烟草赤星病菌拮抗链霉菌的多重筛选及发酵液理化性质

以烟草赤星病菌为靶标菌,利用活体对峙拮抗、发酵液抑菌活性和离体叶片防效测定相结合的方法,从土壤中分离得到的371株放线菌中,筛选到2株抑菌效果明显、抗菌谱广、效果稳定的拮抗放线菌菌株。拮抗菌发酵液的理化性质测定表明:两菌株发酵液对温度、紫外线、自然光、酸碱的稳定性及耐贮性和菌株遗传特性虽有一定差异,但均较为稳定,其中,菌株182-2显示出了良好的抑菌防病效果和优良的稳定性,有开发应用价值。

花椒枯穂病生防菌的筛选及鉴定

筛选获得对花椒枯穗病菌有效的生防菌。采用抑菌圈法和对峙培养法筛选生防菌,通过形态学、生理生化和16S rDNA分子鉴定确定生防菌分类地位。从供试的305株测试菌株中筛选到4株对花椒枯穂病菌具有拮抗效果的生防菌,其中1株拮抗效果最好,代号为Z-X-225,抑菌带为8 mm。筛选获得的这株生防菌对苹果斑点落叶病菌、小麦赤霉病菌、番茄灰霉病菌和棉花枯萎病菌均具有显著的抑制效果。通过生物测定和分子生物学分类鉴定,确定这个生防菌株为多粘类芽孢杆菌。

杀菌剂对细交链孢菌的室内抑菌效果

为了筛选对细交链孢菌生长具有较好抑制作用的杀菌剂,分别使用抑菌圈法和生长速率法测定了18种杀菌剂对该菌3个不同菌株室内生长的抑制效果。试验结果表明,咪鲜胺、唑菌腈、丙环唑、戊唑醇、烯唑醇对该菌的抑制效果较好。根据试验结果,分析和讨论了抑菌圈法和生长速率法对该菌生长抑制效果的异同及其原因。

链格孢ATMT转化体系的构建及弱毒突变株验证

本文利用来自质粒pUCATPH的构巢曲霉色氨酸合成基因trpC的启动子(PtrpC)、终止子(TtrpC)和潮霉素磷酸转移酶抗性基因(hph)以及植物表达载体pROKⅡ成功构建了适用于丝状真菌的根癌农杆菌介导转化的双元载体pROKIIHPH,并转化根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens LBA4404,建立了根癌农杆菌LBA4404介导的链格孢Alternaria alternata分生孢子转化体系;再从乙酰丁香酮(AS)浓度、不同的共培养时间、受体菌分生孢子浓度和农杆菌菌液浓度对A. alternata转化效率的影响对体系进行优化。结果确定了根癌农杆菌菌液体积为200mL(OD600=0.15),A. alternata分生孢子浓度为106个/mL,在A. tumefaciens的预培养时期以及与A. alternata共培养时期分别加入200μmo1/LAS,共培养时间48h,转化率达120～200个/105分生孢子。在所筛选的约800个转化子中获得了1株毒性明显低于野生菌sd1的弱毒突变株t108,通过PCR验证推测其毒力降低可能由于T-DNA插入阻断了基因的表达。该实验结果为与突变相关基因的研究以及弱毒株t108的进一步研究和利用提供了实验材料,也为深入研究链格孢sd1菌株的基因功能奠定了基础。

梨黑斑病菌对苯醚甲环唑的敏感性分析

采用菌丝生长速率法测定了苯醚甲环唑对分离自金水梨园的43个梨黑斑病菌[Alternaria alternata（Fries）Keissler]菌株的EC_（50）。结果表明,苯醚甲环唑对梨黑斑病菌菌株的EC_（50）分布在0.071 9~1.488 6μg/m L范围内,平均值为0.507 2±0.333 3μg/m L。W检验梨黑斑病菌对苯醚甲环唑敏感性的频次分布呈正偏态分布。菌株主体表现为敏感,但存在敏感性降低的菌株。

烟草赤星病拮抗菌的筛选

采用对峙培养法从湖南浏阳地区烟田采摘的健康烟叶中筛选分离出86株菌株,其中B17菌株对烟草赤星病菌拮抗作用最强,抑制率为72.1%。通过生理生化实验和形态观察,初步鉴定B17菌株为短芽孢杆菌。在B17菌株发酵液的离体防效和温室栽培防效试验中,发酵液可以明显的减轻病害的发生,盆栽试验中,其防效为71.2%。

分档统计法在烟草赤星病流行趋势预测上的应用

以宁远县连续9年的资料为基础,利用符号法从31个自变量中选取出烟草移栽后第2个月雨量(mm)、同期平均气温(℃)及移栽后1个月内雨日数作为烟草赤星病流行趋势的3个预报因子。以分档统计法进行预报,结果表明:9年回检值与实际值均完全符合;用于异地15年次预测(实际上为回测),准确率达80%。本法可在此病流行前提前约1个月做出预报。

烤烟赤星病发生与气象因子的关系及预测模式建立

烟叶赤星病是赣中烟叶栽培区的主要病害之一,一般在烟叶成熟期即6月上旬始发,随着降雨的增加病情逐渐加重。根据田间病情系统调查与当地气象因子相关分析,建立预测式:■=12.4145+0.9441x,(y为病情指数,x为温雨系数),r=0.9728,方差分析相关显著,卡方检验符合率高。

烟草主要病害拮抗菌的筛选鉴定及除草活性分析

为筛选出对烟草常见病害及烟田杂草具有良好防效的海洋来源生防菌,对海洋红树林来源木霉进行分离纯化,并采用形态学结合分子生物学方法进行种属鉴定,同时还进行抑菌和除草活性测定。结果表明,分离纯化的25株海洋木霉中有棘孢木霉(Trichoderma asperellum)17株,哈茨木霉(T.harzianum)3株,钩状木霉(T.hamatum)2株,里氏木霉(T.reesei)2株,拟康宁木霉(T.koningiopsis)1株。1株里氏木霉HT6,1株钩状木霉HT8,1株拟康宁木霉HT11和10株棘孢木霉HG2、HG9、HG11、HG14、HG16、9HG、HJ3、5HJ、HJ7和HT2对黑胫病菌有明显的抑制效果,抑制率达到60%以上。4株棘孢木霉HG9、HG11、HG16、HT3和1株拟康宁木霉HT11对烟草赤星病菌的抑制率达到40%以上。2株里氏木霉HT6和HT7对青枯菌有抑菌活性,1株钩状木霉HT10对反枝苋有较好的除草活性。