缺氧对培养人视网膜色素上皮细胞线粒体酶活性的影响

目的 研究缺氧对培养的人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞线粒体琥珀酸脱氢酶(succinatedehydrogenase,SDH)和细胞色素氧化酶(cytochromeoxi dase,COX)活性的影响,以及缺氧对RPE细胞增生的作用。方法 氯化钴(CoCl2 )法建立培养人RPE细胞缺氧模型。于缺氧后0 .5h、1h、2h、4h、6h、8h、16h和2 4h ,用组织化学法测定SDH和COX活性。于缺氧后第1天、2天、3天、4天和5天,用四甲基偶氮唑蓝[3(4,5dimethylthiazole 2 yl) 2 ,5diphenyltetrazoliumbromide,MTT]比色法检测RPE细胞增生。结果 RPE细胞SDH和COX活性随缺氧时间延长而逐渐降低,与对照组有显著性差异(P <0 .0 5 )。缺氧组RPE细胞增生能力增强(P <0 .0 5 )。结论 缺氧可使RPE细胞线粒体酶活性降低,并刺激RPE细胞增生。

胆道梗阻再通后肝线粒体呼吸酶活力的变化

通过复制大胆道梗阻再通模型，对肝细胞线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）及细胞色素氧化酶（CCO）活力在胆道梗阻再通前后的变化进行了测定。结果表明，胆道梗阻对SDH及CCO活力可产生明显的抑制，再通后二酶的活力在各组的恢复程度与再通前的受抑程度及再通后的恢复时间有明显的关系。提示，尽早解除梗阻有利于肝细胞线粒体呼吸抑制的恢复。

青兰和复方党参对急性缺氧小鼠心肌细胞色素氧化酶与琥珀酸脱氢酶活力的影响

实验在模拟８０００ｍ高度减压缺氧７ｈ的条件下，观察了急性缺氧小鼠心肌细胞色素氧化酶与琥珀酸脱氢酶活力的变化，以及青兰和复方党参对酶活力变化的影响。结果表明：缺氧组的两种酶活力水平均较常压组呈现减低（细胞色素氧化酶）或非常显著减低（琥珀酸脱氢酶）的变化，青兰和复方党参组较缺氧组均表现有防止酶活力减低的作用。

缺血再灌注损伤心肌电镜细胞化学的定性与定量分析（二）──琥珀酸脱氢酶和细胞色素氧化酶

本研究选择心脏瓣膜病患者２０例，随机分为两组，每组１０例，在瓣膜置换术中，一组采用低温体外循环加冷晶体停跳液（Ｓｔ．Ｔｈｏｍａｓ医院液）间断灌注的心肌保护方法（简称低温组），另一组采用常温体外循环加温血停跳液持续灌注的心肌保护方法（简称常温组）。两组缺血期和再灌注期心肌琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）和细胞色素氧化酶（ＣＣＯ）染色定性分析结果均为阳性，计算机图像分析结果表明，低温组再灌注期ＳＤＨ酶活力灰度值高于低温组缺血期（１４３．０７±１．３８，１１５．２５±０．１５，Ｐ＜０．０５）．两组再灌注期ＳＤＨ酶活力灰度值相差极为显著，低温组大于常温组（１４３．０７±１．３８，１２９．０６±４．６３，Ｐ＜０．０１）。常温组缺血期ＣＣＯ酶活力灰度值显著高于低温组缺血期（１４５．５４±６．９０，１２８．４０±５．４３，Ｐ＜０．０５），常温组再灌注期ＣＣＯ活力显著高于低温组再灌注期（１４８．６２±４．８２，１２３．６０＋４．８２，Ｐ＜０．０５）。表明低温组缺血期心肌线粒体酶系可发生代偿，低温组再灌注期心肌线粒体损伤较重，而常温组可减轻缺血再灌注损伤，无需代偿。同时也表明温血停跳液可提供ＣＣＯ以适宜的相对高氧代谢环境，在该代谢环节?

大鼠心肌线粒体细胞色素氧化酶琥珀酸脱氢酶的超微结构定位

一、琥珀酸脱氢酶(SDH)超微结构技术的改进:合理筛选固定时间及固定剂浓度;组织在基质中孵育后再经DAB处理,对不同时间孵育后的组织作动态性观察。二、细胞色素氧化酶(CCO):选择合适的固定剂种类,固定时间及固定剂浓度;筛选最适孵育时间;低温脱水。

黄芪复方对急性低压低氧大鼠视网膜线粒体损伤的保护作用

目的研究急性低压低氧环境对大鼠视网膜线粒体的影响及黄芪复方(radix astragali seu hedysari compound,RAHC)的干预作用。方法将42只健康SD大鼠随机分为正常氧含量对照组(常氧组)、低氧组、RAHC干预组。低氧组和RAHC干预组在低压氧舱中模拟5000 m海拔的喂养环境,RAHC组在喂养中每天予以RAHC汤药0.1 g·kg-1灌胃,低氧组予以同等剂量生理盐水灌胃。各组在上述条件处理7 d后剥离视网膜,HE染色后光学显微镜下观察大鼠视网膜组织形态变化,RT-PCR法检测锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn-SOD)的表达,比色法测定琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞色素C氧化酶(cytochrome c oxidase,COX)活性,免疫组化方法检测细胞色素C(cytochrome C,Cytc)的表达。结果光学显微镜下观察发现,低氧组大鼠视网膜出现水肿,经RAHC干预后水肿减轻;低氧组Mn-SOD mRNA水平(0.811±0.057)U·mg^-1较常氧组(0.950±0.920)U·mg^-1下降(P<0.05),RAHC干预组Mn-SOD mRNA水平(0.884±0.101)U·mg^-1较低氧组高,差异有统计学意义(P<0.05);低氧组SDH水平(22.009±0.384)U·mgprot^-1较常氧组(30.104±0.854)U·mgprot^-1低(P<0.05),且RAHC干预后无明显差异(P>0.05);低氧组COX水平(0.632±0.031)ng·mL^-1较常氧组(2.461±0.097)ng·mL^-1低(P<0.01),RAHC干预组COX水平(1.204±0.037)ng·mL^-1较低氧组高,差异有统计学意义(P<0.01)。与常氧组相比,低氧组大鼠Cytc在视网膜神经节细胞层、神经纤维层、内丛状层及外丛状层中棕色染色阳性表达增强,但在RAHC干预组中的表达强度减弱。结论急性低压低氧环境导致视网膜线粒体发生损伤,RAHC对急性低压低氧导致的视网膜损伤有保护作用,可能与上调Mn-SOD、COX活性及减少Cytc的释放有关。