Alpha-Chain States in 4N-Nuclei

Alpha-chain states in 4N-nuclei are studied via an analysis of underlying quantummechanical symmetry.Experimental candidates for linear chain states in N alpha particles arepointed out.

血清LncRNA FAF、ITIH4在慢性心力衰竭患者中的表达意义及对预后的预测价值

目的探讨血清长链非编码RNA(LncRNA)FAF、间α胰蛋白酶抑制因子重链4(ITIH4)在慢性心力衰竭(CHF)患者中的表达意义及对预后的预测价值。方法选择2020年1月—2022年1月安徽医科大学第二附属医院急诊内科收治的CHF患者187例为CHF组,再根据NYHA心功能分级分为Ⅱ级亚组65例,Ⅲ级亚组77例,Ⅳ级亚组45例。于同期招募健康志愿者103例为健康对照组。2组受试者均检测血清LncRNA FAF表达和ITIH4水平,CHF患者出院后随访12个月,统计随访期间主要不良心血管事件(MACE)发生率;多因素Logistic回归分析影响CHF患者发生MACE的因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析LncRNA FAF、ITIH4预测CHF患者发生MACE的价值。结果CHF组血清LncRNA FAF表达、ITIH4水平低于健康对照组(t/P=24.469/<0.001、35.196/<0.001)。血清LncRNA FAF表达、ITIH4水平Ⅳ级亚组低于Ⅲ级亚组低于Ⅱ级亚组(F/P=91.653/<0.001、102.345/<0.001)。MACE亚组血清LncRNA FAF表达,ITIH4水平低于非MACE亚组(t/P=13.556/<0.001、6.293/<0.001)。NYHAⅣ级、高水平NT-proBNP是CHF患者发生MACE的危险因素[OR(95%CI)=4.627(2.245~9.538)、2.284(1.505~3.468)],高表达LncRNA FAF、高水平ITIH4是保护因素[OR(95%CI)=0.599(0.425~0.844)、0.666(0.478~0.928)]。LncRNA FAF、ITIH4及二者联合预测CHF患者发生MACE的曲线下面积为0.796、0.801、0.896,二者联合预测曲线下面积高于单独预测(Z=2.453、2.404,均P<0.001)。结论CHF患者血清LncRNA FAF表达和ITIH4水平均降低,且与不良预后有关,联合LncRNA FAF和ITIH4可预测CHF患者预后不良风险。

血清lncRNA T342620联合AFP对肝癌的诊断价值

目的探究肝癌患者血清长链非编码RNA(lncRNA)T342620的表达水平,及其单独或联合甲胎蛋白(AFP)诊断肝癌的临床应用价值。方法采用病例对照研究,收集2021年4月至2023年5月在中国人民解放军南部战区总医院治疗的69例原发性肝癌患者(肝癌组)、32例乙型肝炎患者(乙肝组)、20例肝硬化患者(肝硬化组)、30例原发性肝癌经导管肝动脉化疗栓塞术(TACE)术后患者(肝癌术后组)和同期进行体检的50例健康者(健康体检组)的血清,提取血清总RNA,采用实时荧光定量PCR技术,检测血清中lncRNA T342620的相对表达量;结合患者临床诊疗资料,分析其表达水平与病理特征和血清学相关指标的相关性;运用受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNA T342620单独及联合AFP对肝癌诊断的特异度和灵敏度。根据ROC曲线下面积(AUC)判断诊断效能,评估其在肝癌诊断中的应用价值。各组间比较采用χ^(2)检验,相关性分析采用Spearman法。结果lncRNA T342620在肝癌组和肝癌术后组血清表达水平较健康体检组、乙肝组、肝硬化组高,差异均具有统计学意义(P<0.001);临床病理和血清学相关指标分析显示:肿瘤越大,血清lncRNAT342620表达水平越高,肝癌组血清lncRNA T342620表达水平与白蛋白(ALB)和白球比(A/G)呈负相关(P<0.05),与α-L-岩藻糖苷酶(AFU)和HBV-DNA呈正相关(P<0.05),肝癌术后组患者血清lncRNA T342620表达水平与总胆汁酸(TBA)呈正相关(P<0.05);ROC曲线分析显示:血清lncRNA T342620用于区别肝癌患者与健康者、乙肝和肝硬化患者时,其灵敏度和特异度分别为55.1%和94.1%,具有较好的诊断价值;和AFP联合检测时,灵敏度和特异度分别为91.3%和91.2%,其灵敏度高于各单项指标诊断的灵敏度,且联合检测诊断效能最高,AUC为0.954,与AFP和lncRNA-T342620单独检测的AUC(0.906、0.758)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清lncRNA T342620有可能成为肝癌辅助诊断的新型血清分子标志物。

结直肠腺癌中COL9A1蛋白的表达及其临床意义

目的:探讨微环境中Ⅸ型胶原α1(collagen type IX alpha 1 chain,COL9A1)在结直肠腺癌中的表达及其与肿瘤进展的相关性和临床意义。方法:收集2012年1月至2021年1月手术切除的结直肠癌标本408例,采用免疫组织化学检测结直肠腺癌肿瘤组织及癌旁正常组织中COL9A1表达,同时检测肿瘤组织中肿瘤蛋白53(tumor protein 53,P53)和错配修复(mismatch repair,MMR)蛋白MLH1、MSH6和PMS2的表达,统计分析COL9A1的表达与各临床病理特征参数的关系,以及与P53突变和MMR状态的相关性,并分析COL9A1阳性表达患者的预后情况。结果:COL9A1在结直肠腺癌肿瘤组织中表达显著低于癌旁正常组织(P<0.001);COL9A1的表达与肿瘤浸润深度、临床分期和肠系膜淋巴结转移有关(χ^(2)=16.943、89.031和84.814;均P<0.001),而与P53突变和MMR状态无关(χ^(2)=0.677、1.260,均P>0.05);Log-rank检验显示COL9A1阴性表达患者的无进展生存期(progression free survival,PFS)和总体生存期(overall survival,OS)显著低于COL9A1阳性表达患者(分别P<0.001,P=0.040)。结论:结直肠腺癌中COL9A1蛋白的表达缺失与肿瘤浸润及转移密切相关,并提示不良预后,这可为结直肠癌预后评估、药物筛选等提供可能的分子标志物和治疗策略。

ACLP、COL11A1在胰腺癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的研究胰腺癌中主动脉羧肽酶类样蛋白(ACLP)、Ⅺ型胶原α1(COL11A1)表达及临床预后价值。方法回顾性选择2019年1月—2021年1月陕西省肿瘤医院中西医科和陕西中医药大学附属医院肿瘤科手术治疗的胰腺癌患者88例为研究对象。采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学检测癌组织及癌旁组织中ACLP、COL11A1 mRNA表达和蛋白水平;Pearson相关分析ACLP mRNA与COL11A1 mRNA的相关性;Kaplan-Meier法分析ACLP、COL11A1表达对胰腺癌患者生存预后的影响;Cox回归分析胰腺癌预后的影响因素。结果胰腺癌患者癌组织ACLP、COL11A1 mRNA的相对表达量高于癌旁组织(t/P=31.058/<0.001,27.642/<0.001);胰腺癌患者癌组织中ACLP、COL11A1阳性率分别为69.32%(61/88)、70.45%(62/88),高于癌旁组织的9.09%(8/88)、6.82%(6/88),差异有统计学意义(χ^(2)=66.963、75.155,P均<0.001);胰腺癌组织中ACLP mRNA与COL11A1 mRNA表达呈正相关(r=0.642,P<0.001);TNM分期ⅡB~Ⅲ期、有淋巴结转移的胰腺癌组织中ACLP、COL11A1蛋白阳性率高于TNM分期Ⅰ~ⅡA期、无淋巴结转移(ACLP:χ^(2)/P=19.704/<0.001、12.908/<0.001;COL11A1:χ^(2)/P=22.440/<0.001、14.569/<0.001)。ACLP阳性组3年总生存率为22.95%(14/61),低于阴性组44.44%(12/27),差异有统计学意义(Log rankχ^(2)=5.433,P=0.020);COL11A1阳性组3年总生存率为20.97%(13/62),低于阴性组50.00%(13/26),差异有统计学意义(Log rankχ^(2)=7.281,P=0.007)。TNM分期ⅡB~Ⅲ期、淋巴结转移、ACLP阳性、COL11A1阳性是影响胰腺癌患者预后的独立危险因素[HR(95%CI)=1.781(1.199~2.646),1.962(1.172~3.285),1.505(1.066~2.125),1.568(1.117~2.201)]。结论胰腺癌组织中ACLP、COL11A1 mRNA表达和蛋白水平均明显上调,二者在胰腺癌的发生和进展中发挥促进作用,是新的临床上评估胰腺癌患者预后的标志物。

256排螺旋增强CT联合血清COL3A1、ANXA10水平对非小细胞肺癌的诊断价值及与预后的相关性研究

目的 探究256排螺旋增强CT(MSCT)联合血清Ⅲ型胶原蛋白α-1链(COL3A1)、膜联蛋白A10(ANXA10)水平对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断价值及与预后的相关性。方法 选取2018年3月-2020年3月在本院确诊的NSCLC患者(n=82)作为研究对象,选取同期在我院通过检查确诊的肺部良性病变的志愿者为对照组(n=95),按照实际随访情况将NSCLC患者划分为预后良好组(n=22)和预后不良组(n=60),比较各组血清COL3A1、ANXA10水平。受试者工作特征(ROC)曲线用于分析256排螺旋增强CT联合血清COL3A1、ANXA10水平对NSCLC的诊断价值。结果 NSCLC组血清COL3A1、ANXA10水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清COL3A1、ANXA10水平高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组患者表面通透性(PS)、血流量(BF)水平比预后良好组高,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示,血清COL3A1、ANXA10可辅助诊断NSCLC的曲线下面积(AUC)分别为0.822、0.827,256排螺旋增强CT诊断NSCLC的AUC是0.813,三者联合诊断的AUC为0.947,均优于各自单独检测(Z=3.630、3.484、3.606,P<0.05)。结论 256排螺旋增强CT联合血清COL3A1、ANXA10对NSCLC有一定的辅助诊断价值,三者联合诊断效能更高,血清COL3A1、ANXA10水平升高与NSCLC患者不良预后有一定的关系。

血清ITIH4和MCL-1水平与急性缺血性脑卒中患者病情程度及预后的关系

目的探究急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清间α胰蛋白酶抑制因子重链4(ITIH4)、髓样细胞白血病因子-1(MCL-1)表达与病情程度及预后的关系。方法纳入2019年7月—2022年7月河南科技大学附属黄河医院神经内科诊治AIS患者128例为AIS组。根据入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分,分为轻度亚组(NIHSS<6分,n=42)、中度亚组(NIHSS 6~<14分,n=52)和重度亚组(NIHSS≥14分,n=34)。根据出院3个月时AIS患者改良Rankins评分,分为预后不良亚组(mRS评分>2分,30例)和预后良好亚组(mRS评分≤2分,98例)。另选取同期医院体检的健康人70例为健康对照组。酶联免疫吸附试验检测血清ITIH4、MCL-1水平。Pearson相关分析血清ITIH4、MCL-1水平与病情程度及预后的相关性;多因素Logistic回归分析影响AIS患者预后的因素;受试者工作特征曲线分析血清ITIH4、MCL-1对AIS患者预后的预测价值。结果AIS组患者血清ITIH4、MCL-1水平显著低于健康对照组(t/P=43.211/<0.001,43.191/<0.001);病情程度越重,AIS患者血清ITIH4/MCL-1水平越低(F/P=107.796/<0.001,297.976/<0.001);预后不良亚组梗死面积、入院24 h NIHSS评分高于预后良好亚组(t/P=9.637/<0.001,9.752/<0.001),血清ITIH4、MCL-1水平及出院3个月简易智能状态量表(MMSE)评分、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分低于预后良好亚组(t/P=26.723/<0.001,11.709/<0.001,13.674/<0.001,10.782/<0.001);AIS患者血清ITIH4、MCL-1与梗死面积、入院24 h NIHSS评分呈负相关(r/P=-0.705/<0.001,-0.685/<0.001;-0.761/<0.001,-0.619/<0.001),与出院3个月MMSE评分、MoCA评分呈正相关(r/P=0.656/<0.001,0.632/<0.001;0.751/<0.001,0.789/<0.001);出院3个月MMSE评分高、出院3个月MoCA评分高是影响AIS患者预后不良的独立保护因素[0.622(0.446~0.868),0.606(0.427~0.861)],血清ITIH4低、MCL-1低、梗死面积大、入院24 h NIHSS评分高是危险因素[OR(95%CI)=1.467(1.150~1.870),1.415(1.094~1.829),1.605(1.168~2.205),1.765(1.233~2.526)];血清ITIH4、MCL-1及两项联合预测AIS预后不良的AUC分别为0.811、0.835、0.923,两项联合预测AIS预后不良的AUC大于单一指标,差异具有统计学意义(Z=4.258、4.119,P均<0.001)。结论AIS患者血清ITIH4、MCL-1表达下调,两者表达水平与病情严重程度有关,两者联合对AIS患者预后具有较高的预测价值。

遗传性纤维蛋白原A-α链淀粉样变性

目的:系统性淀粉样变性以AL型和AA型常见,近年国外报道遗传性淀粉样变性发生率并不低,常被误诊为AL型。本文通过报道国内首例遗传性纤维蛋白原A-α链淀粉样变性的临床病理特点,加深对遗传性淀粉样变性的认识,提高其诊断率。方法:观察患者的临床病理特点,肾组织进行A蛋白、κ、λ轻链、纤维蛋白原、甲状腺激素结合蛋白、载脂蛋白AI染色,并进行纤维蛋白原A-α链DNA序列分析。结果:本例患者系青年女性,以蛋白尿和高血压起病,肾功能正常,伴肾脏病家族史。组织学改变显示淀粉样物质只沉积于肾小球,而小管间质及血管不受累。肾小球纤维蛋白原A-α链染色阳性,A蛋白、κ、λ轻链、甲状腺激素结合蛋白和载脂蛋白AI染色阴性。基因测序提示存在纤维蛋白原A-α链的基因突变。结论:遗传性纤维蛋白原A-α链淀粉样变性以蛋白尿和高血压起病,淀粉样变性只累及肾小球,小管间质及血管一般很少受累,纤维蛋白原染色是诊断该病的关键,而纤维蛋白原A-α链基因测序则有助于进一步明确诊断。

高亲和力IgE受体α链cDNA的克隆及序列测定

目的 :为获得编码高亲和力IgE受体(FcεR1)α链的cDNA序列。方法 :从正常人外周血中富集嗜碱性粒细胞 ,提总RNA进行RT PCR ,分子克隆 ,用自动测序及放射自显影测序。结果 :分离并鉴定了该cDNA重组子 ,在159密码子及185密码子分别发现了CAC→CGC与TAT→CAT置换。结论 :建立了一个编码FcεR1膜外区α链的cDNA重组子克隆 ,它不含引导肽序列 ,可能是一个来自中国人的该基因的变异体。

结直肠癌组织的COL1A1和COL1A2水平及临床意义

目的探讨结直肠癌组织的Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)和α2链(COL1A2)水平及临床意义。方法采用GEPIA分析来自TCGA数据库的367例结直肠癌(275例结肠癌+92例直肠癌)的COL1A1、COL1A2水平,实时定量PCR检测2016年1月至2018年12月手术切除的106例结直肠癌组织和93例癌旁组织的COL1A1、COL1A2水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估组织两者水平诊断结直肠癌的效能,分析组织两者水平与结直肠癌临床病理特征的关系,采用GEPIA分析两者水平与结直肠癌总生存期(OS)和无病生存期(DFS)的关系。结果GEPIA在线分析显示,275例结肠癌组织的COL1A1和COL1A2水平均高于对应41例正常组织,而92例直肠癌组织中仅COL1A1水平高于10例正常组织(P<0.05)。106例结直肠癌组织的COL1A1和COL1A2水平分别为4.013±1.705和3.535±1.354,高于93例癌旁组织的1.544±0.678和1.613±0.741(P<0.05),且COL1A1和COL1A2水平呈正相关(r=0.518,P<0.001)。ROC曲线显示组织COL1A1和COL1A2水平诊断结直肠癌的曲线下面积分别为0.894(95%CI:0.848~0.941)和0.882(95%CI:0.837~0.927)。两者水平均与淋巴结转移、肿瘤直径、TNM分期和T分期有关(P<0.05)。COL1A1水平仅与DFS有关,而COL1A2水平与OS和DFS均有关,其中高水平者的OS和DFS较差。结论COL1A1和COL1A2在结直肠癌中高表达,在该肿瘤的诊断、病情预测和预后评估上有一定价值,两者共同促进了结直肠癌的发生发展。

细胞色素B-245α链及胆固醇酯转运蛋白基因多态性与广泛型侵袭性牙周炎易感性的关系

目的:探讨细胞色素B-245α链(cytochrome B-245 alpha chain,CYBA)rs4673及胆固醇酯转运蛋白(cholesteryl ester transfer protein,CETP)rs12720922基因多态性与广泛型侵袭性牙周炎(generalized aggressive periodontitis,GAgP)易感性的关系,为筛选GAgP的高危人群提供遗传学依据。方法:采用病例对照研究方法,纳入GAgP患者372例和健康对照者133名。采用基于基质辅助的激光解吸电离飞行时间质谱技术进行CYBA rs4673及CETP rs12720922基因型测定,不同基因型与GAgP易感性的关系采用多重逻辑回归模型分析,对于两个基因多态性位点在GAgP易感性方面的交互作用采用似然比检验进行分析,交互作用模型采用相乘模型。结果:372例GAgP患者平均年龄(27.5±5.2)岁,包括男性152例,女性220例;133名健康对照者平均年龄(28.8±7.1)岁,包括男性53例,女性80例;两组人群年龄差异有统计学意义(P<0.05),性别构成比差异无统计学意义(P>0.05)。CYBA rs4673位点CT/TT基因型频率在GAgP组显著高于对照组[18.0%(66/366)vs.10.6%(14/132),P<0.05];调整年龄、性别后,与CC基因型个体相比,CT/TT基因型个体患GAgP风险明显增高(OR=1.86,95%CI:1.01~3.45,P<0.05)。CETP rs12720922位点基因型(GG、AA/AG)频率在GAgP组和对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。CYBA rs4673和CETP rs12720922在GAgP易感性方面存在显著交互作用,与CYBA rs4673CC基因型及CETP rs12720922 AA/AG基因型个体相比,当两个位点分别为CT/TT基因型及GG基因型时,个体的GAgP患病风险显著增加(OR=3.25,95%CI:1.36~7.75,P<0.01)。结论:CYBA rs4673 CT/TT基因型与GAgP易感性相关,且与CETP rs12720922 GG基因型在GAgP易感性方面存在显著交互作用。

广西地区泰国缺失型α-地中海贫血的调查研究

目的探讨广西地区泰国缺失型α-地中海贫血的检出率和血液学特点,减少或避免重型胎儿的出生。方法收集2011年12月至2012年11月静脉外周血,采用Gap-PCR方法进行泰国缺失型α-地中海贫血基因检测。结果发现55例泰国型缺失型α地贫,检出率为0.61%,40例为泰国型缺失杂合子,15例为泰国型HbH病(5例-THAI/α4.2,4例-THAI/α3.7,5例-THAI/αCSα,1例-THAI/αWSα)。结论广西地区泰国缺失型α-地中海贫血具有较高的携带率,应列为常规项目进行基因诊断和产前诊断。

猪T细胞受体α链基因的克隆、序列分析及其结构预测

旨在为研究猪T细胞受体分子结构与功能,并首次在国内克隆了猪T细胞受体α链基因。以GenBank上登载的猪T细胞受体（Tcell receptor,TCR）α链（AB087988）为参考序列,从甘肃合作猪外周血液淋巴细胞中用RT-PCR的方法克隆了TCR-α链基因（pTCR-α）。结果表明：克隆的TCR-α基因具有完整的ORF,全长819 bp,编码272个氨基酸,预测蛋白分子量为30 kDa,含18个强碱性氨基酸,23个强酸性氨基酸,87个疏水性氨基酸和103个极性氨基酸,含有一段20个氨基酸的信号肽序列;与GenBank上登载的TCR-α参考序列（AB087988）的同源性为94.6%,与其他具有完整ORF的猪TCR-α相比,同源性为54.4%-80.3%。推测可能是一新的TCR-α基因转录本。同时,应用生物信息学技术分析了其基因序列及编码蛋白的结构特征,这为猪T细胞受体分子结构与功能的研究奠定了基础。

抗人肿瘤坏死因子-α单链抗体基因在大肠杆菌中的融合表达

目的：将抗ｈＴＮＦ－α单链抗体基因克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ－１中，以期得到ＧＳＴ－ＳｃＦｖ融合表达蛋白。方法：将限制性内切酶酶切拼接法获得的Ｅ６ＳｃＦｖ基因克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ－１中，转化大肠杆菌ＤＨ５α，经异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导，１２％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测表达产物，光密度扫描和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ验证表达产物。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示，Ｅ６ＳｃＦｖ表达产物约为５２ｋｕ左右，与预期的结果相符；光密度扫描结果表明，ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白占菌体总蛋白的４０％；Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ证实，在相应分子量处，有ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白的显色印迹；进一步对表达产物的形式分析，ＧＳＴ－Ｅ６ＳｃＦｖ融合蛋白的表达产物为包涵体形式。

原肌球蛋白3与雄激素受体配体结合域之间的相互作用

目的为明确雄激素对动脉粥样硬化的影响及机制,在单核细胞内筛选与雄激素受体结合的蛋白。方法将雄激素受体配体结合域(AR-LBD)做为诱饵蛋白,利用酵母双杂交系统从男性单核细胞cDNA文库中筛选与AR-LBD相互作用的蛋白,进一步应用Pull-down、免疫荧光技术验证二者在体外的相互作用。结果从男性单核细胞cDNA文库中筛选出原肌球蛋白3(TPM3)与AR-LBD存在相互作用。在体外通过Pull-down实验证实了TPM3与AR-LBD的相互作用,进一步通过共聚焦显微镜检测免疫荧光确认TPM3与AR-LBD在293HEK细胞中重叠共表达。结论在男性外周血单核细胞内,TPM3与AR-LBD存在相互作用。

α-地中海贫血的产前基因诊断

目的 :应用 PCR技术 ,对 9例父母双方均为 γ珠旦白基因缺失杂合子的胎儿进行羊水产前基因诊断。方法 :聚合酶链反应 (PCR)技术。结果 :9例中 3例胎儿表现为基因正常序列 (aa/ aa) ,4例胎儿纯合子 (- - / - - ) ,2例胎儿为杂合子 (- - / aa)。B超检查疑有胎儿水肿的 3例胎儿 ,经基因诊断仅有 1例是纯合子 ,1例是杂合子和另 1例是正常。结论 :PCR在 α地中海贫血胎儿产前诊断决定胎儿是否存留的最可靠的方法 ,宣传教育和人群筛查十分必要 ,尽早发现杂合子夫妻 。

靶向COL1A1基因的shRNA对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨抑制Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)基因表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响。方法:用已构建的pSilencer2.1-U6-COL1A1重组质粒转染乳腺癌细胞MDA-MB-231,采用RT-PCR和Western blotting技术检测重组质粒对COL1A1基因表达的影响,MTT比色法测定细胞增殖的抑制情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化,Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化。结果:RT-PCR及Western blotting结果证实重组质粒在mRNA和蛋白水平分别显著抑制COL1A1基因表达;pshRNA-COL1A1转染组细胞的增殖速度明显减慢且呈时间依赖关系;与对照组相比,pshRNA-COL1A1组细胞明显阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),出现细胞质浓缩、核凝聚等凋亡形态学变化。结论:pshRNA-COL1A1能有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡,为以COL1A1为靶点的乳腺癌基因治疗提供实验依据。

聚α-烯烃合成油的催化剂研究进展

概述了不同类型催化剂在长链α-烯烃聚合反应中的应用,指出了各类催化剂的优缺点,对聚α-烯烃合成油催化剂未来的研究工作作了展望。

乙型肝炎病毒全S蛋白与纤维蛋白原α链的相互作用

目的:筛选人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎病毒(HBV)全S蛋白相互作用蛋白的基因,并反向验证HBV全S蛋白候选结合蛋白之间相互作用.方法:将全S基因定向克隆到酵母表达载体pDEST32,构建正向筛选的诱饵质粒并Westernblot法验证其在酵母中的表达.将诱饵质粒与人肝细胞cDNA文库质粒共同转化MaV203酵母细胞,在人肝细胞cDNA文库筛选候选结合蛋白,提取阳性菌落质粒测序,并分析其生物学性质.将筛选出的纤维蛋白原α链中下游序列及不同全S变异株基因,分别定向克隆到pDEST32及pDEST22载体中,利用Westernblot法验证表达.将诱饵质粒与猎物质粒共同转化MaV203酵母细胞,以反向酵母双杂交方法验证初筛结果的可靠性及正确性.结果:正向的酵母双杂交实验,经初筛和再转染实验纤维蛋白原α链可与HBV全S蛋白发生相互作用.再以纤维蛋白原α链为靶基因设计诱饵质粒,以四种变异的HBV全S蛋白为靶基因设计猎物质粒,反向酵母双杂交法证实维蛋白原α链中下游可与不同全S变异体(总差异率2%)发生相互作用,纤维蛋白原α链与全S蛋白的结合域可能为病毒蛋白的前268aa.结论:纤维蛋白原α链中下游可与HBV全S蛋白产生特异性结合,其结合域可能与病毒蛋白的前268aa产生相互作用.

牛Ⅰ型干扰素受体α链与其配体结合活性的鉴定

为研究牛Ⅰ型干扰素受体α链(IFNAR1)与其配体结合的生物学性质,本研究采用RT-PCR方法从感染水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)的犊牛原代肾细胞中扩增得到IFNAR1基因,然后构建了表达BoIFNAR1胞外区多肽(BoIFNAR1-EC)的原核表达载体pET30a-BoIFNAR1-EC,在RosettaTM(DE3)pLysS宿主菌中表达出重组蛋白rBoIFNAR1-EC,并以纯化后的rBoIFNAR1-EC作为免疫原制备兔抗牛IFNAR1的多克隆抗体,随后鉴定BoIFNAR1与其配体的结合活性。结果表明,试验成功克隆得到1 685bp的牛IFNAR1基因,编码560个氨基酸,由24个氨基酸组成的信号肽、414个氨基酸组成的胞外区、23个氨基酸组成的跨膜区及99个氨基酸组成的胞内区组成,与其他物种IFNAR1氨基酸序列同源性为63%~91%,在进化上具有高度保守性,其与羊的亲缘关系最近。随后构建了含牛IFNAR1胞外区基因的重组表达载体,并诱导表达了重组牛IFNAR1胞外区蛋白rBoIFNAR1-EC,其在大肠杆菌中几乎全部为可溶性表达,经纯化透析后作为免疫原制备了兔抗牛IFNAR1的特异性抗体,抗体效价高达1∶204 800。配体结合试验表明,牛IFNAR1重组蛋白可与牛IFN-αA和IFN-ε结合,其多克隆抗体可阻断牛IFN-αA和IFN-ε与细胞表面的IFNAR1特异性结合,进而阻断牛IFN-αA和IFN-ε的抗病毒信号传导。