大蒜素协同抗癌药对肿瘤细胞杀伤作用的研究

目的:探讨大蒜素对人胃癌细胞系MGC-803和SGC-7901细胞周期的影响及其与周期特异性药物联合使用,增强抗癌药物对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:苔盼蓝拒染法检测细胞增殖抑制率以观察大蒜素对胃癌细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪及瑞士-姬姆萨染色光镜观察检测细胞周期的改变;3μg/ml大蒜素与周期特异性抗癌药物博莱霉素A5和长春新碱联合使用,观察药物细胞毒活性的改变。结果:大蒜素可抑制MGC-803细胞生长,24hIC50为6.4μg/ml,也可抑制SGC-7901细胞的生长,24hIC50为7.3μg/ml;以3μg/ml、6μg/ml、9μg/ml终浓度大蒜素分别作用两种胃癌细胞系24h后,与对照组比较,G0/G1细胞周期百分率明显减少,而G2/M期明显增加(P<0.01);6μg/ml大蒜素作用培养细胞24h后,与对照组比较细胞分裂指数明显增加。提示两种细胞系经大蒜素处理后,细胞周期阻滞于M期;大蒜素与两种抗癌药物联合使用,作用于MGC-803细胞,BLMA5和VCR的24hIC50值分别由单独应用的1.210μg/ml和0.125μg/ml下降到0.370μg/ml和0.031μg/ml,作用于SGC-7901细胞,BLMA5和VCR的24hIC50值分别由单独应用的1.760μg/ml和0.287μg/ml下降到0.680μg/ml和0.074μg/ml,显示低剂量大蒜素增强了抗癌药物对肿瘤细胞的杀伤作用。结论:大蒜素可使MGC-803及SGC-7901两种细胞?

9-顺-维甲酸对肺癌细胞周期及周期因子表达的影响

目的 探讨 9 顺 维甲酸对肺癌细胞周期及周期因子cyclinD1和cdk4表达的影响。方法 用 9 顺 维甲酸处理细胞 2 4h后 ,在观察细胞生长、流式细胞仪分析细胞周期的基础上 ,用RT PCR方法分析细胞周期因子cyclinD1和cdk4表达的变化。结果 9 顺 维甲酸作用于肺癌细胞 2 4h以后 ,细胞增殖减慢 ,G0 G1期细胞明显增多 ,S期细胞减少 ;PG ,SPC A1和L78细胞的cyclinD1表达下降显著 ;PG ,A549和L78细胞的cdk4表达下降显著。结论 9 顺

蒲公英萜醇和乙酰蒲公英萜醇对胃癌细胞株AGS细胞周期和凋亡的影响

目的:观察蒲公英萜醇和乙酰蒲公英萜醇对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用四甲基固氮唑盐(3-(4,5-di methylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)法测定蒲公英萜醇和乙酰蒲公英萜醇对AGS细胞生长的影响,流式细胞仪检测蒲公英萜醇和乙酰蒲公英萜醇对AGS细胞细胞周期的影响,Annexin V-异硫氰酸荧光/碘化丙啶双染法测定蒲公英萜醇和乙酰蒲公英萜醇对AGS细胞凋亡的影响。结果:蒲公英萜醇对AGS细胞的生长具有较好的抑制作用,该作用呈剂量和时间依赖性。进一步研究发现,蒲公英萜醇可以阻滞细胞周期于G2/M期,与对照溶剂相比,110μmol/L的蒲公英萜醇能显著增加处于G2/M期的细胞数(P<0.05);蒲公英萜醇也可以促进细胞的凋亡,可使细胞早期凋亡率明显增加,其中110μmol/L的蒲公英萜醇能将早期细胞凋亡率从4.45%升高到10.29%,是空白对照的2.31倍。乙酰蒲公英萜醇对AGS细胞生长的抑制作用弱于蒲公英萜醇,具有阻滞细胞周期于G2/M期的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05),诱导凋亡的作用亦不明显。结论:蒲公英萜醇显著抑制AGS细胞的生长,该作用通过阻滞细胞周期于G2/M期和促进细胞凋亡实现。乙酰蒲公英萜醇的作用弱于蒲公英萜醇。

大蒜素与细胞周期特异性化疗药联合应用抗肿瘤的实验研究

目的:探讨大蒜素对人胃癌细胞株BGC-823、SGC7901生长的影响及其与细胞周期特异性化疗药联合应用抗肿瘤作用。方法:MTT法测定细胞增殖抑制率并测定药物半数抑制率(IC50);流式细胞仪检测细胞周期的改变,大蒜素与NVB、5-FU、MMC、PDD四种化疗药联合应用,观察细胞毒活性的改变。结果:大蒜素对BGC-823和SGC-7901两种细胞的生长均有明显的抑制作用,72hIC50分别为:30μg/ml和20μg/ml。以72hIC50浓度大蒜素分别作用于两种胃癌细胞株24h、48h后,流式细胞仪检测与对照组比G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞明显增加,提示两种胃癌细胞株经大蒜素处理后,细胞周期阻滞于G2/M期。大蒜素与四种化疗药联合应用,结果发现作用于BGC-823细胞,NVB72h的IC50值由原来单独应用时的9.0μg/ml降至2.25μg/ml。作用于SGC-7901细胞,NVB72h的IC50值由原来单独应用时的43.0μg/ml降至12.5μg/ml,显示大蒜素与作用于G2/M期的细胞周期特异性化疗药NVB联合应用时可增强其对肿瘤细胞的杀伤作用。结论:大蒜素可使BGC-823和SGC-7901两种细胞的增殖受到抑制,细胞周期被阻滞在G2/M期。大蒜素与G2/M期特异性化疗药联合应用,可能具有协同抗肿瘤作用。

miR-582-5p通过调控Wnt通路影响胃癌AGS细胞的增殖和耐药

目的观察micro RNA-582-5p(miR-582-5p)对人胃癌细胞AGS增殖和耐药功能的影响,探讨其分子机制。方法miR-582-5p mimics通过脂质体转染人胃癌AGS细胞(实验组),同时设置阴性对照组(转染Negative Control)和空白对照组(untreated cell)。实时荧光定量PCR、MTT法、流式细胞技术分别检测转染3组细胞后miR-582-5p的表达变化、增殖能力、药物敏感性、细胞周期;Target Scan Human网站预测LGR5基因可能是miR-582-5p的靶基因之一,并用双荧光素酶报告载体验证其靶基因;Western blot检测3组细胞中cyclin D1、c-myc、survivin和LGR5蛋白的表达。结果相比阴性对照组和空白对照组,实验组中AGS细胞增殖能力下降,在第72,96小时生长速度明显抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。相比阴性对照组和空白对照组,实验组细胞周期被抑制,G_0/G_1期细胞比例明显增多(P<0.05),S期细胞比例减少(P<0.05),细胞对奥沙利铂的敏感性增强,耐药性降低(P<0.05)。相比阴性对照组和空白对照组,实验组含有LGR5基因的3'UTR荧光素酶活性明显得到抑制,而且Wnt通路下游靶基因cyclin D1、c-myc、survivin和LGR5蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05);阴性对照组和空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-582-5p在胃癌细胞中可作为抑癌因子调控胃癌细胞增殖能力、化疗药物奥沙利铂耐药性、细胞周期变化,并通过下调LGR5调控Wnt信号通路,推测miR-582-5p和胃癌的发生和发展有关。

大蒜素对胃癌细胞化疗增敏机制研究

背景研究报道大蒜素(diallyl trisulfide, DATS)可以促进胃癌细胞(gastric cancer cells, GCC)中期阻滞,我们研究发现DATS引起细胞周期蛋白B1(cyclin B1, CCNB1)表达增加,而多数报道CCNB1在药物处理后中期阻滞阶段表达降低,也有少数报道过表达CCNB1可以促进肿瘤的化疗敏感性,因此DATS是否可以通过CCNB1的过表达促进多西紫杉醇(docetaxel,DOC)对GCC的敏感性.目的研究DATS对GCC化疗药物DOC的增敏作用及其作用机制.方法体外培养并取对数生长期BGC823细胞进行实验;采用流式细胞术检测大蒜素对BGC823细胞的增殖情况的影响,从而选择最佳药物浓度和作用时间;运用流式细胞术检测技术分析对照组、DATS组、DOC组、DATS+DOC组各组中BGC823细胞的增殖以及凋亡情况;Western blotting法测定CCNB1的表达水平变化规律,从而分析判断CCNB1在DATS介导的化疗增敏效应中的作用.结果DATS具有抑制BGC823细胞增殖的作用,其25μmol/L DATS作用12h对BGC823细胞增殖的抑制作用最明显, DATS作用于BGC823细胞过程中诱导CCNB1表达增加;DOC组、DATS组和联合组BGC823细胞凋亡率、G2/M期细胞比例、CCNB1表达水平均显著高于空白对照组,具有统计学意义(P<0.05),其中联合组作用分别显著高于DOC组与DATS组,具有统计学意义(P<0.05).结论DATS可抑制BGC823细胞的增殖,DATS可以协同增加GCC对DOC的化疗敏感性,其作用机制可能与诱导CCNB1的蛋白的表达增加有关.

手术及个体化化疗对胃癌患者预后的影响

目的:探讨胃癌外周血中血管内皮生长因子(VEGF)和癌细胞数量在手术前后的差异及个体化化疗对胃癌预后的影响。方法:分别采用双抗体夹心EAISA抗原测定、RT-PCR法定性半定量测定30例接受根治手术的胃癌患者术前、术毕当天及术后第1、2、3月外周血VEGF、胃癌细胞数水平,并与10例健康人对照;测定药敏组15例(术后每月一次个体化化疗)外周血VEGF及胃癌细胞数水平,与经验组15例(术后每月一次经验化疗)对照,并随访3年。结果:胃癌患者外周血VEGF水平、胃癌细胞数均高于对照组(P<0.05);患者经根治手术后较术前下降(P<0.05);术后给予个体化化疗的患者比同期给予经验化疗的下降更为明显(P<0.05),但预后无明显差异(P>0.05)。结论:胃癌的预后取决于多种因素,胃癌术后个体化化疗虽然能明显降低外周血VEGF及癌细胞数水平,但并不能明显改善其预后。

吴茱萸碱逆转人胃癌BGC-823/L-OHP细胞对奥沙利铂耐药

目的:探究奥沙利铂(L-OHP)与吴茱萸碱(EVO)联用后对L-OHP耐药的人胃癌BGC-823/L-OHP细胞增殖与凋亡能力的改变及可能机制。方法:于体外建立对L-OHP耐药的胃癌BGC-823细胞株,CCK-8法分别计算EVO及L-OHP单独使用与联合使用时BGC-823/L-OHP细胞的增殖抑制率、IC50及逆转指数;流式细胞仪检测EVO联合L-OHP作用于BGC-823/L-OHP细胞前后细胞周期分布及凋亡的变化;采用Real-timePCR、Westernblot法检测细胞中MDR1、MRP1mRNA和蛋白的表达水平。结果:2.00μmol/LEVO处理BGC-823/L-OHP细胞48h后,L-OHP对BGC-823/L-OHP耐药细胞株的IC50由(18.83±0.83)μg/ml变为(12.78±1.78)μg/ml,差异有统计学意义(P<0.05);EVO与L-OHP联用耐药细胞滞留在G2期比例升高,滞留在G1期及S期的细胞比例降低(P<0.05);细胞凋亡率高于单独用药组(P<0.05);MDR1、MRP1mRNA和蛋白表达水平低于单独用药组(P<0.05)。结论:EVO和L-OHP联用能逆转BGC-823/L-OHP对L-OHP的耐药性并改变其周期分布,促进细胞凋亡。

白蛋白紫杉醇与五氟尿嘧啶联合用药对人胃癌细胞增殖及周期的影响

目的探索白蛋白紫杉醇(Nab-PTX)与五氟尿嘧啶(5-Fu)联合用药对人胃癌细胞(AGS)增殖及周期的影响。方法对数生长的AGS细胞分为对照组(RMPI 1640,Ctrl组)、Nab-PTX组(Nab-PTX,浓度梯度为0.1、0.2、0.4μmol/L)、5-Fu组(5-Fu,浓度梯度为1、2、4μmol/L)及Nab-PTX+5-Fu组[Nab-PTX+5-Fu,浓度梯度为(0.1+1)、(0.2+2)、(0.4+4)μmol/l];相应药物作用24、48以及72 h,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期。结果与Ctrl组相比,Nab-PTX组、5-Fu组、Nab-PTX+5-Fu组细胞增殖能力均受到抑制(P<0.05),且联合用药抑制率较单药明显增加,同时Nab-PTX、5-Fu、Nab-PTX+5-Fu作用于AGS细胞株时抑制率随时间延长而递增;与Ctrl组相比,Nab-PTX组细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.05),5-Fu组细胞周期阻滞于S期(P<0.05),Nab-PTX+5-Fu组细胞周期阻滞在S期(P<0.01)。结论Nab-PTX与5-Fu联合用药较两药单独应用能更有效地抑制细胞增殖,同时也使细胞周期阻滞在S期。

细胞分裂周期因子25-A与胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药的相关性研究

目的探讨细胞分裂周期因子25-A(CDC25A)与胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药的相关性。方法选取2016年7月至2020年11月本院收治的100例胃癌患者作为观察组,进行奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶方案化疗,根据化疗后疗效评估标准,分为敏感组(n=53,完全缓解+部分缓解)和耐药组(n=47,稳定+进展),另选取同期于本院行胃镜检查的100例胃炎患者作为对照组,通过免疫组化比较CDC25A在胃癌组织、胃炎组织中的表达情况,并结合临床及病理资料统计分析其表达水平与肿瘤分级、淋巴结转移、TNM分期的相关性,比较CDC25A在敏感组和耐药组中的表达情况,分析CDC25A与胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药的相关性。结果观察组CDC25A的阳性率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。CDC25A在胃癌中的表达水平与分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05),与性别、年龄、解剖位置无关。100例胃癌患者中有47例对奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药,耐药率为47.00%。敏感组CDC25A阳性率低于耐药组,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,CDC25A表达水平与胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药呈正相关(r=0.582,P<0.05)。结论CDC25A的表达水平与分化程度、淋巴结转移、TNM分期等相关,且CDC25A表达较低者接受奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶化疗后,耐药性更低。

参芪抑瘤方含药血清对BGC-823胃癌细胞增殖和周期的影响

目的：探讨参芪抑瘤方含药血清对胃癌细胞BGC-823增殖和周期的影响,并探讨其作用机制。方法：以参芪抑瘤方3%,5%,10%含药血清干预BGC-823细胞后,采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐法检测其对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期变化;采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclindependent kinase inhibitor,CDKN）1B,CDKN1C mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测p27,p57蛋白表达情况。结果：不同浓度含药血清作用于BGC-823细胞24,48,72 h后,细胞存活率显著降低（P〈0.01）,且与时间和浓度呈依赖关系;不同浓度含药血清作用于BGC-823细胞24 h后,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少;Real-time PCR结果表明,与溶剂组和空白血清组比较,参芪抑瘤方各组CDKN1B,CDKN1C mRNA表达上调（P〈0.05,P〈0.01）;Western blot结果显示,与溶剂组比较,参芪抑瘤方各组p27,p57蛋白表达上调（P〈0.05,P〈0.01）。结论：参芪抑瘤方含药血清可以抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,其机制可能通过调节CDKN1B,CDKN1C mRNA及p27,p57蛋白表达,进而干预细胞周期有关。

奥利司他对胃癌AGS细胞顺铂耐药性的逆转作用及机制研究

目的研究奥利司他对胃癌AGS细胞顺铂(DDP)耐药性的逆转作用及相关机制。方法体外培养AGS细胞及AGS/DPP细胞,将AGS/DPP细胞分为奥利司他组、DDP组、联合组与对照组。奥利司他组给予60μg·mL^-1奥利司他,DDP组给予8μg·mL^-1DDP,联合组给予60μg·mL^-1奥利司他+8μg·mL^-1DDP,对照组给予等量生理盐水,分别处理24 h。用噻唑蓝(MTT)法检测奥利司他对AGS/DDP细胞的耐药逆转效果;用流式细胞术检测AGS/DDP细胞周期及细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(WB)法检测AGS/DDP细胞磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达。结果干预24 h时,对照组、奥利司他组、DDP组及联合组AGS/DDP细胞在G0/G1期的细胞比例分别为(12.52±0.68)%,(36.34±0.92)%,(48.11±1.03)%,(63.56±1.22)%;凋亡率分别(4.69±0.87)%,(8.49±0.94)%,(11.19±0.31)%,(36.44±4.78)%;AGS/DDP细胞p-PI3K蛋白相对表达量分别为0.98±0.02,0.80±0.11,0.59±0.05,0.21±0.04;p-AKT蛋白相对表达量分别为0.92±0.08,0.43±0.06,0.31±0.03,0.14±0.02。与对照组比较,奥利司他组、DDP组及联合组AGS/DDP细胞在G0/G1的比例及凋亡率均升高,且联合组高于奥利司他组、DDP组;p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量均显著降低,且联合组低于奥利司他组、DDP组(均P<0.05)。结论奥利司他可以逆转AGS/DDP细胞株的耐药,提高AGS/DDP细胞对DDP的敏感性,其机制可能与抑制PI3K/AKT通路的信号转导,阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡相关。

益气通络抗癌方联合替吉奥含药血清对人胃癌SGC-7901细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨益气通络抗癌方联合替吉奥含药血清作用于体外培养的人胃癌SGC-7901细胞,对其增殖和细胞周期的影响。方法应用中药血清药理学方法制备替吉奥(替吉奥组)、益气通络抗癌方联合替吉奥(中药联合替吉奥组)及0.9%氯化钠溶液(生理盐水组)含药血清;CCK-8法检测各组含药血清作用24、48、72 h后对SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞仪检测各组含药血清干预24、48、72 h后对SGC-7901细胞周期的影响;Western blot检测24、48、72 h细胞周期蛋白(cyclin)A、cyclin D1、cyclin E及细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK2)蛋白的表达。结果除生理盐水组外,各组含药血清对SGC-7901细胞均有抑制增殖作用,中药联合替吉奥组抑制率高于替吉奥组(P<0.05);与生理盐水组比较,各组含药血清SGC-7901细胞G2/M期细胞比例均有不同程度减少;中药与替吉奥合用能够减少SGC-7901细胞中cyclin A的表达(P<0.05),使用72 h时可增加CDK2的表达(P<0.05);中药联合替吉奥组cyclin D1及cyclin E蛋白的表达量在24、48、72 h与生理盐水组相比差异无统计学意义(P>0.05)。24、72 h时中药联合替吉奥组cyclin D1表达量低于替吉奥组(P<0.05)。结论益气通络抗癌方联合替吉奥可有效抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,抑制其S/G2期的转化,下调蛋白Cyclin A表达可能是其对SGC-7901细胞发挥S/G2期转化抑制作用的机制之一。