蒙古沙冬青AmDREB2.2基因的克隆与植物表达载体构建

从前期建立的蒙古沙冬青[Ammopiptanthus mongolicus(Masxim)Cheng f.]根转录本数据库中克隆得到1个编码DREB类转录因子基因。结果表明,Am DREB2.2基因序列全长1 045 bp,开放阅读框(ORF)为597 bp,编码198个氨基酸,具有典型的DREB转录因子保守的AP2结构域。实时荧光定量PCR分析表明,该基因能在根、叶中表达,但对干旱、低温响应不同,Am DREB2.2主要参与根的干旱胁迫应答。在Am DREB2.2基因的编码区两端分别加入Bam HⅠ和SacⅠ酶切位点,双酶切植物表达载体p PZP212和带有酶切位点的Am DREB2.2基因PCR产物,成功获得了Am DREB2.2的植物过表达载体p PZP212-Am DREB2.2。

OTS-2.2S基因芯片对人脑挫伤后基因表达差异的初步研究

目的利用基因芯片技术,研究人挫伤脑组织中基因表达差异。方法从脑组织提取mRNA,通过OTS-2.2S基因芯片,研究脑挫伤组织与对照脑组织细胞原癌及抑癌相关基因特异性表达差异。结果发现在挫伤脑组织中,HoJ-1和KIAAOO65基因表达水平显著下降,而p107mRNA表达水平显著升高。结论在脑挫伤中仅发现3条基因的表达有显著性差异;本研究是对脑损伤后基因表达水平及其法医学意义进行的探索性研究。

草地早熟禾SnRK2.2基因克隆及非生物胁迫响应分析

逆境胁迫期间蔗糖非发酵相关的蛋白激酶2(SnRK2)通过磷酸化在植物胁迫信号转导途径中起关键作用,参与代谢和应激信号之间的相互作用。为发掘并利用草地早熟禾(Poa pratensis L.)SnRK2家族基因,本研究利用RT-PCR技术得到SnRK2.2基因,借助生物信息学及实时荧光定量PCR技术分别对其进行分子特征、组织部位以及非生物胁迫下该基因表达模式的研究。研究结果:草地早熟禾SnRK2.2包含典型STKc_SnRK2结构域、蛋白激酶ATP结合信号区、N-肉豆蔻酰化位点等功能域,其与燕麦、小麦同源性最高;实时荧光定量PCR结果表明,草地早熟禾SnRK2.2基因在组织部位中相对表达量为穗>叶>茎>根,该基因可积极响应干旱、盐、低氮、低磷、ABA、BR诱导处理。研究结果为丰富草坪草SnRK2抗逆机制提供理论基础。

小麦SnRK2.2基因克隆、表达载体构建及转化

SnRK2基因家族成员参与蛋白质的磷酸化,在植物抵御非生物胁迫方面发挥重要的作用。本研究以水稻SAPK2基因序列为基础,通过RT-PCR技术克隆得到一个新的小麦SnRK2基因,命名为Ta SnRK2.2,并提交到Gen Bank(登录号:KJ850253)。Ta SnRK2.2基因全长4 118 bp,由9个外显子和8个内含子组成,包含一个1 026 bp的开放阅读框,编码341个氨基酸。SnRK2.2基因序列在禾本科植物中高度保守,Ta SnRK2.2与水稻SAPK2以及玉米SnRK2.2亲缘关系较近。Ta SnRK2.2基因编码的蛋白质分子量为38.64 k D,理论等电点为5.45,含有SnRK2基因家族典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶保守结构域和多处磷酸化位点。构建了Ta SnRK2.2基因过表达载体,转化拟南芥,获得转基因植株,通过RT-PCR方法检测到Ta SnRK2.2基因在拟南芥中稳定表达。

甘薯中fw2.2同源基因的PCR扩增

fw2.2是影响番茄果实重量的一个重要数量性状基因。通过其氨基酸序列的保守区设计简并引物,然后在甘薯中进行扩增,扩增出的片段大小为500bp。测序并从数据库中找到其对应EST序列,全长为751bp,其中包括5’侧翼序列、3’侧翼序列和全部编码序列,EST序列对应的氨基酸序列共190个氨基酸。甘薯与番茄fw2.2的氨基酸序列具有较高的同源性,达到56.4%,由此推断此基因可能就是甘薯中fw2.2的同源基因。

花生fw2.2基因的克隆及遗传转化

fw2.2基因是影响番茄果重的一个重要数量性状基因,在心皮的细胞分裂中起负调控作用。本研究以番茄fw2.2基因的序列为探针,从花生EST数据库中筛选同源序列。根据花生的EST拼接序列设计引物对花生进行扩增,目标产物测序后,将推测的氨基酸序列与其他植物fw2.2基因编码的氨基酸序列进行比对,同源性为34.78%～66.85%。半定量RT-PCR结果表明,该基因在野生种和栽培种中的表达存在差异。将fw2.2基因连接到植物表达载体,通过农杆菌介导法转化花生品种花育23号,获得了12个PCR阳性的独立转化子。

根癌农杆菌介导fw2.2和PL基因对Micro-Tom番茄的遗传转化研究

为了快速验证与梨果实大小、硬度相关基因fw2.2、PL是否能够通过转基因植株顺利表达。本研究利用根癌农杆菌介导Micro-Tom番茄技术,以子叶为外植体,分析不同预培养时间、菌液浓度、浸染时间、共培养时间、延迟筛选对抗性芽诱导的影响,得出最优转化体系为:子叶预培养36h,在OD600nm值为0.4菌液中浸染6min,共培养60h,在300mg/L头孢霉素(Cef)、25mg/L卡那霉素(Kan)延迟筛选14d,转入300mg/L Cef、40mg/L Kan分化培养。分别得到转基因阳性株为42株、38株,转化率为14.9%,13.1%。初步验证了fw2.2、PL基因已经整合到Micro-Tom番茄中。

橡胶素基因家族4个成员在橡胶树染色体上的定位

笔者以巴西橡胶树‘热研7-33-97’品种为材料,利用原位PCR技术对巴西橡胶树的4个橡胶素基因(Hev1.1,Hev1.2,Hev2.1,Hev2.2)在染色体的位置进行了物理定位分析,并利用荧光原位杂交技术对原位PCR结果进行了验证。结果表明:Hev1.1,Hev1.2,Hev2.1,Hev2.2基因分别位于巴西橡胶树第8号染色体长臂、第7号染色体长臂、第6号染色体短臂和第12号染色体长臂上;信号距着丝粒平均百分距分别为10.88,31.51,63.81和67.92。

白血病病毒整合基因1、NKX2.2在儿童骨外尤文肉瘤病理诊断中的价值

目的探讨白血病病毒整合基因1 (FLI1)、NKX2.2在儿童骨外尤文肉瘤病理诊断及与其他小圆细胞肿瘤鉴别诊断中的价值。方法回顾性分析西安市儿童医院和空军军医大学西京医院病理科2014年1月至2020年12月诊断的儿童骨外尤文肉瘤及其他小圆细胞肿瘤病例资料, 采用免疫组织化学染色法观察FLI1、NKX2.2的表达情况。结果 1.骨外尤文肉瘤27例;其他小圆细胞肿瘤145例, 包括分化差型及未分化型神经母细胞瘤40例, 横纹肌肉瘤34例, 胚芽为主型肾母细胞瘤30例, 淋巴瘤25例, 恶性横纹肌样瘤10例, 髓系肉瘤2例, 促纤维增生性小圆细胞肿瘤1例, BCOR重排肉瘤1例, CIC重排肉瘤1例, 婴儿黑色素性神经外胚瘤1例。2.FLI1在骨外尤文肉瘤中的敏感性为88.9%(24/27例), 特异性为5.5%(8/145例), 阳性预测值为14.9%(24/161例), 阴性预测值为72.8%(8/11例);NKX2.2在骨外尤文肉瘤中的敏感性为92.6%(25/27例), 特异性为97.9%(142/145例), 阳性预测值为89.3%(25/28例), 阴性预测值为98.6%(142/144例);FLI1和NKX2.2联合检测的敏感性为85.2%, 特异性为97.9%, 阳性预测值为88.5%, 阴性预测值为97.3%。结论 NKX2.2在儿童骨外尤文肉瘤中有较高的敏感性和特异性, 可作为一线抗体用于其诊断和鉴别诊断;FLI1敏感性高, 但特异性差, 可作为一线抗体用于诊断, 但在鉴别诊断时应联合其他抗体以及分子检测, 以免误诊。