结膜吸吮线虫中间宿主冈田氏绕眼果蝇的诱捕和鉴定

为大量采集和鉴定冈田氏绕眼果蝇。特将水果 (苹果、梨等 )切碎经发酵后 ,打成包并悬挂于树干 ,吸引果蝇进行诱捕或者置入蚊帐内诱捕。自 1 989～ 2 0 0 0年 9月经过数次现场实验 ,均可大量捕获冈田氏绕眼果蝇。依据该种果蝇的形态结构和行为特征进行种的鉴定 ,尤其是雄外生殖器的特征和冈田氏绕眼果蝇腹部第 3～ 5节的背面各有一似“山”形黑褐色斑纹及足的胫节上 ,有

结膜吸吮线虫病的研究进展

本文对结膜吸吮线虫的生物学和致病等的研究进行了综述,包括:结膜吸吮线虫病的分布、该虫形态结构及生活史、致病机制、临床诊断、治疗和预防等。

结膜吸吮线虫生活史的进一步研究(英)

目的 进一步研究我国结膜吸吮线虫(Thelazia callipaeda)生活史及其中间宿主。 方法 采集自然感染的家蝇和冈田氏绕眼果蝇(Amiota okadai),检出线虫幼虫,分别接种动物;用结膜吸吮线虫初产蚴分别喂饲实验室繁殖的第二代家蝇和冈田氏绕眼果蝇。 结果 自流行区采集冈田氏绕眼果蝇493只,从其体内检获34条幼虫,接种2只家兔和1只家犬眼内,经18～44 d观察,获成虫11条。结膜吸吮线虫初产蚴在冈田氏绕眼果蝇消化道内脱鞘,钻过肠壁进入血腔,在雄蝇睾丸和雌蝇血腔膜形成虫泡囊。幼虫经2次蜕皮(需14～17 d)发育为感染性幼虫,然后经颈部移行至喙。当果蝇吸食人及犬、猫眼部分泌物时进入终宿主眼内,经2次蜕皮发育为成虫后,产出幼虫。成虫寿命可达30个月以上。 结论 我国结膜吸吮线虫的中间宿主为冈田氏绕眼果蝇。

冈田氏绕眼果蝇对结膜吸吮线虫易感性的实验研究

目的 证明河北、河南、安徽三省冈田氏绕眼果蝇对结膜吸吮线虫是否一样具易感性。方法 于 1998年～ 1999年先后对河北、河南及安徽省进行了犬感染结膜吸吮线虫调查 ,同时捕获冈田氏绕眼果蝇并分别繁殖出第二代蝇 ,以安徽的结膜吸吮线虫初产蚴进行喂饲感染 ,观察三省果蝇对该虫的易感性。结果 三省的第二代果蝇在感染后 ,于 2 2天 ,2 1天和 2 3天检查 ,河北省的 4 5只 ,阳性 2只 ,占 4 4 4 % ;河南省的 5 3只 ,阳性 3只 ,占 5 6 6 % ;安徽省的 76只 ,阳性 3只占 3 94 %。三省果蝇感染的组间差别 ,经统计学处理 (χ2 =0 19,P >0 0 5 ) ,无显著性差异。结论 证明了河北、河南。

冈田氏绕眼果蝇核型研究初报

对冈田氏绕眼果蝇的三龄幼虫的神经节细胞的染色体进行了初步报道．结果表明，冈田氏绕眼果蝇体细胞染色体数目为２ｎ＝１２．常染色体５对，为正中或中部着丝粒染色体，Ｘ为端部着丝粒染色体，Ｙ为中部着丝粒染色体，但其染色单体紧紧靠在一起．此核型在果蝇科已知的核型中是少见的．

换代犬与阻断结膜吸吮线虫病流行关系的研究

冒的为了探寻控制结膜吸吮线虫病流行的有效措施。方法采取对现症病人所在村的传染源犬、传播媒介冈田氏饶眼果蝇(A.o)感染结膜吸吮线虫(T.c)进行调查和实行换代犬后的犬及A.o感染T.c追踪调查,将前后调查结果进行比较。结果 1981～1992年安徽淮北地区连续出现T.c病人,这时对宿县芦岭、泗县大庄、五河县城郊病人所在村犬进行了检查,当时感染T.c分别占63.6％(14/22)、75.0％(12/16)和86.1％(19/231)。同时重点检查了五河城郊A.o蝇737只,阳性12只,其感染率为1.6％。其中个别A.o带有T.c感染期幼虫达20余条。于1998年即实行换代犬之后 5年,再查五河城郊及泗县大庄家犬计31只,全部阴性。此期间无新病例。同时查五河城郊A.o果蝇206只,也全部阴性。表明换代犬已失去原先犬群那种强力传染源作用。于 1998～1999年在合肥郊区一新病例居住村,对犬进行检查,犬感染T.c占79.2％(19/24),查犬时即取出虫体,为犬治病。此时进行健康教育,群众易于接受,采用换代大及拴养犬措施,预防该病。于2000年再去检查该村犬12只,阳性8只,占66.7％,犬的感染率及感染度虽较前2年有所降低,但其传染源作用的下降,明显不如其他实行群众性换代犬措施地区的效果好。结论对结膜吸吮线虫病流行区,在健康教育基础上,果断实行换代大措施,是阻断本病传播的最有效方法。

基于转录组测序的冈田绕眼果蝇aoattacin基因筛选及在昆虫细胞中表达、抑菌活性检测

通过分析冈田绕眼果蝇转录组数据得到抗菌肽 aoattacin 基因,在昆虫细胞 Sf9 中表达并检测其抑菌活性。通过转录组分析得到抗菌肽 aoattacin 基因,全基因合成其序列,构建重组 pFast-bac1-aoattacin 载体,通过转染 DH10Bac 细胞获得重组杆状病毒,转染昆虫 Sf9 细胞,以获得 P1 代病毒和通过扩增获得 P2 代病毒,并检测基因在 Sf9 细胞里的表达。通过 SDS-PAGE和 Western Blot 检测蛋白表达情况,通过最小抑菌浓度测定表达产物的抑菌活性。结果表明通过筛选转录组数据得到一个高表达aoattacin 基因,在昆虫细胞 Sf9 中成功表达,抑菌实验显示抗菌肽 Aoattacin 对受试革兰氏阳性及阴性菌等多种细菌具有抑制作用,或为一种新型广谱抗菌肽。

湖北省结膜吸吮线虫病原流行区感染情况及中间宿主的纵向调查

目的 探明湖北省结膜吸吮线虫 (Tc)的中间宿主及目前流行情况。方法 通过访问了解患者和用生理盐水冲洗法检查犬感染Tc情况 ,同时还着重调查并检查了冈田氏绕眼果蝇和家蝇 ,用Tc初产蚴对这两种蝇以喂饲法进行实验感染。结果 调查得知 1 975年冬季开展了群众性灭犬工作 ,使传染源得到控制 ,至目前无新病例出现。犬感染率由 1 975年的 95 % ,降至现在的 33 .3 %。检查家蝇 2 0 0只和冈田氏绕眼果蝇 1 35只 ,均未发现自然感染。人工感染两种蝇之后 2 0天 ,检查家蝇 1 1 2只全部阴性 ,果蝇 84只中 7只阳性 ,实验感染率为 1 0 .7%。检得感染期蚴计 2 6条 ,取其中 2 1条接种兔右眼后第 37天虫体发育成熟并产出初产蚴 ,且从右眼获得Tc成虫 3条 (雌性 2条 ,雄性 1条 )。结论 实验证明湖北省Tc的中间宿主是冈田氏绕眼果蝇 ;纵向调查证明控制养犬可防止人群感染Tc。

冈田绕眼果蝇丝氨酸蛋白酶抑制蛋白生物信息学分析

目的运用生物信息学方法预测分析冈田绕眼果蝇丝氨酸蛋白酶抑制蛋白(serine protease inhibitor,Serpin)的结构与功能。方法基于冈田绕眼果蝇转录组数据分析,筛选出高差异表达的Serpin基因;利用在线软件TMHMM、ProtScale、Signal分别预测Serpin跨膜结构域、亲/疏水性、信号肽;运用NetPhos、SOPMA、SWISS-MODEL等工具预测Serpin潜在的磷酸化位点以及二、三级结构;利用MEGA5.0软件构建其系统进化树,通过STRING数据库对其互作蛋白网络进行预测,利用KEGG数据库对Serpin进行相关通路预测分析。结果从冈田绕眼果蝇转录组数据库中筛选出1条具有完整编码区的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白序列,其基因全长1940 bp,开放阅读框为1344 bp,编码448个氨基酸;预测该基因编码蛋白相对分子质量约为49.28×10^5,为分泌蛋白;无信号肽,含有跨膜结构域,蛋白局部亲水性好,有潜在的磷酸化位点;二级结构分析显示,该蛋白无规则卷曲所占比例较高,为36.52%,三级结构所建模型准确可靠;系统进化分析显示,冈田绕眼果蝇Serpin与拟暗果蝇(Drosophila pseudoobscura)Serpin同源性100%,与黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)Serpin同源性为73.8%,表明与上述果蝇亲缘关系较近。STRING数据库中鉴定出8种蛋白与Serpin具有相互作用,KEGG数据库显示13条与Serpin相关的信号通路。结论从冈田绕眼果蝇转录组数据库中筛选出1条丝氨酸蛋白酶抑制蛋白基因,生物信息学分析其编码蛋白为分泌蛋白,含有潜在的磷酸化位点,为该蛋白的生物学功能研究及冈田绕眼果蝇的防治研究奠定了基础。

贵州省遵义市冈田绕眼果蝇的诱捕、鉴定及人工饲养

目的对遵义市结膜吸吮线虫中间宿主冈田绕眼果蝇进行诱捕、鉴定及实验室饲养。方法在遵义市郊区果园用发酵水果袋诱捕果蝇,对采集的果蝇进行分离、鉴定,将冈田绕眼果蝇在实验室人工饲养、繁殖。结果在遵义市成功诱捕到结膜吸吮线虫中间宿主冈田绕眼果蝇,具有复眼周边环形白色条带、胸背部多个褐色暗斑、足胫节3个黑色环带及腹部第3~5节背侧"山"字形黑色横带等特征性标志。使用发酵水果进行实验室饲养、繁殖,人工气候箱中温度28℃、湿度75%、光照8 h/d条件下,25~28 d可完成一代生活史发育。结论遵义市捕获到结膜吸吮线虫中间宿主冈田绕眼果蝇,实验室饲养、繁殖成功,为进一步建立结膜吸吮线虫病动物模型打下基础。

结膜吸吮线虫病流行病学研究进展

结膜吸吮线虫病是人畜共患的眼部疾病之一。该病多分布在亚洲许多国家。近年来随着全球变暖等气候变化，结膜吸吮线虫感染在国内外持续增多，流行范围不断扩大，以往欧洲的意大利和法国曾经报道过犬、猫和狐狸有感染病例，也出现了人感染病例的报告，引起研究者们的广泛关注。该文针对结膜吸吮线虫病的流行病学特征、治疗和预防等的研究进行了综述。

我国人体结膜吸吮线虫病的研究

结膜吸吮线虫病是由结膜吸吮线虫引起的人兽共患病,人体病例最早在我国北京和福建发现。除我国外,在亚洲的印度、缅甸、泰国、菲律宾、印尼、日本、朝鲜和俄罗斯的远东地区均有人体病例报道。犬等动物是结膜吸吮线虫的终宿主和保虫宿主,冈田氏绕眼果蝇是其中间宿主和传播媒介。

冈田绕眼果蝇丝氨酸蛋白酶抑制蛋白基因的克隆及组织表达水平

目的筛选并鉴定冈田绕眼果蝇转录组中的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白(serine protease inhibitor,serpin)基因,分析其基因结构及在不同发育时期的表达水平。方法利用PCR技术克隆冈田绕眼果蝇serpin基因,对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析;利用MEGA 7. 0软件对获得的serpin基因进行系统进化树分析;利用HMMTOP version2. 0和TMHMM server version 2. 0软件预测serpin基因的跨膜结构域;利用RT-q PCR检测冈田绕眼果蝇几个不同发育时期(卵、蛆、蛹、雄蝇和雌蝇)中serpin基因表达水平。结果从冈田绕眼果蝇中克隆出serpin基因,开放阅读框全长1 323 bp,编码440个氨基酸,冈田绕眼果蝇serpin基因与其他果蝇serpin基因的氨基酸序列一致性最高为76%,serpin基因序列的系统进化分析表明冈田绕眼果蝇与Drosophila arizonae的进化关系最接近。冈田绕眼果蝇serpin存在跨膜结构,跨膜螺旋区的位置是第21～43位氨基酸。冈田绕眼果蝇serpin基因在卵、蛆、蛹、雄蝇、雌蝇等不同发育阶段中表达量不同,其中卵的表达量最高。结论成功克隆出冈田绕眼果蝇serpin基因序列,其编码蛋白主要在卵、蛆和雄蝇表达量高,为进一步研究冈田绕眼果蝇serpin基因功能奠定了基础。

两种菊酯类杀虫剂对冈田绕眼果蝇成虫的室内毒力测定

目的对冈田绕眼果蝇成虫进行室内毒力测定,以获得非抗性冈田绕眼果蝇品系对菊酯类杀虫剂毒力数据。方法选用高效氯氰菊酯和溴氰菊酯两种常见菊酯杀虫剂,采用药膜法对实验室饲养未接触任何杀虫剂、羽化3～5 d未交尾的冈田绕眼果蝇雌蝇进行毒力测定。结果获得冈田绕眼果蝇对两种杀虫剂的毒力回归方程及对应半数致死浓度,高效氯氰菊酯LC50为0. 166 mg/L,溴氰菊酯LC50为0. 229 mg/L。结论高效氯氰菊酯比溴氰菊酯对冈田绕眼果蝇成蝇毒力更强。

冈田绕眼果蝇基因组序列特征研究

目的了解冈田绕眼果蝇(Amiota okadai, A. o)基因组序列特征。方法采用Genscan、Augustus、Glimmer、HMM、GeneID和SNAP等软件对冈田绕眼果蝇基因组测序数据进行从头预测;用GeMoMa软件进行同源预测,利用EVM软件对预测结果进行整合,并结合已获得的冈田绕眼果蝇RNA-seq数据对冈田绕眼果蝇基因进行结构优化、以预测其基因组全部基因并在公共数据库及专有数据库中进行注释。结果对冈田绕眼果蝇基因组进行注释及优化分析,共得到11 510个具有较高可信度的基因;在公共数据库中进行BLAST比对,98.53%的基因得到注释,其中NR数据库中注释的基因数目(占98.20%)较多,可富集到KEGG的基因数目(占43.15%)较少;通过KOG数据库分析功能基因,共得到4 967个功能基因。在3个专有数据库中(TCDB、CAZyme和PHI)中进行比对,分别注释获得了291、359和2 574个基因,其中PHI数据库中可注释的基因(2 574个)较多。结论初步揭示了冈田绕眼果蝇基因组序列特征和注释信息,共得到11 510个基因,为其基因组序列特征研究奠定了基础。

贵州遵义地区冈田绕眼果蝇野外调查及唾液腺染色体制备

目的对遵义地区的冈田绕眼果蝇进行野外调查及鉴定。方法在市郊区果园诱捕果蝇,对采集的果蝇进行分离、鉴定,并进行多线染色体的制备。结果在遵义地区成功诱捕到冈田绕眼果蝇,平均长径为3. 5 mm,雌蝇略大,雌雄蝇均比黑腹果蝇大。经鉴定:环绕复眼的白色条带、足胫节的黑色环带、胸背部的褐色暗斑、腹部背侧"山"字形黑色横带均可以作为冈田属果蝇形态鉴定的标志。对制备方法进行摸索,首次观察了冈田绕眼果蝇的多线染色体。结论通过野外调查并研究遵义地区冈田绕眼果蝇的形态学、分子标记基因鉴定及唾液腺染色体制备等,将为遵义地区冈田绕眼果蝇以及结膜吸吮线虫病的防治研究提供基础。