大肠埃希菌中质粒AmpC型β内酰胺酶基因型的检测

目的 :研究大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中AmpC型 β内酰胺酶的基因型。 方法 :收集对头孢西丁不敏感的 4 2株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌 ,用酶提取物三维试验检测AmpC酶 ;用等电聚焦电泳、接合试验、聚合酶链反应 (PCR)确定AmpC型酶的表型和基因型。结果 :16株菌高产AmpC酶 ,其中 11株同时产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs) ;这 16株菌对亚胺培南敏感 ,5株只产AmpC酶的菌对头孢吡肟敏感 ;等电聚焦电泳发现这 16株菌产生 2～ 5种酶 ,且都有一个能为氯唑西林抑制的、等电点>7.8的酶带 ;1株大肠埃希菌通过接合试验可将头孢西丁耐药性传递给受体菌 ;PCR扩增和测序证实其为质粒介导的ACT 1型AmpC酶。 结论 :2 0 0 0年我院分离的对头孢西丁不敏感的 4 2株革兰阴性杆菌中证实有 15株大肠埃希菌和 1株肺炎克雷伯菌产AmpC酶 ,并在国内首次发现 1株大肠埃希菌产ACT 1型质粒AmpC酶。

鲍曼不动杆菌ADC型AmpC β-内酰胺酶基因研究

目的了解浙江湖州解放军第98医院自临床分离的鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）中ADC型AmpC β-内酰胺酶基因（blaADC）存在状况。方法收集2000年7月-2002年12月所分离到的60株鲍曼不动杆菌，采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析blaADC基因。结果60株中有59株blaADC基因呈阳性（98．3％），序列分析表明4号菌株（原始编号HZB3944）blaADC基因为-新亚型，其核酸序列已登录GenBank（注册号EF569589）。结论鲍曼不动杆菌中blaADC基因阳性率很高，产ADC型AmpC β-内酰胺酶是本组菌株对β-内酰胺类抗生素耐药的重要原因之一。

产超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的AmpC酶肺炎克雷伯菌耐药性及基因型研究

目的 了解我院临床分离的肺炎克雷伯菌耐药性及超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的AmpC酶基因型。 方法采用Microscan微生物鉴定仪、微量肉汤稀释法,测定临床分离的肺炎克雷伯菌对21种抗菌药物的敏感 性;采用聚合酶链反应(PCR)及测序技术分析超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的AmpC酶基因型。结果 肺炎克 雷伯菌对亚胺培南全部敏感,对环丙沙星、哌拉西林／他唑巴坦、头孢他啶、头孢西丁、头孢哌酮／舒巴坦、阿莫西 林／舒巴坦、阿米卡星、头孢噻肟和头孢哌酮的耐药率分别为36.6％、38.3％、56.7％、63.4％、81.7％、86.7％、 96.6％、98.3％和98.3％,对其他药物的耐药率为100％;60株肺炎克雷伯菌全部扩增出TEM基因,有25株细 菌检出CTX-M-Ⅰ群基因,有54株细菌扩增出DHA基因,而PER和MIR(ACT-1)全部为阴性;且有21株肺炎 克雷伯菌同时携带CTX-M-Ⅰ群、DHA和TEM基因。结论我院临床分离的肺炎克雷伯菌为多重耐药菌,同时 存在CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶和DHA-1型质粒介导的AmpC酶,尚未发现PER型超广谱β-内酰胺酶和 MIR型质粒介导的AmpC酶。

肺炎克雷伯菌质粒编码的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的表型和基因型分析

目的研究肺炎克雷伯菌质粒编码的AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的表型和基因型。方法利用3-氨基苯酚硼酸及ESBLs确认试验检测AmpC酶与ESBLs表型,接合转移试验了解质粒在细菌间的传递;通过质粒的提取、纯化,PCR反应及序列分析,研究肺炎克雷伯菌质粒携带的ampC基因和ESBLs基因类型。结果从肺炎克雷伯菌中获得1条约15 kb大小的质粒,此质粒可通过接合转移方式将耐药性传递至大肠埃希菌,以从肺炎克雷伯菌及接合转移后的接合子细菌中,提取的质粒为模板,均可扩增出DHA型ampC基因及SHV型ESBLs基因,序列分析进一步证实ampC及ESBLs基因型分别为DHA-1型及SHV-12型。结论从肺炎克雷伯菌可转移的质粒中,检测到DHA-1型ampC基因及SHV-12型ESBLs基因。

肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌AmpCβ内酰胺酶的表型检测

目的比较研究临床实验室对AmpCβ内酰胺酶(AmpC酶)的表型检测方法,了解对头孢西丁不敏感的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中产生AmpC酶和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的分布情况。方法利用加与不加3-氨基苯酚硼酸(APB)的头孢他啶、头孢噻肟和头孢西丁纸片进行APB纸片增强试验检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的AmpC酶,并与Tris-EDTA纸片试验检测AmpC酶的结果进行比较。用CLSI纸片确认实验检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产生的ESBLs。结果APB纸片增强试验与Tris-EDTA纸片法检测结果完全一致。对头孢西丁不敏感的62株肺炎克雷伯菌和74株大肠埃希菌中,分别检测到产AmpC酶41株(66.1%)和33株(45.0%)。AmpC酶和ESBLs同时存在的肺炎克雷伯菌占51.6%,单产AmpC酶和单产ESBLs的肺炎克雷伯菌分别为14.5%和21.0%;而大肠埃希菌则以单产ESBLs为主,占40.5%,单产AmpC酶及同时产生AmpC酶与ESBLs的分别占20.3%和24.3%。结论APB纸片增强试验和Tris-EDTA纸片试验操作简单,应用方便,成本低廉,均可用于临床实验室检测产AmpC酶的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌。

上海发现同时产CYM-2型质粒AmpC酶及CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌

目的研究大肠埃希菌同时产质粒型头孢菌素酶(AmpC酶)及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的耐药表型及基因型特点。方法在242株大肠埃希菌中用多重聚合酶链反应(PCR)检测质粒AmpC酶;对确认为产CIT群质粒AmpC酶的菌株进行PCR、克隆、测序;接合试验证实耐药基因的可传递性;PCR及测序确定ESBL的基因;等电聚焦电泳检测细菌β-内酰胺酶等电点(PI);微量稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)。结果12株产CIT群酶细菌所携带AmpC酶基因均为blaCMY-2(PI 9.0),且均携带blaTEM-1(PI 5.4),9株同时携带blaCTX-M-14(PI8.0),无菌株携带blaSHV-like;12株产CMY-质粒AmpC酶细菌有4株接合实验阳性,经PCR证实接合子均传递了blaCMY-2,并有1株同时传递了blaCTX-M-14;多数产CMY-2型酶的细菌呈多重耐药,并有1株菌对碳青霉烯类药物耐药。结论在上海地区首次发现同时产CMY-2型质粒AmpC酶及CTX-M-14型ESBL的大肠埃希菌。

肺炎克雷伯菌中质粒AmpC酶和CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的检测及其耐药性

目的了解浙江省金华市中心医院临床分离肺炎克雷伯菌中质粒AmpC酶和CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率及其耐药性。方法采用纸片扩散法(K-B)检测肺炎克雷伯菌对18种常用抗菌药物的敏感性。按美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的ESBLs表型确证试验检测;聚合酶链反应(PCR)检测菌株中的质粒AmpC酶基因和CTX-M型ESBLs基因。并对阳性扩增产物进行测序明确其基因亚型;接合试验了解质粒AmpC酶基因和ESBLs基因的可转移性;肠杆菌科细菌基因间重复一致序列(ERIC-PCR)分析菌株的同源性。结果 101株肺炎克雷伯菌中35.6%(36/101)的菌株ESBLs表型确证试验阳性,其中77.8%(28/36)的菌株含CTX-M型ESBL基因,以CTX-M-15和CTX-M-14基因型为主。11.9%(12/101)的菌株产质粒AmpC酶基因,DNA测序证实为DHA-1型质粒AmpC酶。5.9%(6/101)的菌株同时产质粒AmpC酶和ESBLs。结论我院存在同时产质粒AmpC酶和ESBLs肺炎克雷伯菌的流行,质粒AmpC基因型别主要为DHA-1型,ESBLs基因型别主要为CTX-M-14或CTX-M-15型。耐药基因可通过接合的方式从供体菌转移至敏感细菌,临床上应加强对此类菌株的监测。

产气肠杆菌持续高产型AmpC β-内酰胺酶的产生与抗菌药物应用关系的研究

目的了解抗菌药物的应用与产气肠杆菌持续高产AmpCβ-内酰胺酶(简称AmpC酶)的关系,为临床合理用药提供试验依据。方法收集2011年9月至2012年3月分离自华东医院老年病区住院患者的产气肠杆菌临床菌株,用改良的三维试验检测产酶类型,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株的同源性,选择感染野生型和持续高产型AmpC酶的产气肠杆菌的临床病例为研究对象,进行前瞻性和回顾性研究。结果分离出产气肠杆菌19株,单产持续高产型AmpC酶的阳性率为31.58%(6/19),野生型AmpC酶的阳性率为26.32%(5/19)。呼吸道分离的痰标本中持续高产型AmpC酶菌株阳性率为83.33%,尿标本分离的阳性率为33.33%。治疗持续高产型组所用抗菌药物剂量和天数明显高于野生型组。使用头霉素类抗菌药物2周以上出现产酶类型由野生型转变为持续高产型。结论华东医院产气肠杆菌的持续高产型AmpC酶菌株阳性率高,尤以呼吸道来源的菌株更为严重,慎用或避免使用第3代及以下头孢菌素类和头霉素类抗菌药物,加强产酶类型检测及抗菌药物的合理使用。

鸡源大肠杆菌AmpC型β-内酰胺酶的分子检测

为了解河南地区AmpC型β-内酰胺酶耐药基因在产16S rRNA甲基化酶鸡大肠杆菌的流行与分布,分别设计特异性引物对2005—2008年在河南地区病鸡的病料中分离保存的158株16S rRNA甲基化酶阳性鸡大肠杆菌进行聚合酶链式反应扩增。检测结果显示,在158株产16S rRNA甲基化酶鸡大肠杆菌中,CMY-2和DHA-1检出率分别为34.8%和36.1%。提示AmpC型β-内酰胺酶耐药基因在河南地区产16S rRNA甲基化酶鸡大肠杆菌中普遍存在。

鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶基因型研究及ADC型AmpC酶基因的发现

目的了解绍兴地区鲍氏不动杆菌(ABA)临床分离株中β-内酰胺酶基因型存在状况。方法用聚合酶链反应(PCR)法检测18种β-内酰胺酶编码基因,对其中新发现的ADC型基因作核苷酸序列测定,并与GenBank已登录的相应基因进行比对。结果85株ABA中ADC阳性73株(85.9%)、OXA-23群阳性50株(58.8%)、TEM阳性23株(27.1%),其余基因均阴性;其中ADC基因氨基酸序列与GenBank已登录的基因比对有两个氨基酸不同,可能是新亚型,已被GenBank收录。结论绍兴地区ABA中普遍存在ADC型AmpC酶基因,同时存在TEM型ESBLs和OXA-23群碳青酶烯酶基因,是导致多药耐药的主要原因。

男性泌尿系统感染产超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶的大肠埃希菌基因分型研究

目的：了解本院男性泌尿系感染产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和AmpC酶大肠埃希菌（E．coli）的基因型分布。方法：收集2004年1月～2005年6月本院临床分离的尿培养阳性大肠埃希菌共187株，用CLSI／NCCLS推荐的纸片扩散法（包括筛选和确认实验）进行耐药表型检测，三维酶试验检测ESBLs和AmpC酶，PCR扩增质粒型ESBLs和ampC基因，肉汤交配法检测质粒型ampC基因的接合传递性。结果：产ESBLs大肠埃希菌检出率为24．6％（46／187）。在三维试验中，46株均产分解头孢三嗪（CRO）的β-内酰胺酶，其中3株产ESBLs和AmpC两种酶，其余43株单产ESBLs酶。在PCR扩增试验中，44株扩增出ESBLs基因blaTEM、blaCTX-M、blaOXA3型中的1型或1型以上基因片段，未扩增出blaSHV型基因片段；3株扩增出质粒介导的ampC基因，2株为CIT型，1株为DHA型。携带质粒型ampC基因的菌株均将耐药性传递给受体菌。结论：南京地区男性泌尿系感染产ESBLs大肠埃希菌以CTX-M型为主；质粒介导AmpC酶已在大肠埃希菌中出现，其耐药性能够水平传播，给临床抗感染治疗带来严重威胁。

临床分离14株高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌耐药表型研究

近年来,由于第3、4代头孢菌素、碳青霉烯类及氟喹诺酮类等超广谱抗菌药物在临床上的广泛使用,使阴沟肠杆菌在其选择性压力下不断产生耐药性,多重耐药形势日益严峻。AmpC酶的去阻遏表达和产超广谱β-内酰胺酶（EsBk）是阴沟肠杆菌对β-内酰胺类耐药的主要机制。

阴沟肠杆菌AmpC β-内酰胺酶由诱导型转变为组成型的机制

目的研究质粒传播和ampD基因突变两种机制对阴沟肠杆菌AmpC β-内酰胺酶由诱导型转变为组成型的影响作用和比率。方法收集医院感染患者标本,将诱导型阴沟肠杆菌和其转变后的组成型阴沟肠杆菌分为一组。对每组细菌的质粒ampC基因和染色质ampD基因进行扩增、测序和序列比对。结果195例感染拟似诱导型阴沟肠杆菌患者中,25例(12.82%)的菌株转变为组成型。其中,10组菌株的阳性转变为单纯的质粒传播所致,10组为单纯的ampD基因突变所致,1组既有质粒传播又存在ampD基因突变,另外4组则两者全无。12株转变的组成型阴沟肠杆菌ampD基因存在有意义的突变位点,其中7株存在移码突变,另外5株为点突变。结论阴沟肠杆菌由诱导型转变为组成型已经达到较高的比率,质粒传播和染色质突变均为引起这种转变的重要原因。质粒介导的AmpC酶已经跨种、跨区域传播,染色质ampD基因的突变率也远远高于其自然突变率,这两种机制均应在临床医疗中得到足够的重视。

圆环估计试验检测诱导型AmpC-β-内酰胺酶

目的了解肠杆菌科细菌中产诱导型AmpC-β-内酰胺酶的情况。方法 建立一种圆环估计试验(KBDA)的检测方法,以头孢西丁作为诱导剂,第三代头孢菌素(头孢他啶和头孢噻肟)作为指示剂,观察抑菌圈的大小和在诱导剂一边抑菌圈形状的改变。结果 诱导剂引起抑菌圈形状的改变被分为S、B、C、D、R型,其中诱导型产AmpC酶耐药细菌(C型和D型)占67.5％,这些细菌对庆大霉素和环丙沙星的敏感率分别为85％和93％。结论 KBDA试验能检测出传统的K-B或MIC药敏试验所不能发现的诱导型产AmpC酶对第三代头孢菌素的耐药,可加用庆大霉素或环丙沙星来提高疗效。

产超广谱-内酰胺酶和AmpC酶阴沟肠杆菌的表型检测及耐药性分析

目的:监测江汉大学附属医院临床标本中分离出的阴沟肠杆菌产超广谱-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC-内酰胺酶的状况及其耐药性,为临床治疗提供依据.方法:用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的确证实验进行ESBLs的检测,用表型筛选法进行AmpC酶的检测;用纸片扩散法进行药敏试验.结果:从75株阴沟肠杆菌中检出ESBLs阳性9株(12.0%),AmpC酶阳性11株(14.7%);产ESBLs株对亚胺培南、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、丁胺卡那等药物的耐药率较低,产AmpC酶株对亚胺培南、头孢吡肟、丁胺卡那等药物的耐药率较低.结论:本院分离的阴沟肠杆菌产ESBLs和AmpC酶情况尚好;临床治疗应在药敏试验的基础上,针对不同的产酶株,选用亚胺培南、头孢吡肟和丁胺卡那等药物.

对比黏液型肺克超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表达和毒力基因分布的相关性并对其耐药性进行分析

目的分析黏液型肺克(MT-KPN)的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表达、耐药性、毒力基因分布情况。方法收集郑州市第一人民医院2021年3月至2022年3月非重复性KPN 725株,黏液丝试验分离出123株MT-KPN,对其ESBLs表达、耐药性使用CITEK 2 Compact系统分析,毒力基因分布情况使用聚合酶链式反应(PCR)实验分析。结果肺炎克雷伯菌(KPN)检出率最高的科室是重症医学科;同一科室检出KPN类型差异较大的是重症医学科、全科医学科、神经外科,肾内科只检出cKPN;123株MT-KPN包括ESBLs阳性菌34株、ESBLs阴性菌89株。ESBLs阳性菌耐药性高达100.00%的7种药物(头孢呋辛、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、头孢西丁、氨曲南、阿莫西林/克拉维酸),ESBLs阴性菌对上述药物耐药性显著低于ESBLs阳性菌(P<0.05);妥布霉素、亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦耐药性ESBLs阳性菌>ESBLs阴性菌(P<0.05);庆大霉素、美罗培南、环丙沙星、左氧氟沙星耐药性ESBLs阳性菌>ESBLs阴性菌(P>0.05);MT-KPN的荚膜血清型基因检出率wzyK2最高;荚膜血清型基因检出率ESBLs阳性菌、ESBLs阴性菌相比差异无统计学意义(P>0.05);MT-KPN毒力基因检出率最高的是mrkD;aerobactin、iroN、wcaG检出率相比ESBLs阳性菌<ESBLs阴性菌(P<0.05);其他毒力基因检出率ESBLs阳性菌、ESBLs阴性菌相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论MT-KPN携带毒力基因检出率较高,临床需结合其耐药性和毒力基因分布情况合理用药。

肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶和AmpC酶基因检测及耐药性分析

目的了解下呼吸道感染肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和质粒AmpC酶的产生情况及耐药性,研究AmpC酶的基因型别。方法用纸片扩散确证法检测ESBLs;用酶提取三维试验检测AmpC酶,聚合酶链反应(PCR)扩增AmpC酶的基因,DNA序列测定检测AmpC酶的基因型;K-B法检测细菌耐药性。结果58株下呼吸道感染肺炎克雷伯菌中ESBLs阳性21株,AmpC酶阳性5株,其中3株ESBLs和AmpC酶均阳性,5株AmpC酶阳性菌中,4株扩增出DHA基因,经测序均为DHA-1,1株扩增出MIR基因。产酶菌株的耐药性明显高于非产酶株。结论肺炎克雷伯菌中ESBLs和AmpC酶均有较高的检出率,AmpC酶以DHA基因型为主。产ESBLs和AmpC酶是肺炎克雷伯菌耐药的主要原因。

动物源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶与头孢菌素酶基因型分析

为了解重庆地区动物源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)及头孢菌素酶(AmpC)基因型的分布,利用初筛及表型确认方法,从临床分离的192株仔猪白痢大肠杆菌、65株奶牛乳腺炎大肠杆菌、69株鸡大肠杆菌中筛选出19株产ESBLs、6株产AmpC酶大肠杆菌,并应用PCR扩增及PCR产物测序方法进行ESBLs及AmpC基因型分析。结果显示,重庆地区动物源大肠杆菌携带TEM型、CTX-M型、DHA-1型和CMY-2型基因的阳性率分别为2.15%、5.21%、0.61%和0.61%。其中,有5株同时携带2种基因。而DHA-1型基因为国内兽医临床首次检出,获得GenBank登录号为FJ386455。结果提示,重庆地区以TEM型和CTX-M型β-内酰胺酶为主,且产ESBLs与AmpC酶大肠杆菌为多重耐药菌株,需引起兽医临床的高度重视。

阴沟肠杆菌去阻遏持续高产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测

目的：去阻遏持续高产ＡｍｐＣ酶，或产生超广谱β－内酰胺酶（ＥＳＢＬｓ），或同时高表达这两类酶，是阴沟肠杆菌对多种β－内酰胺类抗生素耐药的主要机制。方法：建立了一种改良的酶提取物三维试验法，在常规ＮＣＣＬＳ纸片扩散法基础上接种大肠杆菌ＡＴＣＣ ２５９２２，在头孢西叮药敏纸片周围放射性切出琼脂小槽，待测菌的粗酶提取物在槽内扩散，与头孢西叮纸片扩散相交。结果：由于ＡｍｐＣ酶水解头孢西叮，出现抑菌圈内生长细菌，这一现象能被加入槽内的邻氯西林抑制，而ＥＳＢＬｓ不能水解头孢西叮，无此现象。因邻氯西林不能抑制ＥＳＢＬｓ活性，同样用头孢由松取代头抱西叮纸片，用邻氯西林抑制槽内ＡｍｐＣ酶，可测出 ＥＳＢＬｓ。使用该法检测分别产 ＡｍｐＣ酶、 ＥＳＢＬｓ的标准株和 ２４株临床分离多重耐药的阴沟肠杆菌。结果各种标准株检测无误，２４株阴沟肠杆菌中，１４株去阻遏持续高产ＡｍｐＣ酶试验阳性，４株产ＥＳＢＬｓ试验阳性，５株此两类酶检测均阳性，１株此两类酶检测均阴性，原因待分析。结论：对于阴沟肠杆菌，这种改良的酶提取物三维试验法能较好地鉴别持续高产 ＡｍｐＣ酶和 ＥＳＢＬ的阴沟肠杆菌，并适用于临床常规检验。