多位点VNTR用于异基因骨髓移植植入存活检定研究

目的：探讨多位点可变数串联重复序列（ Ｖ Ｎ Ｔ Ｒ）—— Ｄ１７ Ｓ３０、 Ｐ Ａ Ｈ、 Ｖ Ｓ１７、 Ｍ Ｌ Ｏ Ｗ １ 在异基因骨髓移植存活检定中的应用。方法：以聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）扩增４ 个位点 Ｖ Ｎ Ｔ Ｒ， Ｐ Ｃ Ｒ 产物以聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染法检测，对２ 名异基因骨髓移植（ Ａｌｌｏ Ｂ Ｍ Ｔ）患者作移植物成活检定研究。结果：受者获得了供者源性细胞植入存活的证据。结论：多位点 Ｖ Ｎ Ｔ Ｒ个体特异性强、识别力高，可作为 Ａｌｌｏ Ｂ Ｍ Ｔ 植活的可靠指标，尤其是用于血型、性别、 Ｈ Ｌ Ａ 表型全相合的 Ａｌｌｏ Ｂ Ｍ Ｔ，移植后 １５ 天便可获得植入证据。

肝细胞生长因子对异基因骨髓移植小鼠血清TNF-α、IFN-γ、IL-4水平的影响

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后血清TNF-α、IFN-γ、IL-4的影响.方法:BALB/c小鼠接受60钴11Gy全身照射,将昆明小鼠骨髓移植给该BALB/c小鼠.随机将BALB/c小鼠分A、B两组,A组移植后0～7 d皮下注射HGF,B组皮下注射PBS,移植后第8天取血检测TNF-α、IFN-γ和IL-4水平.结果:A组的TNF-α、IFN-γ均低于B组(P<0.01);A组的IL-4高于B组(P<0.05).结论:HGF对小鼠allo-BMT后的细胞因子失衡具有调节作用.

同种异基因骨髓移植治疗小儿难治性白血病

本文介绍我科近来成功应用同种异体骨髓移植（Ａｌｏ－ＢＭＴ）治疗１例小儿复发性白血病的方法、结果和经验体会。资料与方法：１）病例：男性病儿，７岁，急性粒单细胞白血病（Ｍ４ａ）复发，经再次诱导治疗获缓解（ＣＲ２），巩固和强化治疗３疗程后行ＡｌｏＢＭＴ；２）供体：同胞弟弟，４岁，组织配型结果ＨＬＡ－Ａ、Ｂ和ＤＲ位点全相合，但红细胞血型不合；３）移植步骤：①预处理，由全身放疗（ＴＢＩ），８００ｃＧＹ（肺部屏蔽６００ｃＧＹ）。②化疗：ＣＴＸ６０ｍｇ／ｋｇ×２ｄ；ＶＰ１６６００ｍｇ／ｍ２×１ｄ；Ａｒａ－Ｃ１０００ｍｇ／ｍ２×１ｄ。③骨髓动员与采集：应用重组人粒系集落刺激因子（ｒＧ－ＣＳＦ）５μｇ／ｋｇ·ｄ－１，皮下注射５ｄ作骨髓造血干细胞动员后，第５ｄ供体全麻下，于双侧髂脊多位点抽取骨髓液３５０ｍＬ，供体于术中输血４００ｍＬ，术后恢复良好。④骨髓液特殊处理和输注：６％羟乙基淀粉沉淀骨髓液中与受体血型不合之Ａ型红细胞后，静脉快速滴注。输入有核细胞为１５×１０９／ｋｇ，含ＣＤ３４＋细胞３４５×１０６／ｋｇ。⑤促进骨髓增生：移植第一天起，ｒＧ－ＣＳＦ：１０μｇ／ｋｇ·ｄ－１，直至外周白细胞计数恢复；４）副反应防治：①病?

骨髓移植并发的肝静脉闭塞病——附1例报告

肝静脉闭塞病（HVOD）为肝小静脉非血栓性纤维化，导致广泛小静脉内狭窄，阻塞。可时伴有不同程度的肝细胞坏死。临床上以黄疸，肝肿大/或右上腹痛，腹水或突然体重增加为特征，为骨髓移植（BMT）较常见的早期并发征，在异基因骨髓移植（ALLO-BMT）发生率为20%-40%，

G-CSF预处理供者单倍体相合骨髓移植加用CD25单克隆抗体预防急性GVHD的临床研究

探索单倍体相合未去T细胞骨髓移植应用CD2 5单克隆抗体预防急性移植物抗宿主病 (GVHD)的疗效。在 1 999年 2月至 2 0 0 1年 1 1月期间 ,对 2 8例白血病病人进行HLA 2 - 3个位点不合骨髓移植 ,其中 2 0 0 0年 1 1月前完成的不使用CD2 5单抗的 1 5例为对照组 ,此后完成的 1 3例为本方案组 ,两组供者均接受粒细胞集落刺激因子(G CSF ,Lenograstim) 2 50 μg/d ,皮下注射 ,连用 7天后采髓 ;环孢菌素A ,氨甲蝶呤 ,抗胸腺细胞球蛋白和霉酚酸酯(MMF)联合用于GVHD预防。研究组病例在移植前 2小时和移植后第 4天加用CD2 5单克隆抗体 (Basiliximab)进一步预防GVHD ;并对两组移植后植入 ,GVHD发生和无病存活情况进行比较。结果表明 ,2 8例患者移植后均植入成功 ,植入直接证据的检测证实完全供者造血 ,两组造血重建时间比较无显著性差异 (P >0 .0 5) ;未用抗体的对照组急性Ⅱ -Ⅳ度GVHD发生率 33 .3 % ,本方案组加用CD2 5单克隆抗体 ,无 1例发生急性Ⅱ -Ⅳ度GVHD ,两组之间差异有显著性 (P <0 .0 5) ;慢性GVHD发生均为局限性 ,两组的差异无显著性 (P >0 .0 5)。对照组中位随访2 6(1 5 - 36)月 ,活存 9/ 1 5例 ,本方案组中位随访 8(3 - 1 5)月 ,活存 1 2 / 1 3例 ,Kaplan Meier存活曲线分析与对数秩检验 ,本方案组 1?

供体T_(Reg)细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和造血重建的影响

本研究探讨供体CD4+CD25+调控T细胞(regulatoryTcell,TReg)输注对异基因骨髓移植(allo-BMT)后小鼠移植物抗宿主病(GVHD)和造血重建的影响。建立C57BL/6→BALB/c小鼠allo-BMT模型,体外磁珠分离纯化供鼠外周血CD4+CD25+TReg细胞,接受移植的小鼠随机分为3组,在移植骨髓后6-8小时分别予尾静脉输注CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25-T细胞和RPMI1640培养液(空白对照)。以移植后GVHD表现,肝、脾、小肠组织病理形态、生存期及白细胞(WBC)、血小板(Plt)的重建为观察指标并进行组间比较。结果显示:TReg阳性细胞移植组,TReg阴性细胞移植组和空白对照组小鼠WBC>1.0×109/L的时间分别为(8.14±3.26)天、(17.62±5.71)天、(19.81±6.77)天;Plt>20.0×109/L的时间分别为(5.29±1.34)天、(8.97±3.44)天、(9.52±3.92)天,TReg阳性细胞移植组WBC和Plt恢复时间比TReg阴性组与空白对照组快(P<0.05)。3组小鼠在移植后15天GVHD评分为(1.33±0.58)、(1.80±0.27)、(1.93±0.45),TReg阳性细胞移植组小鼠与TReg阴性细胞移植组、空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。移植后(25-30天)的TReg阳性细胞移植组小鼠肝、脾、小肠GVHD病理损害较同期TReg阴性细胞移植组与空白对照组小鼠有一定程度的减轻。3组小鼠移植后平均存活时间分别为(41.45±17.88)天、(18.75±14.39)天和(25.67±16.84)天,TReg阳性细胞移植组小鼠平均存活时间较TReg阴性细胞、空白对照组小鼠延长(P<0.05)。结论:小鼠allo-BMT后输注供体TReg细胞可以减轻移植后GVHD程度,延长小鼠生存期,促进造血重建。

骨髓间充质干细胞对大鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的影响

目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）对异基因骨髓移植（allo—BMT）后移植物抗宿主病（GVHD）的影响。方法：从大鼠骨髓中分离培养问充质干细胞，通过形态学观察及流式细胞术检测表面标志以鉴定其纯度。通过混合淋巴细胞培养（MLR）检测MSCs体外对T细胞增殖的影响。建立大鼠GVHD模型（SD—Wistar），对其进行allo—BMT的同时，共移植不同数量供者源性的MSCs，观察受体大鼠的临床表现、绘制Kaplan—Meier生存曲线，并通过病理分析，综合评价MSCs，对allo-BMT后GVHD的影响。结果：在混合淋巴细胞培养体系中加入与反应淋巴细胞同源的MSCs，能够抑制T细胞的增殖，不同MSCs浓度组之问存在显著性差异（P〈0．01）。异基因骨髓移植时，供鼠MSC与T细胞比例为1：5、2：5共输注时，能推迟受鼠GVHD的发生时间，延长生存期，但并未避免GVHD的发生；当比例为1：1时，只有20％的受鼠发生了慢性GVHD反应，1—2周后逐渐缓解，并得到了长期生存，其余80％大鼠均未出现GVHD反应而长期生存。结论：大鼠MSCs不仅在体外能够抑制T细胞的增殖，体内共移植骨髓和高数量的MSCs也可以降低GVHD的发生率和严重程度，并延长受鼠的生存时间。本研究结果为临床GVHD的防治提供了新的思路。

人类白细胞抗原/昆合淋巴细胞培养不合的骨髓移植新途径

本文报告了13例HLA/MLC配型不合的骨髓移植。所有病例至少有HLA一个位点不同,或MLC的相对反应值反复地明显地高于正常,或二者皆有。13例中有4例采用常规预防急性移植物抗宿主病(GVHD)方法,结果皆发生重度GVHD。有9例同时输注了配型不同的,胎龄4～5个月的胎肝与胸腺,其平均细胞数为9.3×10~4/kg。此9例中有8例无或仅有轻微急性GVHD(0～1度),有1例发生中度(Ⅱ度)急性GVHD。统计学方法说明所采用的新途径对预防GVHD有明显优越性。

小鼠异基因骨髓移植γ线清髓性照射对骨髓内皮龛的损伤研究

本研究探索异基因骨髓移植清髓性γ线照射预处理对受鼠骨髓内皮的损伤程度。体外培养小鼠骨髓单个核细胞,经5-7天检测其表面标记、吞噬Dil-Ac-LDL和结合FITC-UEA-1鉴定,并行CFSE标记。分析正常组、清髓性照射组、内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)移植组及照射联合EPC移植组小鼠外周血中白细胞变化、骨髓内皮的改变及CFSE标记EPC的骨髓内分布。结果发现,培养细胞鉴定证实为CD31+CD133+CD45low/-,且具有吞噬Dil-Ac-LDL和结合FITC-UEA-1能力。小鼠清髓照射后外周血白细胞迅速减少,与正常组相比,有显著差异(p<0.05)。照射后3天,骨髓中大量出血,内皮细胞和基底膜间连接被损坏。清髓照射后输注CFSE标记EPC,18小时后小鼠骨髓中可见CFSE+细胞,其细胞量是正常小鼠单纯EPC输注组的58倍(p<0.05)。结论:移植清髓照射预处理引起严重骨髓内皮龛损伤,该损伤驱动外源性EPC的归巢。

造血干细胞移植治疗白血病及其他恶性肿瘤112例临床研究

报告造血干细胞移植治疗白血病及其他恶性肿瘤１１２例，其中急性白血病９１例，慢性粒细胞白血病１２例，恶性淋巴瘤７例，骨随瘤及神经母细胞瘤各１例。１１２例中自体骨髓移植（ＡＢＭＴ）１４例，净化自体骨髓移植（ＰＡＢＭＴ）２５例，自体外周血干细胞移植（ＡＢＨＳＣＴ）４０例，异基固骨髓移植（Ａｌｌｏ－ＢＭＴ）２４例，胎肝造血干细胞移植（ＦＬＨＳＣＴ）９例，３年无病生存率（ＤＦＳ）及复发率分别为６８．３２％、６７．５７％、６９．５４％、５７．１２％、３３．３３％和３０．７６％、２６．８０％、２０．０８％、１３．００％、６２．５０％。同期化疗患者３年ＤＦＳ率及复发率分别为７．３８％及７６．４％。五个移植组疗效明显优于化疗组。

骨髓移植后造血及细胞形态学观察

作者系统地研究了1990年前33例异基因与同基因骨髓移植后受者骨髓与外周血的细胞形态,若干发现与其他报告相同。例如,受者骨髓先出现幼稚造血细胞与造血岛,骨髓在30天左右完全恢复。作者还发现,不仅在受者抗移植物反应(排斥反应)时,而且在GVHD时亦可见到巨噬细胞吞噬有核细胞的现象。移植后可以只有形态类似淋巴细胞的小巨核细胞。外周血可出现成堆的小红细胞,其间以细丝相连接。

Bcr/abl融合基因及Ph染色体检测在慢性髓系白血病中的临床意义

目的 探讨慢性髓系白血病 (CML)细胞中Ph染色体阳性细胞与bcr/abl融合基因表达之间的关系及临床意义。方法 用热变性姬姆萨R显带 (RHG)技术和逆转录筑巢式聚合酶链反应 (RT -nest -PCR)对 171例CML患者的骨髓或外周血单个核细胞进行了分析 ,并对其中 17例行异基因骨髓移植 (Allo -BMT)患者进行短期随访。结果 15 4例未经异基因造血干细胞移植 (allo -PBSCT)的CML患者中 14 2例( 92 2 % )为Ph染色体阳性 ,14 6例 ( 94 8% )表达bcr/ablmRNA ,2种方法结果一致者 14 2份 ( 92 2 % )。 17例患者allo -BMT后 1～ 2 4个月 ,仅 1例出现Ph阳性 ,12月后RT -PCR分析结果 10例阴性 ,7例阳性。结论 2种方法各有其优缺点 ,在CML患者的诊断和治疗监测中 ,宜将细胞遗传学分析与PCR方法相结合。allo -BMT是目前治疗CML的最佳方法之一。

DIS 80位点分析用于骨髓移植存活检定

以ＰＣＲ扩增ＤＩＳ８０位点作为Ａｌｌｏ－ＢＭＴ后植入检定证明，观察２例Ａｌｌｏ－ＢＭＴ，１例完全植入，１例为嵌合状态，并分析了以ＤＩＳ８０作为植入证明的优点。

异基因骨髓移植中PCR-SSP和RFLP对HLA-DRB、DPB1分型的应用

目的:探讨序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）和聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）对HLA-DRB、DPB1分型在异基因骨髓移植中应用的可行性。方法:应用19对不同的DRB抗原所对应等位基因序列特异性的引物,PCR扩增供受者各20个样本DRB,产物直接琼脂糖凝胶电泳分析;同时用另一对引物PCR扩增DPB1第二外显子,产物10种限制性内切酶酶切分析。结果:各DRB带清晰可辨,直接确定为该型;DPB1的多态性片段编码转换后确定其基因型;4例找到供者。结论:它们是异基因骨髓植前快速、精确和可靠的基因分型手段。

白血病中嵌合体的过继性免疫治疗

异基因骨髓移植(allo-BMT)能够使造血恶性肿瘤伴其它顽固性疾病的患者得到缓解。许多病人的缓解期长达10年以上而无需附加其它治疗,一些病人甚至得到痊愈。原发肿瘤复发是导致进展期病人、有时也是早期病人治疗失败的一个常见原因。白血病早期,即急性白血病的第一次完全缓解期和慢性粒细胞白血病(CML)的慢性期,其 allo-BMT 后3年复发率为10%

造血干细胞移植治疗白血病和淋巴瘤

目的 :探讨造血干细胞移植治疗白血病和淋巴瘤的疗效、移植过程中的并发症及其预防和移植后的植活证据及微小残余病灶检测等问题。方法 :2例行同胞间异基因骨髓移植 (Allo- BMT)、5例行自体外周血干细胞移植 (APBSCT)。采用 Cs A+MTX预防 GVHD;PGE1+潘生丁预防 HVOD;以 APOB、SM7和D1 S80 三个位点多态性分析作为植活证据 ;以 bcr/abl、AML 1- ETO融合基因或 Ig H基因重排作为 MRD检测指标。结果 :2例 Allo- BMT均证实植活 ,并 MRD检测标志性基因检测转阴或表达减弱。 Cs A+MTX、PGE1+潘生丁分别是预防 GVHD和 HVOD的有效方法。结论 :白血病 Allo- BMT较 APBSCT有效 ,APB-SCT对淋巴瘤有较好的疗效。MRD的检测是估计预后的良好指标。

A CLINICAL STUDY OF THE HEMATOPOIETIC STEM CELL TRANSPLANTATION IN 112 PATIENTS WITH LEUKEMIA AND OTHER MALIGNANT DISEASES

One hundred and twelve patients received hematopoietic stent cell transplantation (HSCT), including 91patients with acute leukemia, 12 patients with chronic nyeloid leukemia, 7 patients with lymphoma and 2patients with myeloma and neuroblastoma respectively.Among them, 14 patients were treated with unpurged autologous bone marrow transplantation (ABMT), 25patients with purged autologous bone marrow transplantation (PABMT), 40 patients with autologous peripheral blood hematopoietic stem cell transplantation (APBHSCT), 24 patients with allogencic bone marrow transplautation (Allo-BAT), 9 patients with fetal liver hematopoietic stem cell transplantation (FLHSCT). The three year disease free survival (DFS) rates in these five groups were 68.3%, 67.5%, 69.54%, 57.12% and 33.33%respectively. The relapse rates were 30.76%, 26.80%,20.8%, 13% and 62.5% respectively. In contrast, in the conventional chemotherapy group, the three year DFS rate and relapse rate were 7.385 and 76.4% respectively.These results indicated that the APBHSCT group had a quicker hematopoietic reconstitution with less complication of infection. All of these five transplantation groups had much higher three years disease free survival rates than that of the conventional chemotherapy group.