Identification of cultured male epidermal allografts by detecting Y chromosome DNA fragments in female burn victims

The existence of cultured male epidermal allografts in 14 bioptic samples of 9 female burned cases was identified by detecting Y chromosome DNA fragments with polymerase chain reaction (PCR). Y chromosome DNA fragments were found in all the samples and the longest case of allograft survival was detected in a 92nd-day sample. This suggests that the survival time of cultured human epidermal allografts on the wounds is longer than those of non-cultured ones.

雷公藤多甙抑制猪同种异体小肠移植排斥的效果研究

以杂交长白猪为动物模型，采用节段小肠二步移植法作同种异体移植。研究分两个阶段进行，第一阶段为观察雷公藤多甙抑制急性排斥的作用。在同窝猪无免疫抑制剂组（Ⅰ组）、大剂量环孢素Ａ（ＣｓＡ）组（Ⅱ组）、小剂量ＣｓＡ组（Ⅲ组）、雷公藤加小剂量ＣｓＡ组（Ⅳ组）中，Ⅰ、Ⅲ组均发生急性排斥，但Ⅱ组中有２只猪因严重感染死亡。第二阶段为观察雷公藤抑制慢性排斥的作用，将Ⅱ、Ⅳ组存活１００ｄ以上的猪分为停用免疫抑制剂（２只）、减量雷公藤（２只）、常量雷公藤（３只）三组，结果示常量组存活３５６～５４７ｄ，无慢性排斥发生，而其余４只猪中有３只发生了慢性排斥。实验的结果说明，雷公藤对异体小肠移植的急、慢性排斥有明确的抑制作用。

检测血清可溶性白介素-6受体的动态变化在肾移植中的临床应用及其价值

目的:监测肾移植患者手术术后血清可溶性白介素-6受体(soluble interleukin-6 receptor,sIL-6R)水平以及其动态改变,进一步明确其临床价值和作用。方法:详细记录所有入选患者的临床和基线数据资料,采用ELISA法监测60例肾移植患者手术前和手术后血清中sIL-6R水平。选择健康志愿者作为正常对照组(n=20)。结果:移植术前,血清sIL-6R的水平肾移植患者与正常对照组相比,差别无统计学意义,移植术后血清sIL-6R水平显著升高,其浓度在第3天时达到最高,针对性治疗有效后其水平逐渐下降,2周后逐渐下降至术前水平(F=15.23,P=0.003)。同时还发现肾脏移植的患者并发感染时血清sIL-6R水平明显上升(LSD-t=7.32,P=0.004)。结论:动态监测血清sIL-6R水平的改变有助于及时早期判断急性排斥反应的发生,是一种重要的免疫学标志物,同时有助于发现合并感染情况。

慢性移植物肾病患者外周血淋巴细胞细胞因子表达的研究

目的探讨慢性移植物肾病(chronic allograft nephropathy,CAN)患者外周的血淋巴细胞细胞因子的表达情况。方法选取2004年7月至2005年8月在中国人民解放军第309医院器官移植研究所就诊的15例CAN和22例移植肾功能正常的肾移植受者,分别列为CAN组和非CAN组。所有患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。两组患者分别抽取空腹外周血4ml,分离外周血淋巴细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应比较两组患者外周血淋巴细胞细胞因子白介素(IL)-2、IL-10、干扰素(IFN)-γ及转化生长因子(TGF)-β1的信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)表达的差异。结果与非CAN组比较,CAN组的IL-2和IL-10 mRNA表达差异无统计学意义(均为P>0.05),IFN-γ、TGF-β1 mRNA表达明显较高,差异有统计学意义(分别为P<0.05、P<0.01)。结论 IFN-γ、TGF-β1 mRNA的高表达可能与CAN的发生、进展有关。

同种异体耳移植的实验研究

目的:①观察同种异体兔耳移植后排斥反应的组织病理学、细胞免疫、体液免疫变化的情况;②为提高同种异体移植耳成活率,预防排斥反应,提供一个有效的免疫抑制治疗方案。方法:以青紫蓝兔和日本大耳白兔为实验动物。以耳大动、静脉及外侧耳缘静脉为蒂,获得单侧(右)全耳,应用显微外科微血管吻合技术进行异体移植。其中青紫蓝兔为受体,日本大耳白兔为供体。实验共选用40对(青紫蓝兔和日本大耳白兔各40只)动物,按受体免疫抑制剂治疗方案随机分为5组:O组,手术对照组(N=5对),行自体兔耳离断回植术;C组,对照组(N=5对),同种异体耳移植后不给予免疫抑制剂;T1组(N=10对),同种异体耳移植后给予FK506单一免疫抑制剂;T2组(N=10对),同种异体耳移植后给予FK506和强的松两联免疫抑制剂;T3组(N=10对),同种异体耳移植后给予FK506、MMF和强的松三联免疫抑制剂。动脉、静脉吻合均选用端端吻合技术。术后观察移植耳存活情况、急性排异发生率及严重程度;供体组织病理分级;受体血浆IL-2、IL-4、IL-8的变化以及受体T淋巴细胞CD4+、CD8+的变化。结果:同种异体兔耳移植30天、100天后T3组在急性排斥反应发生率、供体组织病理分级和受体IL-2、IL-4、IL-8水平与CD4、CD8值的变化等方面与C组、T1组、T2组相比较均有显著差异(P<0.05)。结论:三联免疫抑制剂方案(FK506、MMF和强的松)是预防同种异体兔耳移植排斥反应的一个有效治疗方案。

同种瓣的生物活性与耐久性

液氮保存的同种瓣具有生物活性 ,在临床应用中显示了良好的近中期效果 ,但长期耐久性还有待提高。研究表明 ,同种瓣的供者来源、热缺血时间、灭菌时间和温度、灭菌液的配方、保存方法均能影响瓣膜的生物活性。有活性的同种瓣临床应用效果和使用寿命明显优于无活性的同种瓣 ,在移植后能诱发机体产生供体特异性的体液免疫和细胞免疫反应。瓣膜中存活的成纤维细胞和移植免疫反应与同种瓣耐久性的关系目前意见尚未统一。同种瓣植入的手术方式、供者瓣膜尺寸、宿主因素 (年龄、体重、健康状态 )等均能影响同种瓣的耐久性。

TLR2在大鼠穿透性角膜移植术后免疫排斥反应中的作用

目的通过采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)动态检测大鼠角膜组织TLR2mRNA的表达,研究TLR2在穿透性角膜移植术后免疫排斥反应中的作用。方法实验分四组:正常对照组(N)、同种同体角膜移植组(A)、同种异体角膜移植组(B)和同种异体角膜移植激素抗排斥组(C),A、B、C三组大鼠给予穿透性角膜移植术,术后裂隙灯下观察角膜透明度、新生血管并用排斥反应指数评分;分别于术后第5、7、9天取材,行组织病理学检查和荧光实时定量PCR检测,动态观察角膜组织TLR2 mRNA的表达。结果术后随时间变化角膜植片均出现不同程度的水肿、混浊、新生血管生长。B组大鼠角膜排斥反应指数平均在术后第7天符合排斥反应的诊断并获病理学支持;A组和C组大鼠角膜的排斥反应指数计分未达到诊断标准。正常的角膜组织可见TLR2 mRNA表达;三个手术干预组TLR2 mRNA表达差异倍数均明显高于正常对照组,同种异体角膜移植组角膜TLR2 mRNA的表达较同种同体角膜移植组显著增加,激素抗排斥组角膜TLR2 mRNA表达较同种异体角膜移植组显著降低(P<0.05)。结论TLR2可能作为天然免疫识别受体识别移植抗原,参与角膜移植术后免疫排斥反应。

第3次肾移植术治疗合并HLA抗体强阳性患者1例

肾移植受者体内存在的人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)抗体阳性既影响手术又易发生排斥反应,还能影响移植肾的长期存活。行第3次肾移植,双侧髂窝及髂血管均遭到破坏。由于粘连重、瘢痕形成多、容易损伤血管及肠管等,所以无论是手术血管的选取还是分离均非常困难。中南大学湘雅三医院收治1例HLA抗体强阳性,2次切除移植肾行第3次肾移植患者,术中成功处理移植空间少及血管疤痕粘连等问题,避开敏感位点,运用利妥昔单抗、兔抗人胸腺细胞免疫球蛋白及甲泼尼龙处理抗体,术后利用免疫功能检测制订个体化治疗方案等。术后患者肌酐、尿量趋向平稳,随访16个月移植肾功能良好。

供肝胆管反应在肝移植疗效评价中的应用价值研究

目的研究供肝胆管反应在肝移植疗效评价中的作用。方法回顾性收集2015年1月至2020年12月100例在树兰(杭州)医院接受肝移植手术受者及其相应供者临床资料, 根据是否接受脂肪变性供肝将其分为肝脂肪变性组(HS组, 65例)和非脂肪变性组(non-HS组, 35例), 根据是否发生早期移植物功能不全(early allograft dysfunction, EAD)分为(EAD组, 33例)和非EAD组(non-EAD组, 67例)。用免疫组织化学染色标本中细胞角蛋白19(cytokeratin 19, CK19)阳性胆管细胞所占染色面积百分比定义胆管反应程度(用DR值表示)。分析比较HS组和non-HS组、EAD组和non-EAD组供肝的DR值, 利用单因素及多因素Logistic回归分析, 确定EAD的危险因素;根据受者接受的供肝胆管反应程度(DR=0.4为临界值)结合其是否为脂肪变性供肝进行亚组分析, 评价脂肪变性供肝中胆管反应程度对肝移植术后EAD发生率和生存的影响。结果 HS组(65例)供肝DR(0.59%±0.385%)高于非脂肪变性供肝(0.32%±0.194%)(P<0.01), EAD组供肝DR(0.72%±0.449%)高于非EAD组供肝(0.38%±0.226%)(P<0.01)。多因素Logistic回归分析提示供肝高胆管反应是移植术后发生EAD的独立危险因素。亚组分析结果提示, 接受脂肪变性且低胆管反应程度(DR<0.4%)供肝与接受非脂肪变性供肝移植后受者EAD的发生及生存相当。结论低胆管反应程度的脂肪变性供肝可安全用于肝移植, 结合供肝胆管反应程度的移植肝损伤评价新体系可有效拓展脂肪变性供肝的临床应用。

补体C4d、高敏C反应蛋白及肾移植术后Th1、Th2水平与排斥反应的相关性

目的 分析并探讨补体C4d、高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平及肾移植术后患者辅助性T细胞(Th)1、Th2水平与急性同种异体排斥反应(AR)的关系。方法 回顾性选取西安交通大学第一附属医院肾移植科2016年1月至2018年1月收治的肾移植术患者共155例的临床资料,根据术后是否发生AR,将发生AR的32例作为AR组,未发生AR的123例作为非AR组。分析肾活检组织中C4d表达、血清hs-CRP水平及肾移植术后Th1、Th2水平与AR的相关性。结果 两组移植前单克隆抗体使用、移植前输血、移植后输血、术前群体反应性抗体≥10%的发生率差异无统计学意义(P>0.05);AR组术中供肾冷缺血时间、热缺血时间、HLA错配个数均低于非AR组(P<0.01)。AR组患者的补体C4d阳性率、血清hs-CRP及肾移植术后Th1、Th1/Th2水平高于非AR组,Th2低于非AR组(P<0.01)。Spearman相关性分析结果显示,补体C4d阳性、血清hs-CRP、Th1、Th1/Th2水平与肾移植术后AR存在显著正相关性(P<0.05),Th2水平则存在负相关性(P<0.05)。Logistic回归分析显示,高Th1、高hs-CRP、补体C4d阳性是肾移植术后发生AR的独立危险因素(P<0.05),高Th2是保护因素(P<0.01)。结论 Th1、hs-CRP水平增高、补体C4d阳性与肾移植术后发生AR的风险增加有关,Th2增高与AR的风险降低有关。

CD4小分子拮抗剂的筛选及功能测定

目的筛选靶向CD4 D1功能表位的小分子化合物，并对其介导的免疫抑制功能进行初步评价。方法分别利用MqT以及^3H-TdR掺人法，检测小分子化合物对混合淋巴细胞反应（MLR）的抑制作用，筛选出具有一定剂量依赖抑制效应的小分子化合物；并进一步通过C57BL／6→BALB／c小鼠同种异体皮肤移植模型，对筛选出的小分子化合物的抗移植排斥作用进行初步评价。结果在筛选的19个小分子化合物中，J2呈现出良好的剂量依赖性地抑制T淋巴细胞增殖的作用。进一步抗小鼠皮肤移植排斥反应实验发现，J2能够有效延长皮肤植片的存活时间。结论小分子化合物J2具有良好的免疫抑制作用。

心脏移植实验研究的现状及展望

心脏移植是终末期心脏病最有效的治疗手段, 受限于供心来源不足、移植排斥反应等问题的限制, 心脏移植的临床开展始终受到限制。临床上遇到的困境和挑战成为实验研究的动力和方向。近年, 随着学者的努力和实验新技术的应用, 心脏移植的实验研究取得了诸多突破, 研究人员对心脏移植领域有了更深入更全面的认识, 许多实验进展逐步实现临床转化, 推动心脏移植的临床应用。本文将基于供心来源、免疫排斥机制、心脏移植物血管病变、免疫抑制治疗和术后监测等心脏移植前沿领域, 总结心脏移植实验研究进展和未来方向。

白细胞介素12mRNA在大鼠角膜移植物中的表达研究

目的:评价白细胞介素IL-12mRNA的表达与角膜移植排斥的关系。方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法定量检测大鼠同种异体角膜移植物中IL-2、12mRNA,并对角膜植片进行临床观察,以混浊、水肿和新生血管3项指标积分总和作为排斥反应指数(RI)进行临床评估。结果:同种异体组与对照组大鼠角膜植片在移植术后第12天RI分别为5.80±1.07和3.20±0.84,P=0.00003,同种异体组角膜植片内有大量的细胞介素2、12mRNA的表达。结论:IL-12mRNA的表达在同种异体角膜移植捧斥反应中有重要作用。