影响。方法:以高糖(葡萄糖浓度为25mmol.l-1)刺激体外培养的大鼠MCs增殖,然后根据实验分组加入不同浓度的ATRA:对照组:5.6mmol.l-1葡萄糖+2%FBSDMEM培养基;实验组:25mmol.l-1葡萄糖+2%FBSDMEM培养基+不同浓度的ATRA(分别为0mol.l-1、10-8mol.l-1、10-7mol.l-1、10-6mol.l-1),采用MTT比色法观察12、24、48h系膜细胞的增殖情况;Elisa法测定12、24、48h细胞上清液中Ⅳ型胶原的含量。结果:ATRA有抑制高糖所致的MCs增殖、减少细胞外基质(ECM)的作用,并呈剂量时间依赖性。结论:ATRA对高糖所致MCs增殖具有抑制作用,且呈剂量依赖性。