大蒜素抑制人急性早幼粒白血病细胞生长的体外实验

本实验采用体外直接杀伤测定法，荧光偏振技术，ＭＴＴ比色分析法，ＤＮＡ合成的［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法，微量量热法五种测定技术从细胞膜流动性改变、线粒体功能，ＤＮＡ合成速率、细胞总代谢率变化等细胞和分子生物学方面的变化研究大蒜素对ＨＬ－６０细胞的作用，结果表明，大蒜对对ＨＬ－６０细胞的增殖有抑制作用，高浓度（＞３０ｍｇ／Ｌ）时还有较明显的直接杀伤作用。

大蒜素对小鼠黑素瘤细胞B16-F1增殖和凋亡的影响

目的 探讨大蒜素对小鼠黑素瘤细胞B16-F1增殖及凋亡的影响。方法 传代培养小鼠黑素瘤B16-F1细胞，使细胞浓度为5×10^4个／ml，分别加入不同浓度（3，6，9，12，15μg／m1）的大蒜素细胞培养液。培养12，24，36，48h后，噻唑蓝（MTT）法检测细胞生存活性，原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡，定量RT—PCR法检测ras基因的表达水平。结果 3～15μg／ml的大蒜素对B16-F1细胞均有杀伤作用，当大蒜素的浓度为3～6μg／ml，诱导肿瘤细胞凋亡，且呈浓度时间相关性。当大蒜素的浓度较高时，细胞呈中毒反应，凋亡作用不明显。3～15μg/ml的大蒜素下调ras基因的表达，并且呈显著的浓度相关性。结论 大蒜素对小鼠黑素瘤B16-F1细胞有杀伤作用，可以明显诱导肿瘤细胞的凋亡。

大蒜素及前药对人食管癌细胞Eca9706的增殖抑制及其凋亡基因表达的影响

目的研究大蒜素和它的前药(蒜氨酸+蒜氨酸酶)对食管癌细胞Eca 9706的增殖抑制及对凋亡基因表达的影响。方法用大蒜素和大蒜素前药处理食管癌细胞Eca 9706,采用MTT法检测癌细胞的增殖抑制作用,实时定量RT-PCR检测凋亡基因的表达。结果大蒜素及其前药对食管癌细胞增殖抑制呈现时间和剂量相关性,大蒜素前药的抑制效果优于大蒜素。实时定量RT-PCR表明大蒜素和它的前药上调了癌细胞bax和caspase-3 mRNA的表达,下调survivin、突变型p53和bcl-2 mRNA的表达。结论大蒜素及其前药抑制食管癌细胞增殖和诱导凋亡可能是通过线粒体通路实现。

正交试验优化大蒜素的提取工艺

对大蒜素的提取工艺进行了优化研究。通过正交试验确定了最佳提取的工艺条件是:酶解温度30℃,酶解时间80min,料液比(大蒜∶95%乙醇)1g∶4mL,离心前pH2.8,酶解pH6.0,大蒜素的提取率0.48%。试验方差结果表明:料液比是提取的主要影响因素。

白皮大蒜中大蒜素的提取

大蒜素是由蒜氨酸在内源蒜酶的催化作用下反应生成的,具有多种重要生理功能。以白皮大蒜为原料,采用有机溶剂提取法提取白皮大蒜中的大蒜素并且采用分光光度法测定大蒜提取液中的大蒜素含量,通过单因素试验分别分析了乙醇体积分数、提取温度、提取时间以及料液比对白皮大蒜中大蒜素提取率的影响。结果表明,最佳提取条件为乙醇的体积分数60%、提取温度50℃、提取时间2 h、料液比为1∶4(g/m L)。在上述的最优条件下大蒜素的提取率可达0.62 mg/g。该结论可以为大蒜素工业化生产提供一定的根据。

NF-κB和TGF-β1在大鼠IgAN纤维化进展中的作用及机制研究

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)和转化生长因子-β1(TGF-β1)在IgA肾病(IgAN)纤维化进展中的作用及意义;观察大蒜素对IgAN的治疗作用,并探究其可能的治疗机制。方法选择健康雌性SD大鼠32只,随机抽取8只作为正常对照组,其余24只建立IgAN纤维化模型。干预前,再将24只IgAN纤维化模型组大鼠随机分为模型对照组、高剂量大蒜素治疗组和低剂量大蒜素治疗组,每组8只。分别于不同时间点收集大鼠尿液、血液以检测尿蛋白定量、血清肌酐含量;用ELISA法检测血清中NF-κB和TGF-β1的浓度;取肾组织分别做普通光镜染色及免疫荧光检查。结果①成功建立了IgAN纤维化大鼠模型;②NF-κB和TGF-β1在IgAN纤维化进展中血清浓度进行性增高,二者呈线性正相关(干预14天:r=0.983,P<0.01;干预28天:r=0.849,P<0.01),且分别与临床检测指标24小时尿蛋白定量、血肌酐均具有正相关性(NF-κB与24小时尿蛋白定量:干预14天r=0.524,干预28天r=0.871;NF-κB与血肌酐:干预14天r=0.622,干预28天r=0.776,均P<0.05。TGF-β1与24小时尿蛋白定量:干预14天r=0.521,干预28天r=0.815;TGF-β1与血肌酐:干预14天r=0.643,干预28天r=0.869,均P<0.05);③大蒜素可以降低IgAN纤维化大鼠尿蛋白定量和血肌酐水平,减少、减轻肾脏病理损伤,降低血清中NF-κB和TGF-β1的浓度水平。结论该课题在国内首次成功建立了IgAN纤维化大鼠模型;血清NF-κB和TGF-β1的水平变化可以作为动态评价IgAN纤维化进展的指标;大蒜素能降低尿蛋白定量、血肌酐水平,减轻病理损伤,降低血清中NF-κB和TGF-β1的浓度水平,可能是通过抑制NF-κB活化、下调TGF-β1浓度水平的机制而达到延缓IgAN纤维化进展的目的 。

日粮中添加不同剂量大蒜素对SPF鸡生长性能与免疫机能的影响

本试验旨在研究日．粮中添加不同剂量大蒜素对7日龄SPF鸡生长性能和免疫机能的影响。105只7日龄SPF鸡平均分为3组：A组为饲喂常规日粮的对照组，B、c组为日粮中分别添加150mg／kg和300mg／kg大蒜素的试验组。饲喂大蒜素后1～6周、8周对各组鸡只称重；饲喂后3～5周、9周对各组鸡只采血，测其血清中新城疫病毒（NDv）及H9亚型禽流感病毒抗体滴度，分析全血中免疫细胞含量；第5、6周时每组剖杀6只鸡，测定胸腺、法氏囊免疫器官指数。结果表明，B组鸡只体重从饲喂大蒜素后第4周起逐渐高于其它组，而c组的体重始终低于其他组；A、B、C各组免疫ND、H9亚型禽流感灭活疫苗后抗体水平差异不显著；饲喂后3周，B、c组淋巴细胞、粒细胞、红细胞总数于均高于A组，饲喂后5周，B纽粒细胞含量与A组相比差异显著（P〈0.05）；B组鸡只的法氏囊和胸腺指数分别在饲喂后5、6周时显著高于A、c组（P〈0．05）。结果显示，日粮中添加150mg／kg大蒜素具有促进SPF鸡生长性能、提高免疫机能的作用，而300mg／kg剂量大蒜素对SPF鸡生长性能具有一定的抑制作用。

酶解法提取大蒜素的工艺研究

研究了不同因素对大蒜素提取率的影响。使用单因素实验方法,分别考察了乙醇体积分数,提取温度,提取时间以及液固比对大蒜素提取率的影响。结果表明捣碎的蒜泥于40℃下酶解30 min,以95%乙醇作为提取剂,液固比为5∶1,在30℃下提取90 min,大蒜素的提取率为2.23 g/kg大蒜。酶解法提取大蒜素的工艺简便可行,能显著提高了大蒜的利用率,为大蒜素提取工艺的工业生产提供理论基础。

大蒜素液空气消毒效果的观察

[目的]用大蒜提取物配制成不同浓度大蒜素溶液,检测其对室内空气消毒的有效浓度。[方法]采用自然沉降法,用1.3mg/m3、2.6mg/m3、5.19mg/m3大蒜素液对室内空气进行喷雾消毒,并在不同时间段,取空气样本作细菌总数比较。[结果]5.19mg/m3大蒜素液对室内空气消毒效果最好。[结论]大蒜素液是一种值得推广的室内空气消毒的有效方法。

大蒜素治疗幽门螺杆菌相关疾病研究进展

幽门螺杆菌是导致胃炎、胃溃疡、胃癌等一系列消化系统疾病的最主要原因,寻找根除幽门螺杆菌的有效方法成为治疗幽门螺杆菌相关疾病的关键。目前因感染者的个体因素、耐药性及经济状况等使临床上所用的三联抗幽门螺杆菌疗法受到一定的限制。大蒜中的大蒜素抗菌活性最强,已经被证实具有丰富的药用价值。因此,摄入大蒜素这种非药物饮食疗法治疗幽门螺杆菌相关疾病能够成为一种经济、安全、有效的疗法。文章对大蒜素治疗幽门螺杆菌相关疾病的进展进行综述。

大蒜素预防新生儿雪口病临床观察

为寻找预防雪口病(亦称鹅口疮)有效药物,本文对0.06‰大蒜素及25%碳酸氢钠预防该病的效果进行了研究。结果显示:低危组中大蒜素组(124例)和碳酸氢钠组(113例)分别与对照组(133例)相比,该病发生率均明显下降(P值均<0.01);高危组中,大蒜素组发生率与对照组相比,差异有显著性(P<0.05)而碳酸氢钠组与对照组相比,差异无显著性(P>0.05)。结果表明,大蒜素及碳酸氢钠作为预防用药可以降低低危组雪口病发生率.而大蒜素对于高危组也显示出良好的预防效果。

大蒜素对白色念珠菌感染的免疫抑制小鼠IL-4和IgG产生水平的影响

目的:探讨大蒜素对白色念珠菌感染免疫抑制小鼠体液免疫功能的影响。方法:将实验鼠随机分为预防组、治疗组和感染组。3组小鼠于实验前3 d腹腔一次性注射环磷酰胺200 mg/kg。实验时预防组小鼠灌服大蒜素7 d,其余两组灌服等量生理盐水;第8天各组小鼠尾静脉接种2×107/ml白色念珠菌菌液,同时给予预防组和治疗组分别灌服大蒜素7 d,感染组灌服等量生理盐水7 d;继之,收集3组小鼠脾细胞悬液和血清,测定其IL-4和IgG的表达。结果:与感染组相比,大蒜素可提高预防组和治疗组小鼠IL-4、IgG产生水平(P<0.01),且以预防组作用明显。结论:大蒜素可提高白色念珠菌感染模型鼠体液免疫的功能。

大蒜素对肉仔鸡脂肪代谢及相关基因表达的影响

探讨大蒜素对肉仔鸡脂类代谢及相关基因表达的影响,为揭示大蒜素调节动物脂肪沉积的机理作依据。试验选取体重相近、体格健壮的1日龄AA肉仔鸡(公)96只,随机分成4组,每组设4个重复,每个重复6只鸡。试验期为42d。在各组基础饲料中分别添加0、200、400、600mg/kg的大蒜素。结果表明,添加400和600mg/kg大蒜素的处理组与对照组比较,肉仔鸡腹脂率和肝脂率显著降低(P<0.05);而添加200、400及600mg/kg大蒜素的处理组与对照组比,皮下脂肪厚度和肌间脂肪厚度没有显著的差异(P>0.05),但有下降的趋势。400mg/kg组和600mg/kg组的甘油三酯、总胆固醇及低密度脂蛋白的含量显著下降(P<0.05);而高密度脂蛋白水平则呈现出显著的提高(P<0.05)。各浓度添加大蒜素组的游离脂肪酸的水平与对照组相比而言,有降低的趋势,但差异不显著(P>0.05)。添加400mg/kg或600mg/kg大蒜素可显著降低AA肉仔鸡肝脏中的乙酰辅酶A羧化酶、脂肪酸合成酶的mRNA表达水平(P<0.05);添加600mg/kg大蒜素组的肉仔鸡肝脏脂蛋白脂酶mRNA水平显著上调(P<0.05)。添加600mg/kg大蒜素的肉仔鸡腹脂中乙酰辅酶A羧化酶mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05),脂蛋白脂酶mRNA水平则显著上升(P<0.05)。大蒜素对肉仔鸡腹脂脂肪酸合成酶mRNA水平无显著影响。

大蒜素对脓毒症大鼠肠黏膜屏障的保护作用

目的研究大蒜素对脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能的保护作用，并初步探讨其机制。方法24只雄性SD大鼠随机（随机数字法）分为假手术组、脓毒症模型组、大蒜素治疗组，每组8只。脓毒症模型采用盲肠结扎穿孔（cecum ligation and punctue，CLP），6h及12h后用大蒜素（30mg／kg，ip）干预，假手术组及模型组于同时间点给予等量生理盐水。24h后处死大鼠检测血清D-乳酸、二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）活性、荧光异硫氰酸盐葡聚糖（fluorescence isothiocyanate dextran，FITC—Dextran，FD-40）水平；检测肠组织肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性，并取部分小肠组织进行组织病理学分析。统计方法采用单因素方差分析。结果与假手术组比较，CLP组大鼠血清D-乳酸、DAO活性及FD-40水平明显升高[D-乳酸（nmol／mE）：（599．4±101．1）vs．（149．2±20．63），t=11．84，P〈0．01；DAO（ng／mL）：（302．1±64．56）vs．（76．57±14．76）．t=9．433，P〈0．01；FD-40（ng／mL）：（6664．0±1437．0）vs．（1446．0±205．0），t=9．704，P〈0．01]；病理切片示CLP组大鼠肠道形态学损伤明显；肠组织中TNF-α、IL-6、MDA水平明显升高[TNF-α．（pg／mL）：（186．35±20．43）vs．（58．76±8．94），t=17．23，P〈0．01；IL-6（pg／mL）：（763．25±85．23）vs．（125．36±14．37），t=22．54，P〈0．01；MDA（nmol／mg prot）：（29．36±3．27）vs．（7．24±0．85），t=16．61，P〈0．01]，SOD活性降低[SOD（U／mg prot）：（35．75±6．53）vs．（73．26±8．35），t=10．57，P〈0．01]。大蒜素显著减少脓毒症诱导的血清中D-乳酸、DAO活性及FD-40的升高[D-乳酸（nmol／mL）：（330．1±81．77）vs．（599．4±101．1），t=7．086，P〈0．01；DAO（ng／mL）：（171．8±49．70）vs．（302．1±64．56），t=5．45，P〈0．01；FD-40（ng／mL）：（3349．0±1167．0）vs.（6664．0±1437．0），t=6．165，P〈0．01]；病理切片显示大蒜素减轻肠道形态学损伤；大蒜素明显抑制肠组织中TNF—α、IL-6、MDA水平[TNF-α（pg／mL）：（95．37±12．68）vs．（186．35±20．43），t=12．29，P〈0．01；IL-6（pg／mL）：（354．27±46．27）vs．（763．25±85．23），t=14．45，P〈0．01；MDA（nmol／mg prot）：（16．27±3．14）vs．（29．36±3．27），t=9．831，P〈0．01]，增加SOD活性[SOD（U／mg prot）：（55．35±6．23）vs．（35．75±6．53），t=5．522，P〈0．01]。结论大蒜素对CLP诱导的肠黏膜屏障功能具有保护作用，其机制可能与抑制炎症和氧化应激有关。

大蒜素抑制人类多发性骨髓瘤细胞增殖和侵袭能力的实验研究

目的 观察在体外大蒜素对人类多发性骨髓瘤（MM）细胞株RPMI8226细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响,并探讨其机制.方法 采用0、5、25、125 μmol/L大蒜素处理人类MM细胞株RPMI8226,以0μmol/L大蒜素处理组作为对照组.采用细胞计数试剂盒（CCK-8）、流式细胞仪、Transwell法检测其对肿瘤细胞增殖、凋亡及细胞侵袭能力的影响,并采用Western blotting分析测定细胞转化生长因子-α（TGF-α）、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）蛋白表达.结果 0、5、25、125 μmol/L大蒜素处理组的RPMI8226细胞增殖率分别为1.00％±0.02％、0.98％±0.04％、0.73％±0.22％及0.44％±0.15％,组间差异有统计学意义（F =329.2,P＜0.001）;25、125 μmol/L大蒜素处理组RPMI8226细胞增殖率较对照组显著降低（P ＜0.001;P ＜0.001）;而5 μmol/L处理组的细胞增殖率与对照组比较差异无统计学意义（P =0.395）.0、5、25、125 μmol/L大蒜素处理组的RPMI8226细胞凋亡率分别为3.05％±0.53％、4.06％±0.29％、12.17％±1.08％及12.81％±1.78％,组间差异有统计学意义（F=531.0,P＜0.001）;25、125 μmol/L大蒜素处理组RPMI8226细胞凋亡率较对照组显著增加（P =0.013;P =0.012）;而5μmol/L处理组的细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义（P =0.211）.0、5、25、125 μmol/L大蒜素处理组穿过细胞数分别为112.5±1.9、104.8±4.0、76.9±2.6及52.5±3.7,组间差异有统计学意义（F =734.9,P＜0.001）;25、125 μmol/L大蒜素处理组的细胞侵袭能力较对照组显著降低（P ＜0.001;P ＜0.001）;而5μmol/L大蒜素处理组与对照组比较差异无统计学意义（P =0.160）.Western blotting结果显示,TGF-α、MMP-2、MMP-9及TIMP-2蛋白表达量在不同浓度大蒜素处理组的组间差异均有统计学意义（F=227.1,P＜0.001;F =348.5,P＜0.001;F =359.7,P＜0.001;F =158.0,P＜0.001）;25、125 μmol/L处理组TGF-α、MMP-2、MMP-9蛋白表达量较对照组显著降低（均P＜0.001）,TIMP-2蛋白表达量较对照组显著升高（均P ＜0.001）;而5μmol/L处理组与对照组相比差异均无统计学意义（P =0.349;P =0.744;P=0.613;P =0.567）.结论 大蒜素在体外可明显抑制MM细胞株RPMI8226的增殖和侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制与大蒜素能够抑制TGF-α、MMP-2、MMP-9表达并同时促进TIMP-2表达有关.