在载脂蛋白E基因敲除小鼠和人脐静脉平滑肌细胞中同型半胱氨酸对B1和Alu重复序列甲基化的影响

目的观察同型半胱氨酸对载脂蛋白E基因敲除小鼠不同组织和人脐静脉平滑肌细胞中B1和Alu序列甲基化水平的影响,为进一步阐明同型半胱氨酸致动脉粥样硬化形成的分子机制提供理论和实验依据。方法复制高同型半胱氨酸血症载脂蛋白E基因敲除小鼠模型,给予不同饮食14周后,分别取小鼠心脏组织、血管及白细胞;原代培养人脐静脉平滑肌细胞,用50、100、200及500μmol/L同型半胱氨酸干预培养72 h后,抽提组织、白细胞及平滑肌细胞的基因组DNA,采用巢式降落式甲基化特异性PCR法分别检测不同组织和细胞中B1和Alu序列甲基化水平的变化。结果饲以高蛋氨酸饮食的载脂蛋白E基因敲除小鼠心脏组织、血管和白细胞中B1重复序列甲基化水平下降明显,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05和P<0.01);在同型半胱氨酸干预的平滑肌细胞中Alu序列甲基化水平下降显著(P<0.05和P<0.01)。结论同型半胱氨酸引起B1和Alu序列低甲基化改变可能是其导致动脉粥样硬化发生发展的重要机制之一。

组织型纤维酶原激活因子A1u重复序列基因多态性检测

研究山东地区汉族人组织型纤维酶原激活因子(TPA)-Alu重复序列基因多态性特点。提取外周血DNA,采用聚合酶链反应扩增t-PA基因h(8th)内含子的Alu重复序列,记录Alu插入/缺失(I/D)结果。166例山东人中TPA-Alu-I/I纯合子基因型50个;TPA-Alu-D/D型46个;TPA-Alu-I/D杂合型70个。Alu序列的插入纯合(I/I)频率为30.12％,缺失纯合(D/D)频率为27.71％:(I/D)杂合型频率为42.17;经x^2检验男女之间无显著性差异(P>0.05)。受试者等位基因的频率符合Hardy-Wein-berg原则,结果有代表性。

Alu序列与人类疾病研究进展

Alu序列通过RNA依赖性机制即反转录转座在灵长类动物基因组中扩增,其在人类基因 组中的拷贝数已经超过100万个。这些序列在人类基因组中被认为有很多功能,并对基因结构有很大 的影响。Alu序列大概以每200个新生儿就一个插入的速度继续扩增。已有研究表明Alu序列的插入和 Alu重复序列之间的不等同源重组导致了多种人类疾病。Alu序列不仅对基因组的进化做了很大贡献, 而且对大部分人类遗传病也起了很大的作用。随着新的Alu亚类产生,新的亚类引起的疾病又见报道, 本文将对这一方面内容的发展动态进行综述。

人羊膜上皮细胞移植治疗肝纤维化免疫大鼠

目的 观察人羊膜上皮细胞（human amniotic epithelial cells，hAECs）在正常免疫大鼠体内存活、迁徙及对大鼠肝纤维化程度的影响，为 hAECs 应用于临床提供实验依据。方法 10 周龄雄性 SD 大鼠 64 只，体重 220 ～ 280 g，随机分为 4 组，每组 16 只。A 组为肝纤维化 ＋ 细胞移植（移植细胞量 4×10^6个）组，B 组为肝纤维化 ＋ 生理盐水组，C 组为肝纤维化组，D 组为空白对照组。移植后 2 周，取 A 组大鼠心、肝、脾、肾、肺、脑组织采用 DNA-PCR 法检测人 Alu 基因重复序列，免疫组织化学染色观察人白细胞抗原 G（human leucocyte antigen G，HLA-G）表达，并比较各脏器阳性表达百分比（脾脏为细胞注入器官不纳入统计）；取各组肝组织，行 HE 染色观察并采用肝纤维化组织学半定量计分系统（SSS）行肝纤维化半定量分析，行 TGF-β1免疫组织化学染色观察并行免疫组织化学评分（immunohistochemical score，ISH）；取各组血清行谷草转氨酶（aspartate transaminase，AST）、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、白蛋白（albumin，ALB）浓度检测，定量分析大鼠肝纤维化程度。 结果 A 组各脏器中人 Alu 基因重复序列及 HLA-G 均表达阳性，肝组织中阳性表达百分比显著高于其余组织，比较差异有统计学意义（P〈0.05）。A、B、C组肝纤维化组织学半定量计分分别为（10.47±3.20）（、13.84±3.46）（、13.85±3.16）分，A 组显著低于 B、C 组（P〈0.05）；B、C 组间差异无统计学意义（P〉0.05）。A、B、C、D 组 TGF-β1的 ISH 评分分别为（3.60±1.50）、（5.38±2.60）、（5.50±2.40）、（1.87±1.36）分，A、B、C 组显著高于 D 组，A 组显著低于 B、C 组（P〈0.05）；B、C 组间差异无统计学意义（P〉0.05）。A、B、C 组血清 AST、ALT 浓度显著高于 D 组，A 组显著低于 B、C 组（P〈0.05），B、C 组间差异无统计学意义（P〉0.05）；ALB 浓度显著低于 D 组，A 组显著高于 B、C 组（P〈0.05）；B、C 组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 hAECs 可在正常免疫大鼠体内存活，可缓解肝纤维化程度并改善血清肝功能指标。