继代培养对链格孢菌生长及产毒的影响

目的探究连续继代培养对链格孢菌(Alternaria alternata)菌株的生长以及产毒的影响。方法将10株链格孢菌在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(potato dextrose agar,PDA)上连续继代培养,分析菌株的生长、产孢情况;利用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测并分析主要链格孢霉毒素[包括交链孢酚(alternariol,AOH)、交链孢酚单甲醚(alternariol monomethyl ether,AME)、交链孢烯(altenuene,ALT)、细交链格孢菌酮酸(tenuazonic acid,TeA)]的含量变化。结果在PDA培养基中,连续继代培养链格孢菌极易出现角变、菌丝变白、菌丝生长速率加快等菌株退化现象。随着继代培养次数的增加,菌株生长速度加快,菌落直径变大,角变率增大;10株链格孢菌中有7株(MY-4、MY-12、MY-15、MY-73、MY-80、MY-103、MY-117)产孢量随着继代次数的增加先增加后降低,3株(MY-65、MY-67和MY-108)产孢量随着继代次数的增加显著降低;10株链格孢菌中有4株可以产生TeA毒素,且Te A毒素的含量随着继代次数的增加先上升后下降,第五代菌株(F5)产毒能力最强。继代培养对ALT毒素含量影响较大,除MY-103以外,随着继代次数的增加,ALT毒素的含量显著降低(达91.13%~99.85%)。AOH和AME毒素含量随着继代次数的增加呈下降或者呈先上升后下降的趋势。结论连续继代培养5代对链格孢菌的生长、产孢、产毒等均会产生较大影响。在菌株的实际应用过程中,应该避免菌株过多次的继代培养,尽量使用5代以内的链格孢菌。

不同抗性柑橘对野生型和柑橘链格孢毒素合成受阻褐斑病菌侵染的转录响应差异

为探讨不同抗性柑橘在与褐斑病菌互作过程中对柑橘链格孢毒素的响应差异,以抗病品种克里曼丁(Citrus clementina Hort.ex Tan.cv.Clementine)和感病品种丹西红橘(Citrus reticulata Blanco cv.Dancy)为材料,分别接种野生型产毒菌株Z7和毒素合成基因ACTT6双敲除突变体菌株ΔΔACTT6,并利用转录组测序技术对接种24 h和48 h后的叶片进行基因表达分析。比较2种柑橘对产毒和不产毒菌株侵染后的转录差异发现,2个品种的先天免疫通路(病原物相关分子模式触发的免疫反应和效应子触发的免疫反应)、病程相关蛋白、WRKY转录因子、次生代谢途径等基因均受产毒菌株诱导表达。在接种后期(48 h),产毒菌株主要激活感病品种的脂质和蛋白质等大分子降解过程,说明其细胞完整性因毒素产生而遭到破坏;而抗病柑橘则主要富集解毒和茉莉酸代谢等生物过程,其中特异激活的多药及毒素化合物外排蛋白(multidrug and toxic compound extrusion protein,MATE)基因与其抵御褐斑病菌毒素的能力有关。本研究初步明确了柑橘对褐斑病菌毒素响应的分子调控机制和关键功能基因,可为柑橘抗褐斑病菌分子育种提供理论依据。

链格孢菌毒素的分离及活性测定

对链格孢菌(Alternaria alternata(Fr.)Keissler)产生的对紫茎泽兰(Eupatorium adenophorum Spreng.)有致病作用的毒素进行了分离纯化,并用生物法测定了该毒素的致病活性.

链格孢菌毒素对紫茎泽兰的致病机理

以叶圆片法分析链格孢菌〔Alternariaalternata (Fr.)Keissler〕毒素对紫茎泽兰 (EupatoriumadenophorumSpreng .)叶组织细胞膜透性、过氧化物酶 (POD)、抗坏血酸过氧化物酶 (APX)和过氧化氢酶 (CAT)活性以及丙二醛 (MDA)含量的影响 ,结果表明 ,链格孢菌毒素使紫茎泽兰叶组织细胞膜透性上升 ,Na+和K+渗漏量增加 ,膜脂过氧化加强 ,MDA含量上升 ;链格孢菌毒素处理的紫茎泽兰叶片中POD、APX和CAT的活性均较对照降低。

用大孔吸附树脂分离链格孢菌毒素

研究了大孔吸附树脂DA201，D101，HZ-803，1300及活性炭对链格孢菌Alternaria alternata毒素的吸附性能。结果表明，DA201对链格孢菌毒素吸附解吸效果最佳，吸附率最高，为72．88％，吸附后滤出液毒性最弱，解吸滤液毒性最强，适合用于链格孢菌毒素的分离纯化富集。并以DA201为吸附材料，对无菌滤液的上样量、pH值和洗脱液乙醇的体积分数等条件进行了优化，得到DA201对毒素吸附和解吸附的最优条件是：无菌滤液的上样量体积为树脂体积的60～70倍，pH4．12～4．62，洗脱液为体积分数为90％的乙醇。

链格孢菌寄主选择性毒素的研究现状

就链格孢属 (Alternaria)真菌中产生的 9种寄主选择性植物毒性、作用机理及应用研究等方面进行综述和评论 .指出寄主选择性毒素作为致病因子 ,在致病过程中起着十分重要的作用 ;利用寄主选择性致病毒素在防病治病、抗病育种及杂草防治中有广泛的应用前景 .

链格孢菌毒素对紫茎泽兰叶组织超微结构的影响

用导致世界恶性杂草紫茎泽兰自然致病的链格孢菌(Alternariaalternata(Fr.)Keissler)强致病菌株所产生的毒素处理紫茎泽兰顶端第2对真叶,研究该毒素对紫茎泽兰叶肉细胞超微结构的影响。结果表明毒素处理4h后,细胞出现质壁分离,叶绿体变形;24h后叶肉细胞的细胞壁变形甚至断裂,质膜断裂;叶绿体变形严重,类囊体片层解体,叶绿体膜膨胀、断裂。叶肉细胞的叶绿体受损伤程度大,暗示了毒素的作用方式很可能是抑制光合作用。

链格孢菌产毒菌株及产毒培养基的筛选

对紫茎泽兰 (EupatoriunadenophorumSpreng .)的自然致病菌 -链格孢菌 (Alternariaalternata (Fr.)Keissler)的 6个菌株 5 0 1、 40 2、 5 0 3、LS、YN、AW的产毒能力进行了比较研究 ,选出 5 0 1菌株产毒能力最强 ;同时对 5 0 1菌株的产毒培养条件进行了研究 .结果表明 :小麦培养基 (水的质量分数 40 %)和PSK培养基分别可以作为产毒的固体和液体培养基 .

飞机草链格孢毒素的培养条件、分离及活性测定

【目的】对链格孢菌株LGB100401的产毒培养条件及毒素的除草活性进行评估,为飞机草的生物防治提供理论依据。【方法】以从海南田间染病的飞机草上分离到的链格孢菌LGB100401菌株为材料,采用以生物测定为导向的乙酸乙酯萃取和硅胶柱层析等方法对LGB100401菌株所产毒素进行分离纯化及产毒条件研究,并采用离体叶片针刺接种法测定38种植物对LGB100401菌株所产毒素的敏感性。【结果】LGB100401菌株可产生毒素并导致飞机草叶片枯死,最适产毒条件为25℃、p H 4~6、光暗交替培养15 d。LGB100401菌株分泌的毒素对供试38植物具有选择毒性,其中,供试杂草对链格孢粗毒素不敏感(NS)的有17种、稍敏感(LS)4种、敏感(MS)7种、极敏感(SS)4种,表现为极敏感的杂草为飞机草、马唐、羽芒菊和赛葵;供试的6种作物中只有水稻表现为敏感(MS),其他5种作物不敏感或表现轻微症状。【结论】飞机草链格孢毒素对飞机草具有较高的抑制活性,具有较高的生防潜力。

链格孢菌毒素对紫茎泽兰致病性及生物测定方法的研究

以紫茎泽兰(EupatoriunadenophorumSpreng.)为生物测定材料,对链格孢菌毒素的生物测定方法进行了比较研究,筛选出离体叶片针刺法可作为该毒素的生物测定方法,为进一步研究该毒素提供了可靠的生物检测手段。

链格孢菌粗毒素的提取方法和稳定性的研究

以石油醚、乙酸乙酯、氯仿三种极性不同的溶剂对 5 0 1菌株的菌丝和培养液进行萃取 ,获取粗毒素 ,结果表明 ,5 0 1菌株产生的毒素是分泌培养液中的 ,是胞外毒素 ,且乙酸乙酯的萃取效果最好 ,回收率可达 92 .7% ,萃取溶剂的pH值对萃取结果没有影响 .通过分析贮存时间、温度、pH对粗毒素稳定性的影响 ,表明贮存时间、温度、pH对毒素稳定性影响很小 ,有一定的开发价值 .

河南省食管癌高低发区粮食中互隔交链孢霉毒素的化学检测

互隔交错孢霉毒素从随机采集于食管癌高低发区粮食样品中被提取后,用化学方法纯化,再经薄层层析(TLC)检测。结果显示:高低发区粮食中毒素的阳性率有显著差异,提示高发区互隔交链孢霉毒素在粮食中的广泛存在与食管癌的发生有密切关系。

钠盐与AT毒素对烟苗根生长的影响

为确定不同钠盐对烟草赤星病菌AT毒素毒性的影响，作者采用摩擦接种处理、浇根处理、种子根处理3种生物测定方法，确定了以烟草种子根处理法作为烟草赤星病菌的毒性测定方法。用10种化合物分别以5种不同浓度与AT毒素混合接种烟苗，分别以单独接种毒素稀释液与无菌水作对照。根长测定数据经DPS软件统计分析，结果表明单独施用AT毒素明显抑制烟苗根的生长，差异极显著；氢氧化钠、硝酸钠、苯甲酸钠、酒石酸钠均不能改变毒素对根长的影响，碳酸钠（200mg／mL）、酒石酸钾钠（200mg／mL）、四硼酸钠（0．02-0．2mg／mL）、氟化钠（0．2～2mg／mL）、柠檬酸钠（0．2mg／mL-200mg／mL）、钼酸钠（0．02-2mg／mL）对烟草赤星病菌毒素有明显钝化作用，以钼酸钠0．02mg／mL浓度处理效果最好，其次为柠檬酸钠0．2mg／mL处理；钼酸钠20-200mg／mL处理可增加AT毒素的毒性，浓度越大效果越显著。

林县互隔交链孢霉素x_4结构鉴定

从林县粮食中分离的优势菌株互隔交链孢霉培养物中提取出七种代谢物,对其中成份之一x_4,经质谱、红外光谱、核磁共振光谱测定,同时与标准品及人工合成品作比较,证明x_4成份是交链孢酚(Alternariol AOH)。

链格孢菌毒素胁迫下的棘孢木霉转录组构建及生防基因差异表达

为了探究链格孢菌(Alternaria alternata)毒素胁迫条件下木霉的功能调控网路,在毒素胁迫的不同时间取样测序,建立了毒素胁迫下棘孢木霉(Trichoderma asperellum)CGMCC11653的转录组。结果表明:各样品的Reads与参考基因组的比对效率为95.63%~97.50%,所选参考基因组组装能够满足信息分析的需求。毒素胁迫后,木霉中有3866个变化的差异表达基因;GO分类发现6、12、48 h的转录本在生物学过程、分子功能和细胞组分3个类别中分别富集了292、551、3023个基因。对在不同时间点下木霉调控的防卫基因分析发现,毒素胁迫12 h前各类抗病基因变化并不明显,但胁迫48 h后木霉调控了大部分抗病相关基因做出反应,包括ABC转运蛋白ABC1(3.44倍)、热激蛋白基因Hsp1(2.41倍)、葡聚糖基因Glucan16(2.91倍)等,表明木霉可以通过相关抗性基因病原真菌毒素胁迫进行精准调控。

链格孢菌产细交链孢菌酮酸条件的优化研究

鉴于链格孢霉毒素细交链孢菌酮酸(TeA)对防治月季长管蚜有明显效果,为了进一步开发利用TeA,对1株链格孢菌(编号5390)产TeA的条件进行研究,通过单因素试验的方法,研究了不同培养基、不同培养温度、不同培养时间及不同光照条件对TeA含量的影响,在此基础上用响应面对链格孢菌产毒条件进行优化。结果表明产TeA的最佳条件为:理查培养基,黑暗培养,温度30℃,培养时间29 d。在此条件下进行试验验证,TeA含量为14.99μg/g,与模型预测接近。对链格孢属真菌产TeA的培养条件进行筛选,探索真菌培养方式获得链格孢菌毒素TeA的方法,将有利于TeA的进一步开发利用。

肉桂醛对链格孢菌生长及非寄主选择性毒素合成的影响

目的初步探究肉桂醛对葡萄采后链栺孢菌菌丝体生长及非寄主选择性毒素合成的影响。方法采用扫描电镜(scanning electron microscopy, SEM)观察肉桂醛处理后链栺孢菌菌丝体的形态结构;测定处理后菌丝体脂质和麦角固醇含量,胞外电导率、OD_(260)值和菌丝体荧光强度;高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)测定处理后链栺孢酚(alternariol, AOH)、交链栺孢酚单甲醚(alternariol monomethyl ether,AME)含量的变化。结果扫描电镜结果显示肉桂醛处理后链栺孢菌菌丝体形态结构明显被破坏;脂质和麦角固醇含量显著下降;胞外电导率和OD_(260)值以及菌丝体荧光强度显著增加;AOH、AME的含量显著下降。结论肉桂醛通过破坏细胞膜通透性和完整性来抑制链栺孢菌菌丝体生长,同时体内主要非寄主选择性毒素合成受到抑制。

棘孢木霉Myb27转录因子基因特性分析、原核表达及产物纯化

以棘孢木霉CGMCC11653菌株菌丝体总RNA反转录的cDNA为模板,克隆全长717 bp转录因子Myb27基因编码序列,其编码238氨基酸组成的多肽。用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域并进行亚细胞定位、氨基酸多序列比对和进化关系分析,结果表明:其相对分子质量为27000,属于Myb-like DNAbinding结构域的蛋白,亚细胞定位在细胞核中。链格孢菌毒素诱导条件下Myb27的表达有显著变化,可能参与棘孢木霉抗链格孢菌毒素胁迫应答反应的正向调控。构建原核表达载体pMAL-Emyb27,转化大肠杆菌ER2523获得转化子ER2523-Emyb27,其成功诱导的最适条件为0.1 mmol/L IPTG 37℃连续诱导培养3 h;用PBS+10 mmol/L麦芽糖洗脱层析柱可得到与MBP标签融合的单一可溶性69500重组rMyb27蛋白。可见Myb27转录因子调控抗病基因的表达所结合的顺式作用元件提供体外重组蛋白,为调控棘孢木霉抗杨树叶枯病链格孢菌毒素胁迫的机理提供理论依据。