一株红树林真菌Alternaria sp.R6固相培养代谢产物研究

研究红树林真菌Alternaria sp.R6固相培养代谢产物,用硅胶和Sephadex LH-20柱层析手段从甲醇提取物分离单体,波谱技术鉴定结构,二倍稀释法测试抗菌活性。分离到(4R,5R)-4,5-二羟基-3-甲氧基-5-甲基-环己-2-烯-1-酮(1),(4R,5S,6R)-4,5,6-三羟基-3-甲氧基-5-甲基-环己-2-烯-1-酮(2),xylariacyclone B(3),(4S,5S,6S)-5,6-环氧-4-羟基-3-甲氧基-5-甲基-环己-2-烯-1-酮(4),LL-C10037α(5),1-羟基-8-(羟甲基)-6-甲氧基-3-甲基-9H-呫吨-9-酮(6),6-甲基-1-甲氧羰基-8-羟基呫吨-9-酮(7),6-羧基-1-甲氧羰基-2,8-二羟基呫吨-9-酮(8),麦角甾醇和过氧化麦角甾醇共10个化合物。化合物1,2,3,4,5,6和8为首次从Alternaria属分离到。化合物6和8对小麦赤霉、香蕉炭疽,化合物2对香蕉炭疽显示良好抗菌活性。

内生真菌Alternaria tenuissima PC-005抗耐药菌活性成分研究

目的研究内生真菌Alternaria tenuissima PC-005次生代谢产物抗耐药菌的活性成分。方法采用硅胶色谱、羟丙基葡聚糖凝胶柱色谱、高效液相色谱等分离纯化手段对内生真菌PC-005次生代谢物进行分离纯化,利用MS、1H-NMR、13C-NMR等现代波谱分析技术对分离得到的单体化合物进行结构鉴定;采用96孔板法测试单体化合物对临床耐药菌的抗菌活性。结果从内生真菌PC-005次生代谢物的活性组分中分离得到7个化合物,分别为5-甲氧基格链孢酚(1)、格链孢酚(2)、对羟基苯乙酮(3)、β-谷甾醇3-O-β-D-葡萄糖苷-6'-O-棕榈酸酯(4)、β-腺苷(5)、细格菌素(6)和十八碳二烯酸(7)。化合物1、6和7对多重耐药肺炎克雷伯杆菌、普通变形杆菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、奇异变形杆菌、屎肠球菌和鲍曼不动杆菌有抑制作用,最低抑菌浓度为62.5~500μg·m L-1。结论化合物3~7均为从内生菌Alternaria tenuissima代谢物中首次分离。化合物1、6和7为内生真菌Alternaria tenuissima PC-005抗耐药菌的活性成分。

怀山药内生真菌Alternaria sp.L12的次生代谢产物研究

目的研究怀山药内生真菌Alternaria sp.L12的次生代谢产物。方法利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和半制备HPLC等色谱技术分离纯化Alternaria sp.L12的大米发酵产物,运用波谱分析技术鉴定化合物结构。结果从Alternaria sp.L12的大米发酵物的乙酸乙酯萃取部位中分离得到8个化合物,分别鉴定为tricycloalternarene 1b(1)、alternariol-9-O-monomethyl ether(2)、过氧麦角甾醇(3)、alternariol(4)、对羟基苯乙酸(5)、邻羟基苯乙酸(6)、苯乙酸(7)和对羟基苯乙醇(8)。结论以上8个化合物均系首次从怀山药内生链格孢属真菌的发酵物中分离得到。

霍山石斛内生真菌Alternaria eichhorniae次生代谢产物研究

目的:研究霍山石斛内生真菌Alternaria eichhorniae的次生代谢产物。方法:利用硅胶柱层析、Sephadex LH-20、反相制备高效液相色谱等多种色谱法分离化合物,根据波谱方法对化合物进行结构鉴定。结果:从霍山石斛内生真菌Alternaria eichhorniae中分离得到12个化合物,分别鉴定为:tricycloalternarenes 6b(1)、tricycloalternarenes 2a(2)、tricycloalternarenes 1b(3)、tricycloalternarenes 1a(4)、tricycloalternarenes H(5)、stemphyperylenol(6)、altertoxinsⅠ(7)、alterperylenol(8)、(2R,3S)-1-(4-hydroxyphenyl)butane-2,3-diol(9)、3-羟基-4-(4-羟基苯基)-2-丁酮(10)、melithasterol B(11)、(22E,24R)-3β,5α,9α-trihydroxyergosta-7,22-dien-6-one(12)。结论:所有化合物均首次从霍山石斛内生真菌Alternaria eichhorniae中分离得到。

苗药小花清风藤叶内生真菌Alternaria enuissima的鉴定

目的:活化已分离保存的苗药小花清风藤叶内生真菌L-43,对其进行形态学及分子鉴定。方法:对内生真菌L-43活化后,观察其在PDA固体培养基上的菌落形态,采用显微鉴定法观察内生真菌L-43的孢子及菌丝形态,参照《中国真菌志》对其形态进行描述;结合PCR及NCBI数据库对比分析方法构建系统进化树,最终确定内生真菌L-43的种属。结果:菌种L-43与链格孢属Alternaria tenuissima聚为一类,相似度为100%,表明L-43为链格孢属Alternaria tenuissima。结论:苗药小花清风藤叶中存在链格孢属种类的内生真菌,为后续研究提供宝贵微生物资源。

4株产抗肿瘤活性物质喜树内生真菌的鉴定及其主要代谢产物HPLC初步比较

采用MTT法测定了4株喜树内生真菌发酵产物的体外抗肿瘤活性,4菌株发酵产物分别对HL-60、HeLa和HepG2肿瘤细胞株增殖有一定抑制作用。通过PDA培养基上菌落、菌丝和孢子形态观察以及ITS区(包括5.8S r DNA)核酸序列分析,4株喜树内生真菌被鉴定为链格孢属(Alternaria spp.)真菌。HPLC分析显示4菌株主要代谢产物存在差异,说明植物内生真菌遗传代谢的多样性。内生真菌代谢产物是天然产物的丰富来源。

微生物菌剂W55修复多菌灵污染土壤研究

【目的】评估多菌灵降解菌致密链格孢WJD-55在棚室土壤中的应用效果及其安全性。【方法】在设施棚室土壤中添加多菌灵并施用由降解菌WJD-55制备的菌剂W55,栽种番茄作为观测作物,进行为期50 d的土壤修复试验,同时监测土壤中残留多菌灵、菌剂微生物WJD-55定殖及土壤真菌群落的变化,以及土壤理化性质变化,观测作物生长等指标,从而评估菌剂W55在棚室土壤施用效果及其安全性。【结果】初始土壤中多菌灵质量浓度约42 mg/kg,菌剂使用量0.1%,药后第10天,土壤中多菌灵质量浓度为9.27 mg/kg、下降78%,而对照土壤中多菌灵质量浓度为30.2 mg/kg、下降29%,差异极显著(T-test,P=0.001);土壤微生物高通量测序结果显示,降解菌WJD-55可在污染土壤中定殖,弥补多菌灵对土壤微生物多样性产生的负面影响;土壤理化指标显示,菌剂的加入未对土壤物理化学性质带来显著影响;观测作物番茄生长未受到菌剂的影响,降解菌WJD-55未对番茄叶片等造成病害。【结论】多菌灵降解菌致密链格孢WJD-55可在土壤中稳定定殖并有效发挥降解多菌灵的作用,迅速降低土壤残留多菌灵含量,可改善污染土壤真菌微生物多样性,对土壤理化性质及番茄作物生长无不良影响。

交链孢酚单甲醚对人胎儿食管和胃上皮脂质过氧化的影响

本文报道食道癌高发区粮食中分离的互隔交链孢霉的代谢物交链孢酚单甲醚(AME)在体外攻击人胎儿食管及胃上皮后对相应组织脂质过氧化的影响。采用硫代巴比妥酸试验测定丙二醛含量反映脂质过氧化程度。AME可使胎儿食管及胃丙二醛含量明显升高(P<0.01),其程度与AME剂量相关,说明AME可引发这两器官上皮组织的脂质过氧化。随作用时间的延长,脂质过氧化程度愈来愈高,至4小时达高峰。食管对AME的反应较胃更强烈,提示AME有一定的器官选择性。根据本研究结果。推测AME可能是林县地区人食管癌的病因之一。

郑州地区3种冷季型草坪草根部入侵真菌鉴定

研究不同草坪草根部入侵真菌的种类对草坪病害鉴定与防治具有重要意义。本试验以河南省郑州市内8个公共草坪上的3种冷季型草坪草高羊茅(Festuca arundinacea),草地早熟禾(Poa pratensis)和多年生黑麦草(Lolium perenne)为研究材料,于2013年春季,在8个混播草坪上采用"Z"字形法随机进行根部取样,每种草在各采样地内分别取12株根样,并在实验室内分离鉴定其根部入侵真菌种类。结果表明:从288株根样中共分离到13种真菌,其中6种真菌为3种草根部共同的入侵真菌,包括:细交链孢(Alternaria alternata)、尖孢镰孢(Fusarium oxysporum)、柱孢(Cylindrocarpon destructuns)、枝孢(Cladosporium herbarum)、多隔镰孢(F.decemcellulare)、德氏霉(Drechslera sp.)。郑州地区冷季型草坪草根部入侵的主要病原真菌是细交链孢、尖孢镰孢和枝孢,不同地点和草种根部主要的入侵真菌种类有明显的不同,根部带菌率最高的是多年生黑麦草。

向日葵种传真菌的初步检测

采用洗涤离心法和PDA培养基法对来自我国内蒙古自治区、黑龙江省、吉林省的12个向日葵主栽品种进行了种传真菌检测。结果表明,种子表面携带的优势菌群主要为链格孢属(Alternariaspp.)、镰刀菌属(Fusariumspp.)、青霉属(Pen icilliumspp.)、曲霉属(Aspergillusspp.)、根霉属(Rhizopusspp.)。种子内部寄藏真菌主要为链格孢属、镰刀菌属、青霉属和曲霉属,其中向日葵种子内部寄藏镰刀菌为国内首次报道。不同品种之间种子表面携带真菌种类差异较大,种子内部寄藏真菌种类差异不明显;果皮带菌率一般高于种胚带菌率。

申克孢子丝菌和暗色真菌的分离

目的 :研究申克孢子丝菌和暗色真菌的分布情况及其生态学。方法 :从吉林地区自然环境中采集腐木、土壤、陈玉米秸、陈麦秸等标本 70份 ,用含放线菌酮的改良沙氏培养基分离菌株 ,沙氏培养基传代培养 ,通过观察菌落的外观形态、显微镜下菌丝和孢子的生长形态等方法 ,鉴定申克孢子丝菌和暗色真菌。结果 :70份标本中鉴定出申克孢子丝菌和暗色真菌共 37株 ,分离阳性率为 5 2 .86 % ,其中申克孢子丝菌 6株 (8.5 7% ) ,外瓶霉属 1 4株 (2 0 % ) ,链格孢 3株 (4 .2 9% ) ,着色真菌 5株 (7.1 4 % ) ,疣状瓶霉 4株 (5 .71 % ) ,待定 5株 (7.1 4 % )。同时还分离出镰刀菌、念珠菌、曲霉、青霉菌等条件致病菌。结论 :研究申克孢子丝菌和暗色真菌、孢子丝菌病。

西瓜砧木种传真菌的初步检测

采用洗涤离心法和PDA培养基法对14个西瓜砧木主栽品种进行了种传真菌检测。结果表明,种子表面携带的优势菌群主要为镰刀菌(Fusarium spp.)、青霉属(Penicillium spp.)、曲霉属(Aspergillus spp.)、根霉属(Rhizopus spp.)、链格孢属(Alternaria spp.)真菌。种子内部寄藏的真菌主要为镰刀菌、青霉属和曲霉属真菌,其中西瓜砧木种子内部寄藏镰刀菌为国内首次报道。不同品种的种子表面携带真菌种类差异较大,种子内部寄藏真菌种类差异不明显,种壳带菌率一般高于种胚带菌率。

紫杉醇产生菌HU1353分类地位的探讨

研究了从东北红豆杉(Taxus cuspidarta)树皮中分离到的一株内生真菌HU1353,经微生物发酵法证明可产生紫杉醇后,进一步对其群体形态和个体形态进行了观察,并探讨其分类地位为链格孢属(Alternaria)一新种。模式菌株保存于黑龙江大学微生物重点实验室。

桔梗内生真菌的分离鉴定及其生物学特性研究

为了解药用植物桔梗(Platycodon grandiflorum)内生真菌的组成情况,利用组织分离法,从桔梗的根部分离得到菌落形态一致的链格孢菌,根据其形态特征及生物学特性,鉴定为桔梗链格孢(Alternaria platycodonis T.Y.Zhang)。

半夏内生真菌的初步研究

从健康无病害的半夏(Pinellia ternate)根、茎、叶和花组织中分离获得内生真菌共计61株,对其进行形态学鉴定后,针对不产孢的菌株,测定了ITSrDNA序列以进行分子鉴定。分离到的内生真菌分别来自11个属,以半知菌为主要群落,其中Hyphomycetes,Zygomycetes和Coelomycetes的比例分别为62.2%,18.1%和8.2%;镰刀菌属(Fusarium spp.)是半夏植物中分离率最高(6%)的属,其余主要优势属为Alternaria,Mucor,Epicoccum,Mortierella和Plectosphaerella。研究表明:从半夏球茎组织中分离到的内生真菌数量多于其他组织。

砂地柏内生真菌SC13菌株的分离鉴定及代谢产物初步研究

为了寻找可产生鬼臼毒素类化合物的内生真菌,从砂地柏(Sabina vulgarisAnt.)不同组织中分离到126株内生真菌。以鬼臼毒素,脱氧鬼臼毒素和苦鬼臼毒素为标准品,采用HPLC法筛选得到一株可代谢产生重要药用和杀虫活性物质鬼臼毒素类似物的内生真菌SC13。对菌株SC13进行ITS-5.8S rDNA区域扩增,测序及遗传进化关系分析,初步推测该菌株属于链格孢属(Alternariasp.)真菌。采用小叶碟添加法测定该菌株发酵液萃取物对三龄初期粘虫的拒食活性,其48h拒食中浓为7.259 mg.mL-1,采用浸毒叶片法测定了三龄初期小菜蛾的毒杀活性,其48h致死中浓为6.136 mg.mL-1。

沙打旺种带真菌——环境、致病力及防治

对来自江苏、内蒙古、河南和河北等四省（区）的沙打旺（ＡｓｔｒａｇａｌｕｓａｄｓｕｒｇｅｎｓＰａｌ．）种子进行了健康检验；测定了细交链孢〔Ａｌｔｅｒｎａｒｉａａｌｔｅｒｎａｔａ（Ｆｒ．）Ｋｅｉｓ１．〕和多主枝孢〔Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍｈｅｒｂａｒｕｍ（Ｐｅｒｓ）Ｌｉｎｋ．〕对沙打旺种子和幼苗的致病力；评价了甲基托布津浸种和菲醌拌种防治沙打旺种带真菌的效果。结果表明，种子产地９～１１月的湿润度（Ｋ）与种子带菌率显著正相关，ｒ２＝０．９８７（Ｐ＜０．０１），二者的关系可用ｙ＝－１７．０＋２７．３ｘ表示；种子带菌率和混杂于种子间的植株残体带菌率分别与种子发芽率呈显著负相关，ｒ２分别为０．９８７（Ｐ＜０．０１）和０．９３１（Ｐ＜０．０５）。人工侵染试验与相关分析的结果表明，细交链孢是沙打旺种子和幼苗的主要病原菌，接种处理的种子发芽率为４１．８％，苗腐率为１５．８％，而未接种对照组的相应数值是７８．８％和０．０；多主枝孢对种子发芽无显著影响，但可引致４．５％的幼苗腐烂（Ｐ＜０．０５），该菌是沙打旺种子和幼苗的较重要的病原真菌。甲基托布津浸种和菲醌拌种均可显著降低种子带菌率，与对照相比，总带菌率降低６２．３％～７８．７?

元江印楝植物内生真菌及其抗菌活性筛选的研究

通过抗菌活性初步筛选,从采自云南元江县的印楝(Azadirachta indica A.Juss)植物茎和果实中已分离到的372株内生真菌中筛选出80株作为复筛菌株,经显微形态特征观察鉴定为5目、6科、29个属。选择16种病原微生物作为指示菌检测复筛菌株发酵产物的抗菌活性,结果表明,其中29株内生真菌对细菌、植物病原真菌和皮肤致病真菌中的一种或多种病原微生物有抑制生长作用,活性菌株比例占复筛菌株的36.25%,并显示种群多样性,其中7株内生真菌显示较强的广谱抗菌作用,活性较好的菌株主要分布在曲霉属和交链孢属。

烟草赤星病菌菌种保存及致病性研究

在烟草赤星病抗性鉴定和生防菌剂筛选工作中,常因菌种在室内连续多代移植培养导致菌株的致病力衰弱,而影响测定结果的准确性和一致性。对此,本研究尝试将赤星病菌种经Richards培养液制备成菌层,置于4℃低温环境条件下长期保存,连续5年测定其培养性状和致病力,与连续转代培养方法保存的菌种进行比较,结果表明在连续5年的试验过程中,Richards法保存的菌种在培养性状和致病性上没有发生衰退,该菌种保存方法制作简单、经济、可靠,适用于烟草品种抗赤星病鉴定和生防菌剂的筛选工作。

交链孢酚单甲醚对人胚肺2BS细胞DNA含量和细胞周期的影响

用显微分光光度计方法研究了食管癌高发区林县粮食中分离的优势污染菌互隔交链孢霉提取物交链孢酚单甲醚(AME)对人胚肺成纤维细胞(2BS株)的DNA含量和细胞周期的影响。结果发现:AME作用人胚肺2BS细胞两个倍增时间后,随着AME浓度的加大,G_1期细胞峰(2C细胞)降低,出现了较高的G_2+M期细胞峰(4C细胞),S期细胞增加,分裂指数降低.并出现了一些非整倍体的细胞,这些改变与对照组相比较有显著性差异。说明AME可以抑制人胚肺2BS细胞的周期,使S期细胞受阻,堆积和损伤,导致非整倍体细胞出现,这些将有可能成为细胞突变的遗传基础。从而为互隔交链孢霉与林县人食管癌的发生可能有一定关系的说法提供了实验佐证。