鹅膏菌毒性成分中毒特征及开发应用研究进展

目的探究鹅膏菌的毒性成分种类、中毒特征及其在医药和生物学领域内的应用前景,提供客观认识鹅膏菌安全性的新视角,为鹅膏菌的进一步合理开发和安全利用提供参考。方法通过检索国内外相关文献,针对鹅膏菌毒性成分、中毒特征及开发利用的现代研究进行整理、分析和归纳。结果鹅膏菌主要含有多肽、氨基酸、生物碱等毒性成分,但其成分组成和含量会受品种、使用部位等多种因素影响;中毒特征主要表现为胃肠道症状和急性肝肾损伤。同时毒性成分在抑菌、抗肿瘤、抗炎等药物开发和生物学研究中也具有开发利用价值。结论鹅膏菌具有重要的开发价值,了解鹅膏菌毒性成分种类、作用机制和安全剂量,有助于为鹅膏菌的临床安全使用及开发利用提供参考。

江苏省32例基于毒物检测确诊毒蕈中毒的临床特征分析

目的 探讨毒物检测技术在毒蕈中毒临床诊治中的应用价值,分析江苏省确诊毒蕈中毒患者的临床特征。方法 本研究是多中心回顾性队列研究。共收集2020年6月至2023年7月入组参与队列研究的江苏省内10家医院行毒物检测鉴定的32例毒蕈中毒患者的毒检结果、暴露信息及临床特征,分析毒检阳性即检出毒素患者的临床特征,对毒检采样情况与检测结果进行统计分析。结果 本研究共纳入32例进行毒检鉴定的临床诊断毒蕈中毒或可疑中毒患者。收集32例血液样本、31例尿液样本、22例蘑菇样本及1例呕吐物样本。其中蘑菇样本的毒素检测阳性结果18例,占比59.38%,检出α-鹅膏毒肽等8类毒素;1例呕吐物样本检出烟碱;所有患者血液、尿液样本中均未检出常见毒素。结论 通过毒物检测鉴定常见毒蕈毒素种类,能够辅助毒蕈中毒诊断,有助于更迅速、精准的明确蘑菇分型及其所含毒素类别,便于指导临床救治。

超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法测定毒蘑菇中5种鹅膏肽类毒素

鹅膏肽类毒素是毒蘑菇中毒事件中最常见的致死毒素,因此研究建立了超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱检测毒蘑菇中5种鹅膏肽类毒素的方法。样品经纯水提取后,以乙腈-5 mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,用HSS T3色谱柱(100 mm×2.0 mm, 2.1μm)对待测组分进行色谱分离;采用可加热电喷雾电离源(HESI),全扫描/数据依赖二级质谱扫描(Full mass-ddMS^(2))模式对待测物进行定性分析;在目标离子选择性扫描(Targeted-SIM)模式下,以外标法对待测物进行定量测定。结果显示,5种鹅膏肽类毒素在1.0~20.0μg/L范围内均呈现良好的线性关系,相关系数均大于0.99,检出限均为0.006 mg/kg,加标回收率为81.8%~102.4%,相对标准偏差为3.2%~8.3%。方法提供了丰富的化合物特征信息,可根据提取离子流色谱图结合同位素分布信息锁定可疑化合物,根据一级质谱和二级质谱碎片离子的精确质荷比,在没有相关标准品的情况下可对未知化合物进行结构推断和确证。方法样品前处理简单,定性分析特异性强,定量测定灵敏度高,可满足突发公共卫生事件快速定性定量的检测要求,同时也为开展此类毒素中毒快速筛查及未知毒素的结构锁定提供了可靠的技术支撑。

基于液相色谱-串联质谱技术快速检测6种蘑菇毒素及临床应用探讨

目的基于液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术建立快速检测血液、尿液中6种蘑菇毒素的分析方法,并将其应用于临床实际中毒案例。方法将0.1 mL血液、尿液经蛋白沉淀、氮吹复溶、超声过滤后用ACQUITY UPLC HSS T3液相色谱柱分离,质谱检测采用多反应监测模式(MRM)。结果该分析方法经过验证,符合方法学验证要求,其定量结果准确可靠,并于9例患者血液和(或)尿液样品中检出目标毒素,血液样品中浓度为1.12~5.63 ng/mL,尿液样品中浓度为1.01~9.27 ng/mL,检出物多为γ-鹅膏毒肽(γ-AMA)。新鲜蘑菇样品中检出目标物浓度为1.48~41.54 ng/mg,两份新苦粉孢牛肝菌样品中均检出羧基二羟基鬼笔毒肽(PCD)16.51~41.54 ng/mg。结论本研究中建立的LC-MS/MS方法前处理过程简单快速,具有较高的灵敏度,能同时检测多种蘑菇毒素类化合物,可为临床毒蕈中毒快速诊断提供策略和参考。

野生菌中鹅膏毒肽和鬼笔毒肽检验方法及样品处理技术研究进展

综述鹅膏毒肽和鬼笔毒肽检验方法及野生菌样品处理技术研究进展。食用蘑菇中毒事件多为误食鹅膏菌毒素所致,引起急性肝毒性中毒的致命蘑菇毒素主要为鹅膏毒肽和鬼笔毒肽。蘑菇毒素检测样品处理技术主要包括蛋白沉淀法、固相萃取技术、在线净化技术、免疫亲和技术等,检测方法主要包括快速检测法、毛细管电泳质谱联用法、高效液相色谱法、液相色谱质谱联用法等。快速检测法操作简便,适用于蘑菇毒素现场检测;毛细管电泳质谱联用法有高分辨率和高灵敏度的特点;高效液相色谱法在基层实验室广泛应用于蘑菇毒素的检测分析;液相色谱质谱联用法可准确的对蘑菇毒素进行定性和定量分析。通过比较这些技术和方法,可对实验室根据相对应的样本建立简单、快速、准确检测鹅膏毒肽的方法提供重要参考依据。

某市36起毒蕈中毒事件调查

目的 :了解长沙市毒蕈中毒发生情况 ,以预防类似事件的发生。方法 :统计了湖南省从 1994～ 2 0 0 0年的 36起毒蕈中毒事件 ,并测定了主要毒蕈的毒素含量。结果 :在中毒事件中 ,共有 2 10人食用 ,2 0 5人中毒 ,中毒率为 97.6 2 % ;83人死亡 ,死亡率为 39.5 2 %。引起中毒的主要毒蕈为 :灰花纹鹅膏、白毒鹅膏、鳞柄白毒鹅膏、亚稀褶黑菇。中毒多发生在6月至 8月。结论 :中毒原因主要是食用者缺乏对毒蕈的认识、中毒后死亡率高的原因是因为毒蕈含毒素量高、中毒后就诊确诊太晚和缺乏特效解毒药物。

我国鹅膏菌新发现种——致命鹅膏(Amanita exitialis)的肽类毒素分析

采用高效液相色谱 (HPLC)技术对在广州发现的鹅膏菌新种———致命鹅膏 (Amanitaexitialis)不同组织部位的肽类毒素 (鹅膏毒肽和鬼笔毒肽 )的含量进行了分析 ,结果表明 ,致命鹅膏是一种剧毒蘑菇 ,其毒素含量相当高 ,子实体中组织部位不同 ,毒素含量以及鹅膏毒肽和鬼笔毒肽在其中的分布也不一样 ,菌盖中的毒素含量最高 ,达 81 5 2 .6μg g干重 ,菌柄的毒素含量次之 ,为 3 742 .3 μg g干重 ,菌托中的毒素含量最低 ,只有 1 1 42 .5 μg g干重 ;在菌盖、菌柄和菌托中都以鹅膏毒肽为主 ,尤其以α amanitin的相对含量最高 ,但从菌盖至菌柄到菌托 ,鬼笔毒肽尤其是Phallacidin的相对含量依次增加。

鹅膏菌多肽毒素在生命科学研究中的应用

鹅膏菌多肽毒素是野生毒磨菇产生的主要毒素，常引起人和动物的中毒与死亡。由于鹅膏毒肽对真核细胞的ＲＮＡ聚合酶Ⅱ具有专一性抑制作用以及鬼笔毒肽对肌动蛋白具有束缚作用，它们在生命科学研究中具有重要的应用价值，并对生命科学的发展产生了很大的促进作用。

鳞柄白毒伞和白毒伞的鹅膏多肽毒素测定

报道了用反相高效液相色谱法分离测定不同地区的鳞柄白毒伞和白毒伞的鹅膏多肽毒素。

一种简便、快速测定鹅膏多肽毒素的方法——抑芽法

低浓度（5-10ngml-1）的鹅膏毒肽(amatoxins) 能专一性抑制RNA聚合酶Ⅱ的活性，高浓度（为RNA聚合酶Ⅱ103-104倍的浓度）也能抑制RNA聚合酶Ⅲ的活性，因而影响细胞mRNA的转录和蛋白质的合成，抑制种子的萌发和生长。根据此原理我们建立了一种以植物种子萌发试验检测鹅膏毒肽的方法，称之为“抑芽法”（bud-inhibited assay）。该方法简便、实用、准确。操作流程：45℃干燥至恒重的鹅膏菌等子实体菌盖；水提法提取毒素并用氯仿沉淀蛋白质等；粗毒液浓度为0.025-0.05gml-1干子实体；萝卜或绿豆种子培养温度为28℃，培养时间为24-72h。绿豆芽下胚轴生长被抑制率在95%以上，可能为鹅膏毒肽含量高的剧毒鹅膏菌；当被抑制率在60-80%，可能为鹅膏肽含量较低的微毒鹅膏菌；当被抑制率在30%以下时，可能是不含鹅膏菌肽的鹅膏菌。

鹅膏毒素诱导小鼠肝细胞凋亡的DNA凝胶电泳分析

研究鹅膏毒素致肝损害的机理 ,对小白鼠腹腔注射鹅膏菌毒素 ,利用琼脂糖凝胶电泳法研究肝细胞凋亡 .结果 :注毒小鼠肝细胞出现明显的凋亡特征———DNA梯形带 (DNALadder) ,对照组小鼠的肝细胞未出现该特征 .说明受毒小鼠肝细胞被诱导凋亡 .

鹅膏肽类毒素检测方法的历史与现状

每年因误食毒蘑菇导致中毒死亡事件在世界各国都有发生,也是我国食物中毒事件中导致死亡的重要因素之一。鹅膏菌属中某些种类含有的肽类毒素是主要的致死原因,快速而有效地检测样品(包括有毒蘑菇子实体、食物剩余物、呕吐物、中毒患者血液和尿液等)中的毒素对于食物中毒的毒源鉴定和中毒后的针对性治疗具有重要意义。本文从化学显色反应、生物化学法、物理法、色谱法等4个方面对鹅膏肽类毒素检测方法的历史和研究进展进行整理和总结,并对其在我国的应用加以讨论和展望。

超高效液相色谱-质谱法测定蘑菇中5种毒肽

采用超高效液相色谱-质谱法测定蘑菇中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽等5种毒肽的含量。均质后的样品用甲醇超声提取15min,离心后,上清液置于50℃水浴中用氮气吹干,残留物用甲醇(1+9)溶液溶解并定容至3mL,再用0.2μm滤膜过滤,滤液经HLB固相萃取柱净化。以Acquity UPLC HSS T3色谱柱为固定相,以不同体积比的含5mmol·L^(-1)乙酸铵的0.1%(体积分数)甲酸溶液和甲醇混合液为流动相进行梯度洗脱,串联质谱分析中采用电喷雾正离子源和多反应监测模式。5种毒肽的质量浓度均在0.05～1.00mg·L^(-1)内与其对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为0.100～0.300mg·kg^(-1)。加标回收率为54.9%～106%,测定值的相对标准偏差(n=6)均小于7.5%。

超高效液相色谱-串联质谱法测定毒蘑菇中5种强毒性蘑菇毒素含量

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法快速检测毒蘑菇中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽和二羟鬼笔毒肽5种强毒性蘑菇毒素含量的分析方法。方法样品经甲醇/水(3:7, V:V)混合液超声提取,离心后取上清液过0.22μm微孔滤膜,C18色谱柱分离,超高效液相色谱-串联质谱仪上采用多反应监测正离子模式测定,外标法定量检测。结果蘑菇样本中检测出α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽和羧基二羟鬼笔毒肽4种蘑菇毒素,浓度分别为164、198、33、2208 mg/kg。结论本方法快速简便、准确,可用于因蘑菇毒素引起的食物中毒应急检测。

超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法快速检测尿液和血浆中鹅膏毒肽和鬼笔毒肽

建立了同时快速检测尿液和血浆中3种鹅膏毒肽和2种鬼笔毒肽的超高效液相色谱三重四极杆质谱联用分析方法。尿液样品直接进样,血浆样品经乙腈沉淀除蛋白后,在UPLCHSST3色谱柱上分离,正离子电喷雾多反应监测(MRM)模式检测,基体匹配标准外标法定量。尿液和血浆样品的线性范围分别为2～100和1～100μg/L;加标回收率分别在92.0%～108.0%和85.0%～100.0%的范围内;相对标准偏差为1.0%～22.0%和2.0%～22.0%(n=6);样品的检出限为0.2～1.0μg/L和0.1～0.5μg/L(S/N=3)。本方法灵敏,简单,快速,特异性强。

黑鹅膏菌(Amanita fuliginea)毒素的HPLC初步分离鉴定

本文报道了用反相高效液相色谱法 (HPLC)分离黑鹅膏实体内几种鹅膏毒素的结果 .采用 C1 8液相柱 ,以不同浓度的 0 .0 2 mol/L 乙酸铵—乙腈混合液为流动相 ,从黑鹅膏子实体中分离并鉴定出了 6种毒素 ,每公斤干重含量分别为 (mmol) :α-毒伞肽 :5 .1 9mmol;β-毒伞肽 :1 .1 7mmol;phalloidin:1 .5 mmol;phallacidin:0 .40 mmol;phallisin:0 .2 6 mmol;phalloin:0 .0 6

灰花纹鹅膏中三个鹅膏毒肽的分离和结构研究

从灰花纹鹅膏(Amanita fuliginea)中分离得到3个已知鹅膏毒肽类成分,利用波谱方法(1H-NMR 13C-NMR、2D-NMR和FAB-MS等)对这些结构较为复杂的环肽类成分进行了鉴定,结构分别为α-Amanitin、β-Amanitin和Amanin。

毒鹅膏菌和鹅膏肽类毒素研究进展

在我国,经常有因为误食剧毒鹅膏菌而导致中毒的报道。本章概述了鹅膏肽类毒素的化学结构与性质、中毒的症状和机理、我国产鹅膏肽类毒素的主要蘑菇种类等,为预防鹅膏菌中毒和其应用研究提供一定的科学依据。

德阳市81例蘑菇中毒事件调查及其分析

目的 :调查 2 0 0 3年 5月 2 3日～ 6月 15日在四川省德阳市发生的 81例毒蘑菇中毒事件并进行标本鉴定和毒素分析 ;方法 :现场采集标本进行形态学鉴定 ,利用高效液相色谱技术对蘑菇子实体、病人血液、病人透析液进行鹅膏肽类毒素检测 ;结果 :调查表明导致中毒的是鹅膏属中的异味鹅膏 (AmanitakotohiraensisNagasawa&Mitani) ,异味鹅膏子实体含有鹅膏肽类毒素的两种主要致死毒素 ,即α -鹅膏毒肽 (a -amanitin) ,β -鹅膏毒肽 (β -amanitin) ,其含量分别为196 4 2、 6 2 76 μg/g干重子实体 ,被检的 3个病人中有 1个病人的血液检测出含有 β -鹅膏毒肽 ,被检病人的透析液中未检测到毒素 ;结论 :异味鹅膏为有毒蘑菇 ,采食时要注意区分 ,不要误食。

鹅膏毒肽致大鼠多组织细胞DNA损伤及EPA和DHA的拮抗效应

目的研究鹅膏毒肽对大鼠多组织细胞DNA的损伤及二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)的拮抗效应。方法将30只健康成年SD大鼠随机分成3组,对照组、鹅膏毒肽染毒组、鹅膏毒肽染毒+EPA+DHA组。雌雄各半。采用腹腔注射染毒,应用单细胞凝胶电泳检测各组大鼠的外周血淋巴细胞、肝细胞、肺细胞和脑细胞DNA的损伤。结果鹅膏毒肽染毒组大鼠外周血淋巴细胞、肝细胞、肺细胞和脑细胞的彗星细胞尾长、受损DNA所占百分比(尾DNA%)均高于对照组(P<0.05),而鹅膏毒肽染毒+EPA+DHA组大鼠外周血淋巴细胞、肝细胞、肺细胞及脑细胞的彗星细胞尾长、尾DNA%与对照组相比变化不明显。结论鹅膏毒肽可致大鼠多组织细胞DNA损伤,EPA和DHA可拮抗这种损伤。