黄蝉生殖细胞的离体分裂

本文采用改进的二步渗透压法,分离黄蝉(Allemanda neriifolia)的生殖细胞。先将花粉放在含50%蔗糖的BK培养液内,28℃,往复振荡90次/分,培养2小时。在此条件下花粉不但能够萌发,且能形成长约300μm的花粉管。培养2小时后加入适量的不含蔗糖的BK培养液,使原培养液的蔗糖浓度由50%骤降至30%,大量花粉管受到渗透压冲击在末端破裂,释放出包括生殖细胞在内的内含物,经过滤、荧光素二醋酸酯鉴定,具有酯酶活性和完整的细胞膜,生殖细胞仍然保持生活力。生殖细胞从花粉管释出后,在很短的时间内(约30分钟)便全部由纺锤形变为圆球形。在含30%蔗糖的BK培养液内悬浮培养,离体的生殖细胞不但能保持生活力,而且还可以继续分裂,获得离体生殖细胞的各种分裂相。