苹果叶斑病病原菌鉴定及杀菌剂筛选

苹果叶斑病是苹果树上常见的病害之一,在苹果产区发生普遍且致病力较强,造成苹果树大量落叶,对苹果产量和品质造成了严重的影响。为了鉴定研究区苹果叶斑病的病原菌种类,筛选出有效杀菌剂,本研究对苹果发病叶片上的病原菌进行了离体培养、纯化并测定其致病性,对分离到的菌株进行形态学和分子生物学鉴定。利用带毒介质菌丝生长速率法测定该病原真菌对75%百菌清可湿性粉剂、43%戊唑醇悬浮剂等4种药剂的抑菌率和敏感性。结果表明,引起该地区的苹果叶斑病的病原菌是链格孢菌Alternaria alternata;4种化学药剂对病原菌均有抑制效果,4种药剂中EC_(50)值最小的为45%咪鲜胺水乳剂,其EC_(50)值为0.521 5 mg·L^(-1);最大的为75%百菌清可湿性粉剂,其EC_(50)值为1 080.19 mg·L^(-1);4种药剂相同浓度下抑菌率最高的为45%咪鲜胺水乳剂,最低的为75%百菌清可湿性粉剂,稀释2 000倍时抑菌率分别为82.76%和58.26%。因此,由链格孢引起的苹果叶斑病防治可优先选45%咪鲜胺水乳剂。

莴笋链格孢叶斑病病原鉴定及室内生防菌剂筛选

【目的】明确江西省南昌市郊区莴笋链格孢叶斑病病原菌种类,筛选出能有效防治该病害的生防菌剂。【方法】采用组织分离法对莴笋链格孢叶斑病进行病原菌分离纯化,选择代表性菌株WS1作为供试菌株进行孢子悬浮液刺伤接种,再对接种发病的病斑进行病原菌再分离,以完成柯赫氏法则验证,最后对分离所得病原菌进行形态学鉴定;采用真核生物核糖体基因转录间隔区rDNA-ITS以及过敏原基因Alt a1分别对病原菌进行PCR扩增和序列测定,使用BLAST软件,在GenBank中进行序列同源性比对,并利用MegA 7.0软件构建系统发育树,以对病原菌进行分子鉴定。采用对峙培养法测定8种常见市售生防菌剂对该病原菌的室内抑菌效果。【结果】共分离获得23个培养性状一致的链格孢菌株,其对莴笋叶片均具有致病性。病原菌在PDA培养基上菌落圆形,中间灰褐色,边缘白色,菌丝体茂密呈绒状,后期正面中央颜色加深成暗青褐色,背面呈黑褐色,菌落平均生长速度10.86 mm/d。分生孢子倒棍棒形或椭圆形,淡褐色至褐色,具0~6个横隔、0~3个纵隔和0~2个斜隔,孢身大小14.60~40.09μm×6.61~14.44μm。短喙柱状或锥形,淡褐色,大小1.84~8.29μm×2.60~4.35μm。分生孢子链生于分生孢子梗上,主链一般不超过10个孢子,支链不超过5个孢子。其培养性状和形态特征与文献中对交链格孢(Alternaria alternata)的描述相吻合。测定的rDNA-ITS和Alt a1基因的序列长度分别为570 bp和472 bp,序列登录号分别为OP161641和OP185144,与GenBank中交链格孢对应序列的同源性均为100%,并在系统发育树上处于同一个分支且支持率为99%。通过形态学和分子生物学将此病原菌鉴定为交链格孢(A.alternata)。在室内生防菌剂筛选试验中,地衣芽孢杆菌、荧光假单胞菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌的抑菌率均高于63%,其中地衣芽孢杆菌和荧光假单胞菌抑菌效果突出,抑菌率分别高达75.42%和72.74%。【结论】确定江西省南昌市郊区莴笋链格孢叶斑病的病原菌为交链格孢(A.alternata),地衣芽孢杆菌和荧光假单胞菌可作为下一步莴笋链格孢叶斑病田间防效试验的候选生防菌剂。

油茶叶斑病病原菌的分离、鉴定与室内毒力测定

为了明确湖南丘陵地区油茶叶斑病的病原菌种类,从双峰县油茶基地采集了7份油茶叶斑病病叶样本,采用组织分离法从中分离纯化获得3株病原菌,通过形态学观察、分子生物学鉴定及致病性检测,证实该地区油茶叶斑病的病原菌为交链格孢Alternaria alternata。通过带毒介质菌丝生长速率法测定该病原真菌对6种药剂的敏感性,结果表明,6种化学药剂的EC_(50)值由大到小排列依次为70%甲基硫菌灵可湿性粉剂>75%百菌清可湿性粉剂>5%己唑醇悬浮剂>43%戊唑醇悬浮剂>10%苯醚甲环唑水分散粒剂>45%咪鲜胺水乳剂,后面4种化学药剂对油茶叶斑病病原菌均具有较好的抑菌效果;油茶叶斑病病原菌对45%咪鲜胺水乳剂最为敏感,其EC_(50)值为0.5215 mg/L;对70%甲基硫菌灵可湿性粉剂最不敏感,其EC_(50)值为9021.94 mg/L。

青海省民和县青贮玉米叶斑病及其病原调查初报

为调查青海省民和县玉米叶斑病病原菌种类,从该地区玉米种植地采集具有典型叶斑病症状的玉米病叶,通过叶斑病症状观察分类,采用组织分离法获得菌株,并从分离的菌株中选取具有代表性的菌株进行分子鉴定.结果表明,青海省民和县玉米种植地玉米叶斑病症状主要分为3类,第1类病斑不规则,较大,呈现褐黄色;第2类病斑呈长条形,中央部分呈现黄褐色,边缘是紫褐色或深褐色,有2~3层同心轮纹,且能侵染叶脉部分;第3类病斑呈长方形或菱形,病斑较大.共分离到14株菌株,经rDNA-ITS序列分析发现,引起玉米叶斑病的病原菌分别为交链格孢(Alternaria alternat)、A.burnsii、细级链格孢(A.tenuissima)、层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)、三线镰刀菌(F.tricinctum)和F.longifundum.引起青海省民和县玉米叶斑病的病原菌分别隶属于2属6种,病原菌主要为链格孢属真菌.

油茶叶斑病病原菌的分离、鉴定与室内毒力测定

为了明确湖南丘陵地区油茶叶斑病的病原菌种类,从双峰县油茶基地采集了7份油茶叶斑病病叶样本,采用组织分离法从中分离纯化获得3株病原菌,通过形态学观察、分子生物学鉴定及致病性检测,证实该地区油茶叶斑病的病原菌为交链格孢Alternaria alternata。通过带毒介质菌丝生长速率法测定该病原真菌对6种药剂的敏感性,结果表明,6种化学药剂的EC_(50)值由大到小排列依次为70%甲基硫菌灵可湿性粉剂>75%百菌清可湿性粉剂>5%己唑醇悬浮剂>43%戊唑醇悬浮剂>10%苯醚甲环唑水分散粒剂>45%咪鲜胺水乳剂,后面4种化学药剂对油茶叶斑病病原菌均具有较好的抑菌效果;油茶叶斑病病原菌对45%咪鲜胺水乳剂最为敏感,其EC_(50)值为0.52150 mg/L;对70%甲基硫菌灵可湿性粉剂最不敏感,其EC_(50)值为9021.94mg/L。

青贮玉米链格孢叶斑病菌生物学特性及其室内防治药剂筛选

为了解青贮玉米链格孢叶斑病菌的生物学特性并筛选出防治该病害的有效杀菌剂,本研究测定了9种碳源和7种氮源对交链格孢、芸薹链格孢、致密链格孢、极细链格孢和茄链格孢5种病原菌菌丝生长的影响,以及7种杀菌剂对病原菌的抑菌作用。结果表明,供试碳源中淀粉、麦芽糖和葡聚糖对5种链格孢生长的促进作用最为明显;供试氮源中蛋白胨、酵母提取物和牛肉膏对5种链格孢生长的促进作用最为明显。室内防治药剂试验中,45%咪鲜胺水乳剂和40%氟硅唑乳油对5种病原菌表现出很强的抑制作用,EC50在0.527~5.092 mg/L之间。

中药材植物川芎的3种新病害鉴定记述

川芎(Ligusticum chuanxiong)是我国重要的传统大宗常用中药材,随着种植年限的延长和种植面积的不断扩大,川芎的病害也有加剧的趋势.该研究通过对四川省都江堰市川芎种植园的调查,采集感病植株样品回室内分离并根据科赫氏证病律步骤进行病害诊断鉴定,发现并确诊了3种新的真菌性病害,即川芎根腐萎蔫病、叶褐斑病和灰霉病,它们的病原菌分别是茄腐镰刀菌(Fusarium solani)、细极链格孢组(Alternaria tenuissima group)成员和灰葡萄孢(Botrytis cinerea).该文分别记述了3种病害的症状和病原菌特征,为进一步探讨川芎病害的发生发展规律和综合防治措施提供了依据.

玉竹叶斑病病原鉴定及生物学特性研究

通过对玉竹叶斑病病原菌一系列分离、纯化、接种试验进行病原鉴定，并在实验室条件下，对玉竹叶斑病菌进行了生物学特性研究。结果表明：结合查阅中国科学院中国孢子植物志编辑委员会编辑的《中国真菌志》第16卷链格孢属，初步确认病原为目光兰链格孢（Alternaria asphodeli）；适宜茵落生长的碳源为木糖；适宜菌落生长的氮源为硝酸钾；适宜菌落生长温度为25℃；适宜菌落生长的pH为6～7；全光照条件下适宜菌落生长。

黑龙江省黄瓜链格孢叶斑病病原鉴定及生物学特性研究

链格孢属是重要的植物病原菌,种类繁多,常给作物生产带来严重损失。2019年在黑龙江省齐齐哈尔黄瓜保护地大棚内发现了疑似链格孢侵染的黄瓜病害。采集的病样经病原菌分离培养、纯化及致病性测定后,采用形态学观察和分子生物学分析进行了病原鉴定。鉴定结果显示,黑龙江省黄瓜保护地大棚内发现的叶斑病病原为Alternaria alternata。对该病菌生物学特性进行研究表明,菌丝生长最快的培养基是CA和黄瓜煎汁培养基;最适碳源为葡萄糖和蔗糖,氮源为蛋白胨;最适培养条件为28℃,pH 8~9;致死温度为55℃10 min;光照对菌丝生长的影响不大。最适合病菌产孢的培养基为PDA和CA培养基,最适碳源和氮源分别为葡萄糖和蛋白胨;培养条件为28℃、pH 8~9、12 h光照/12 h黑暗时产孢量最大。

引起云南省珠芽魔芋叶斑病的链格孢菌种类鉴定

珠芽魔芋Amorphophallus bulbifer是我国西南地区广泛种植的一种特色经济作物,自2015年开始云南省德宏州及西双版纳州珠芽魔芋种植区发生了一种魔芋新病害。典型症状为早期叶片上出现具黄色晕圈圆形斑点,逐渐形成大斑块,最终整个叶片枯死。本研究采用温室接种致病性测定、形态及分子鉴定等方法对珠芽魔芋叶斑病病原进行研究。结果表明:从各种植区采集的37份叶部病样中分离得到37个生长较一致的真菌分离物;致病性试验证实,均为珠芽魔芋叶斑病病原菌,显微镜下观察该病原菌具有细极链格孢Alternaria tenuissima的形态特征;将其rDNA-ITS、EF-1ɑ和β-tubulin基因序列在GenBank中进行同源性比对分析显示,其序列与A.tenuissima的相似性为99%~100%,分子鉴定与形态学鉴定结果一致。这是国内首次发现由细极链格孢侵染所引起的珠芽魔芋叶斑病。

茶树链格孢叶斑病的病原鉴定

茶树是我国重要的经济作物,茶园叶病的流行会造成严重的经济损失。2017年10月到2018年1月从安徽、福建和湖北省茶区的9个茶树品种上采集代表性茶叶斑病叶,该病害的发病症状与由Colletotrichum spp.引起的茶炭疽病相似。采用组织分离法从发病叶片组织分离获得26株菌落形态一致的真菌分离物,显微镜观察结果显示,各菌株分生孢子的产生方式和形态特征相似。为进一步明确菌株的分类地位,选取2株来自安徽庐江和宣城地区的代表性菌株(EC-6和XBC1-3)进行多基因片段的PCR扩增和序列分析。结果表明,代表性菌株EC-6和XBC1-3的ITS、gpd、tef-1a基因序列分别与交链格孢Alternaria alternata参考菌株CBS 107.27的序列(KP124300, KP124157, KP125075)相似性为100%、99%和100%,结合菌株形态学观察以及柯赫氏法则验证,证实交链格孢是引起该茶树叶斑病的致病菌。这是在安徽茶区首次发现由致病性链格孢引起茶树叶斑病。

白三叶草一种叶斑病病原菌的分离鉴定

明确在山东省聊城市白三叶草上发现的一种叶斑病的病原菌,以期为该病害的防控提供参考。2019年采集山东省聊城市东昌府区具有叶斑病的白三叶叶片,利用组织分离法分离病原菌,并依据柯赫式法则验证致病性。在形态学观察的基础上,对病原菌进行分子生物学鉴定,构建系统发育树,分析其遗传多样性。从发病叶片中分离得到病原菌(标记为SY1),具有致病性,且与田间发病症状一致。利用真菌通用引物ITS4/ITS5进行PCR扩增和测序,序列分析表明SY1菌株与乔木链格孢(Alternaria arborescens)(序列号KC464334.1)的相似性为100%,且在系统发育树上聚在一起。根据形态特征和ITS基因序列鉴定结果,将白三叶草叶斑病病原菌鉴定为乔木链格孢,为国内首次报道乔木链格孢引起白三叶草叶斑病。

紫藤叶斑病病原鉴定

通过采集安徽霍邱县和池州市园林植物紫藤感病的新鲜叶片,进行分离和纯化,获得病原纯培养,并对其进行形态和分子鉴定及致病性测定,明确了紫藤叶斑病的病原种类及其分类地位。结果表明,室内外接种和田间观察表现出相同的症状,从叶片组织上分离纯化得到2株分离株,形态观察结果表明均为链格孢属链格孢(Alternaria alternate)。利用真菌rD NA-ITS通用引物进行PCR扩增并测序和比对分析,结合形态学特征确定引起紫藤叶斑病的病菌均为链格孢菌Alternaria alternate(Fr.)Keissler。

海芋叶枯病病原菌鉴定

2008年以来,在湖北省武汉市的海芋[Alocasia macrorrhiza(Linn.)Schott]叶片上新发生一种叶部病害,由于发病后期叶片干枯撕裂,故称之为叶枯病。海芋叶枯病主要发生在叶片,病斑多从叶缘开始,初期症状是病斑呈水渍状褪绿,后期病斑中央灰白色,边缘褐色,周围有黄色晕圈。从海芋病叶分离得到了病菌,经柯赫氏法则验证为致病病原菌。据病原菌的培养性状及形态特征将该病原菌鉴定为海芋链格孢。病原的确定将为海芋叶枯病发生规律的研究和控制奠定基础。

青岛地区观赏凤梨叶斑病的病原分离与鉴定

2017年在青岛市城阳区、李沧区多个花卉市场调查发现,观赏凤梨叶斑病发病率高达30%~50%。采集观赏凤梨叶斑病病叶,对病原菌进行分离,采用形态学与分子生物学方法对病原菌进行鉴定,并通过致病试验进行验证。结果表明:引起青岛地区观赏凤梨叶斑病的病原菌为链格孢菌(Alternaria alternata)。本研究首次报道链格孢菌引起观赏凤梨叶斑病,对该病害的防治具有重要意义。

豇豆链格孢叶斑病病原菌鉴定

2015年初,在海南省乐东县豇豆主产区发现一种豇豆新病害——豇豆叶斑病,主要危害豇豆叶片。为了明确病害病原菌,为农户今后开展田间防治提供科学有效的依据,笔者拟通过观察豇豆田间发病特征,并对病菌进行分离纯化、致病性测定,结合形态学观察及分子生物学鉴定确定病原菌。结果表明:豇豆叶斑病发病初期,在叶片中央产生豌豆大小的灰色或者浅褐色病斑,病斑中央呈灰白色,叶片边缘伴有一定面积的枯萎,后期病斑连接成片,造成叶片枯萎坏死,将其rDNA-ITS和rDNA-28S序列进行BLAST比对,结合形态学观察,初步鉴定该病害致病菌为链格孢(Alternaria.sp.)。

北京地区红王子锦带叶斑病病原分离与鉴定

红王子锦带(Weigela florida cv.Red Prince),为忍冬科、锦带花属落叶开张性灌木,是华北地区主要的早春开花灌木,在城市现代公园建设中占据重要地位[1]。2022年8月课题组在北京市海淀区稻香湖公园发现红王子锦带叶斑病为害严重。为明确该地区红王子锦带叶斑病病原。

鸢尾链格孢叶斑病病原菌鉴定

2023年6月发现,在江西省南昌市江西农业大学植物园种植的鸢尾普遍发生链格孢叶斑病。为明确该病害病原菌种类,对发病叶片进行真菌分离,对分离菌株进行致病性测定,共获得24株链格孢,在人工接种试验中均具有致病性;选择3株代表性菌株JXYW1、JXYW2、JXYW3进行培养性状和形态特征观察及多基因(rDNA-ITS、EF-1、GAPDH、Altα1)序列分析,这3株菌株培养性状和形态特征相同,符合文献中对鸢尾生链格孢Alternaria iridicola的描述,3株菌株间rDNA-ITS、EF-1、GAPDH、Altα1基因序列也完全相同,与GenBank中鸢尾生链格孢对应基因序列的相似性为100%,在多基因系统发育树上与鸢尾生链格孢菌株YZU聚于同一个分支。据此,将江西农业大学植物园内鸢尾链格孢叶斑病病原菌鉴定为鸢尾生链格孢。

紫萼叶斑病病原的分离与鉴定

紫萼(Hosta ventricosa),又名紫玉簪,属百合科(Liliaceae)玉簪属(Hosta)多年生宿根草本植物,主要种植于亚洲温带与亚热带地区,在庭院美化和城市绿化中占据重要地位[1]。2022年6月作者发现北京市丰台区北宫国家森林公园内紫萼叶斑病发生严重,发病率高达60%。发病部位多集中于叶片的尖端,初期在叶片上形成褪绿棕褐色病斑,椭圆形或不规则形状。随着病情发展,病斑逐渐扩大并连接在一起,近苍白色,后期叶片逐渐枯萎(图1)。为明确该地区紫萼叶斑病病原,对采集的病样进行组织分离培养,通过致病性测定等完成柯赫氏法则验证,根据形态学特征和分子生物学方法鉴定病原种类,以期为紫萼叶斑病科学防控提供理论依据。

大果榆叶斑病病原的鉴定

大果榆(Ulmus macrocarpa Hance),为榆科(Ulmaceae)榆属(Ulmus)落叶乔木或灌木,花果期一般4-5月份,榆钱比普通榆树的榆钱大,因此称为大果榆。作为北京乡土树种,大果榆具有耐寒、耐旱特点,适应性强,病虫害少,且具有不可替代的生态价值和独特的园林观赏价值[1]。在北京市海淀区颐和园内谐趣园涵远堂两侧的山坡上,生长在山石缝隙里的大果榆已形成特色植物景观,其姿态优美、枝繁叶茂,春夏时节绿树浓荫,秋季叶色由绿变黄、变红,色彩斑斓,令人震撼,是不可多得的“增彩延绿”乡土彩叶树种。