高压氧对异基因骨髓移植后aGVHD影响的实验研究(英文)

本研究探讨高压氧(HBO)在抗异基因骨髓移植后aGVHD和提高生存率中的作用及机制。给受致死量照射的C57BL/6受鼠注入供鼠BALB/c骨髓与脾淋巴细胞的混合液,分别给与高压氧、环孢素A、氨甲蝶呤处理。用流式细胞仪检测脾T细胞及其亚群和黏附分子CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD11a+、CD4+CD18+、CD8+CD11a+、CD8+CD18+的表达,用ELISA和RT-PCR法检测细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和TNFα的表达。结果表明:HBO组小鼠11天的活存率明显高于异基因移植组及CsA+MTX组;HBO和CsA+MTX可明显降低脾组织中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD11a+、CD4+CD18+、CD8+CD11a+、CD8+CD18+的表达(p<0.05);HBO组小鼠血清IL-2和TNFα的浓度及脾组织中IL-2和TNFα mRNA的含量都低于异基因骨髓移植组(p<0.05),但高于CsA+MTX组;HBO组小鼠脾组织中IL-4和IL-10 mRNA的含量显著高于异基因骨髓移植组和CsA+MTX组(p<0.05)。结论:高压氧在对抗aGVHD和提高活存率方面优于环孢素A和氨甲蝶呤,其抗aGVHD的作用机制与调节促炎/抑炎细胞因子的分泌和黏附分子的表达及抑制T淋巴细胞作用有关。

大鼠MMSCs异基因移植后的生存和对受体免疫状况的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(MMSCs)同种异基因移植后的生存状况和对受体免疫状态的影响。方法SD大鼠20只分为MMSCs移植组10只,培养液对照组10只。体外DiL荧光标记MMSCs,移植后共聚焦荧光显微镜下追踪MMSCs在体内的存活情况,观察受体鼠生长状况和眼部情况,比较两组角膜免疫分子MHC-Ⅱ mRNA的表达差异。结果移植4周后大量的MMSCs存活于角膜缘,结构完整,生长良好。受体鼠全身情况良好,眼局部无排斥反应发生。受体鼠角膜表达MHC-Ⅱ,对照组未表达。结论局部同种异基因移植后4周MMSCs在受体眼大量生存,受体全身和眼局部正常,应用于治疗眼表创伤疾病是可行的。

Bcr/abl融合基因及Ph染色体检测在慢性髓系白血病中的临床意义

目的 探讨慢性髓系白血病 (CML)细胞中Ph染色体阳性细胞与bcr/abl融合基因表达之间的关系及临床意义。方法 用热变性姬姆萨R显带 (RHG)技术和逆转录筑巢式聚合酶链反应 (RT -nest -PCR)对 171例CML患者的骨髓或外周血单个核细胞进行了分析 ,并对其中 17例行异基因骨髓移植 (Allo -BMT)患者进行短期随访。结果 15 4例未经异基因造血干细胞移植 (allo -PBSCT)的CML患者中 14 2例( 92 2 % )为Ph染色体阳性 ,14 6例 ( 94 8% )表达bcr/ablmRNA ,2种方法结果一致者 14 2份 ( 92 2 % )。 17例患者allo -BMT后 1～ 2 4个月 ,仅 1例出现Ph阳性 ,12月后RT -PCR分析结果 10例阴性 ,7例阳性。结论 2种方法各有其优缺点 ,在CML患者的诊断和治疗监测中 ,宜将细胞遗传学分析与PCR方法相结合。allo -BMT是目前治疗CML的最佳方法之一。

恶性血液病患者异基因造血干细胞移植后骨髓T淋巴细胞亚群重建的动态观察

目的研究恶性血液病患者经异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后骨髓免疫重建中T淋巴细胞的重建规律及其与外周血中T淋巴细胞重建的差异。方法本研究采用前瞻性研究设计。收集2015年9月至2017年1月在我院血液科行allo-HSCT的41例恶性血液病患者的骨髓及外周血标本,收集同期7名健康供者的骨髓及外周血标本作为对照样本。用流式细胞术分析移植前和移植后15、30、60、90、180 d时的T淋巴细胞亚群分布,包括CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、辅助性T细胞(Th)1、Th2,并用Luminex技术检测Th1相关细胞因子白细胞介素2受体(IL-2R)、白细胞介素18(IL-18)水平。结果恶性血液病患者在移植后15 d和30 d时骨髓中CD4+T淋巴细胞比例均低于对照组(P均<0.05),至移植后180 d仍未见回升;CD8+T淋巴细胞比例在移植后早期(15、30 d)低于对照组(P均<0.01),60 d时恢复至正常水平;骨髓中CD4+和CD8+T淋巴细胞比例整体水平均低于外周血中水平(P=0.001、0.002)。恶性血液病患者在移植后15、30、60、90、180 d时骨髓中Th1比例均高于对照组(P均<0.05),且整体水平高于外周血中水平(P=0.006);骨髓中Th2比例在移植后90 d内均无明显变化,在180 d时高于对照组(P=0.034),但整体水平与外周血中水平无明显差异(P>0.05)。骨髓中CD4+/CD8+T淋巴细胞比值在移植后逐渐下降,至移植后180 d时低于对照组(P=0.040);而骨髓中Th1/Th2比值在移植后90 d内各时间节点(15、30、60、90 d)均高于对照组(P均<0.01),180 d时与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。恶性血液病患者骨髓和外周血中IL-2R水平在移植后15、30、60、90 d均高于对照组(P均<0.05);IL-18水平在移植后15、30、60 d高于对照组(P均<0.05),但移植后90 d时仅外周血中水平与对照组差异有统计学意义(P=0.021);骨髓与外周血中IL-2R和IL-18整体水平均无明显差异(P均>0.05)。结论恶性血液病患者allo-HSCT后,骨髓中各T淋巴细胞亚群的重建规律不同,且与外周血中有所差异。

体外阻断CD137-CD137L途径控制小鼠移植物抗宿主病的研究

目的探讨体外阻断活化的供鼠T淋巴细胞CD137-CD137L共刺激途径控制小鼠异基因骨髓移植（allo-BMT）后急性移植物抗宿主病（aGVHD）及其机制。方法供、受鼠的淋巴细胞体外混合培养，分别加入抗CD137L单抗或不加抗CD137L单抗培养后与供鼠骨髓细胞混合移植给受鼠。采用流式细胞术检测移植后受鼠T细胞亚群的变化，RT-PCR法检测细胞因子mRNA表达水平的变化，观察移植后受鼠GVHD的临床及病理改变。结果与未用抗CD137L单抗组相比，应用抗CD137L单抗组CD3^＋CD8^＋T细胞明显降低（P＜0．01）；IFN-γ表达水平明显减低（P＜0．01），IL-10的表达水平明显升高（P＜0．01）。移植后未预防GVHD组（A组）小鼠移植后15d内均死于aGVHD。采用甲氨蝶呤＋环孢素预防GVHD组（B组）小鼠100％发生aGVHD，但临床及病理改变程度较A组轻，平均存活时间[（9．5±2．5）d]较A组[（7．5±1．5）d]略有延长。采用抗CD137L单抗预防GVHD组（C组）受鼠aGVHD的发生率为70％，程度比A、B两组轻，与A、B两组相比生存率明显提高（P＜0．01），平均存活时间[（16．0±2．5）d]明显延长（P＜0．01），30％的小鼠生存时间大于30d。结论抗CD137L单抗体外阻断CD137-CD137L共刺激途径能有效控制小鼠GVHD，可能与影响Ⅰ类和Ⅱ类T细胞因子平衡有关。

基于小鼠模型的异基因骨髓移植中合适移植细胞量的实验研究

目的探讨在小鼠异基因骨髓移植模型中的合适移植细胞量。方法 6～8周雌性BALB/c小鼠经7.0GyX线全身照射后,4h内分别输入1×106(A组)、5×106(B组)、1×107(C组)、2×107(D组)个6～8周雄性C57BL/6J小鼠的骨髓细胞,比较移植后各组小鼠存活率、外周血白细胞、T和B淋巴细胞数量及移植组的嵌合情况。结果 C组生存率明显低于其它各组(P<0.05);A、D组嵌合率达95%以上后出现回落;D组造血及免疫重建较其它组提前达正常水平。结论一定范围移植细胞量越多越有利于移植后造血及免疫重建;生存率、植入率及节约干细胞资源方面综合评估,5×106可作为移植优势剂量。