β-内酰胺酶抑制剂的稳定性与降解反应特性

β-内酰胺酶抑制剂与广谱β-内酰胺抗生素的联合使用是一种有效解决细菌耐药的策略之一。目前上市的β-内酰胺酶抑制剂按其化学结构主要包括氧青霉烯类(克拉维酸)、青霉烷砜类(舒巴坦和他唑巴坦)和二氮杂二环辛烷类化合物(阿维巴坦),本文对临床常见的β-内酰胺酶抑制剂的稳定性与降解反应特性进行综述,并结合当前药典标准中的有关物质检查项,探讨上述β-内酰胺酶抑制剂的杂质谱控制策略。

产金属β内酰胺酶大肠埃希菌感染3例

耐碳青霉烯类革兰阴性杆菌(CRGNB)的传播是一个全球性的公共卫生问题。CRGNB分离株通常具有广泛的耐药性,导致抗菌治疗选择有限,死亡率升高。在美国,碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)每年引起超过13000例感染,并导致超过1000人死亡。CRE是指至少对一种碳青霉烯类抗生素耐药或产生碳青霉烯酶的肠杆菌目细菌,分为非产碳青霉烯酶和产碳青霉烯酶两类[1]。常见的碳青霉烯酶包括肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)、新德里金属β内酰胺酶(NDM)、亚胺培南水解金属β内酰胺酶(IMP)、维罗纳整合子编码的金属β内酰胺酶(VIM)和苯唑西林酶(OXA-48)。NDM是肠杆菌科细菌中最常见的金属酶,主要见于大肠埃希菌、阴沟肠杆菌。我国碳青霉烯类耐药大肠埃希菌中产NDM比例超过70%,以NDM-1/5为主[2]。在制定抗感染方案时,除了考虑病原菌对抗菌药物的敏感性,还需要考虑抗菌药物在感染部位的组织浓度。本研究对福建医科大学附属泉州第一医院收治的产金属β内酰胺酶大肠埃希菌所致腹腔感染、尿路感染、骨髓炎的3个病例进行回顾性分析,总结其临床特征,为临床诊治提供参考。

ICU产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌血流感染诊断预测模型的构建和验证

目的:超广谱β-内酰胺酶肠杆菌(extended-spectrumβ-lactamase-producing Enterobacteriaceae,ESBL-E)已成为重症监护室(intensive care unit,ICU)血流感染的主要致病菌之一,严重影响患者的预后。探讨ICU内ESBL-E血流感染的危险因素,构建并验证其诊断预测的模型,可为临床医生在ESBL-E的早期识别、防控提供参考和建议。方法:回顾性分析2020年1月至2022年6月济宁市第一人民医院肠杆菌科细菌血流感染病例的临床资料。将2020年1月至2021年12月收治的患者作为建模组(n=255),2022年1月至6月收治的患者作为验证组(n=51),建模组根据是否产ESBLs将患者分为产ESBLs组(n=131)和非产ESBLs组(n=124),采用多因素Logistic回归分析ESBL-E感染的危险因素,并构建其诊断预测模型,通过受试者操作特征曲线、净重新分类指数、校准曲线、C指数、Brier评分、决策曲线分析和临床影响曲线评估模型的区分度、校准度和获益率,采用Bootstrap法进行内部验证,并通过验证组数据对上述模型进行外部验证。结果:多因素危险因素分析结果显示:急性生理功能和慢性健康状况评价II(acute physiology and chronic health evaluation II,APACHE II)评分(>15)、营养风险筛查2002(nutritional risk screening 2002,NRS 2002)评分(≥3)、2个月内使用过头孢菌素、2个月内使用过喹诺酮类抗生素是ICU中ESBL-E血流感染的独立危险因素。ESBL-E血流感染诊断预测模型回归方程=−1.718+APACHE II评分(>15)×0.989+NRS 2002评分(≥3)×0.989+2个月内使用过头孢菌素×0.648+2个月内使用过喹诺酮类抗生素×0.806。该模型显示出良好的预测能力,预测建模组ESBL-E感染的曲线下面积为0.831(95%CI 0.781~0.881),敏感度为79.4%,特异度为72.6%。净重新分类指数显示该模型优于单一因素模型。Hosmer-lemeshow结果显示感染诊断预测模型的拟合优度较好(P=0.482);采用Bootstrap法重复抽样1000次对该模型进行内部验证,校准曲线趋近于理想曲线,C指数为0.831,Brier评分为0.213。决策曲线分析显示该模型在阈值概率0.07~0.70范围内净获益率均大于0。临床影响曲线显示当阈值概率大于0.7后,预测模型判定为ESBL-E感染高风险人群与实际发生ESBL-E人群高度匹配,证实该预测模型临床有效率高。外部验证中应用该模型预测验证组ESBL-E感染的曲线下面积为0.807,敏感度为80.8%,特异度为80.0%,验证结果与实际一致性较高。结论:ICU患者病情越危重、营养不良、近期应用头孢菌素或喹诺酮类抗生素会增加ESBL-E血流感染的风险。基于APACHE II评分(>15)、NRS 2002评分(≥3)、2个月内使用过头孢菌素或喹诺酮类抗生素构建的诊断预测模型对ICU患者ESBL-E血流感染情况具有较好的预测价值。

某三甲医院细菌耐药健康及经济负担研究——以产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌为例

目的 细菌耐药是全世界共同面对的公共健康难题,产生了严重的健康及经济威胁。本研究从医院视角进一步明确产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌感染导致的健康及经济负担,以期为细菌耐药相关政策干预的评估与优化提供实证依据。方法 选取江西省某三甲医院出院时间在2018—2019年的170,819住院人次样本为研究对象,并设置了ESBLs阳性感染组、ESBLs阴性感染组和无感染及定植组。采用倾向得分匹配(propensity score matching, PSM)对3个组进行1:1:100匹配,并采用Cox比例风险回归模型、多状态模型分别测算ESBLs阳性感染组相对于两对照组的死亡风险比(hazard ratio, HR)和额外床日数,最终基于医院视角测算额外住院成本。结果 经匹配后纳入分析的ESBLs阳性感染组、ESBLs阴性感染组和无感染及定植组的样本分别为885、885和81,245住院人次。ESBLs阳性感染组的死亡风险是无感染及定植组的2.58倍(P<0.001),同ESBLs阴性感染者相比并未显著增大患者的死亡风险(P=0.25)。ESBLs阳性感染组相较于其无感染及定植组和ESBLs阴性感染组产生的额外床日数分别为每例3.69 d和1.92 d,对应的额外住院成本为每例6,570.12元和3,418.60元。结论 产ESBLs大肠埃希菌感染会增加患者死亡风险,延长住院时间并加重患者的经济负担,应采取措施进行防控。

枸杞槲皮素对金黄色葡萄球菌产β-内酰胺酶的抑制作用

【目的】探讨枸杞槲皮素对金黄色葡萄球菌产生的β-内酰胺酶的抑制作用机制,为临床研发β-内酰胺酶抑制剂提供基础依据。【方法】通过青霉素抑菌圈边缘试验筛选产β-内酰胺酶阳性菌株,通过药敏纸片法检测阳性菌株在32、64、128μg/mL枸杞槲皮素作用下对青霉素的敏感性变化;借助多功能酶标仪检测在32、64、128、256μg/mL枸杞槲皮素处理下青霉素含量的变化,并以此来评估枸杞槲皮素对β-内酰胺酶合成及在64、128、256μg/mL枸杞槲皮素作用下对β-内酰胺酶活性的影响。通过AutoDockTools 1.5.6软件对枸杞槲皮素与BlaZ蛋白进行分子对接,采用Discovery Studio 2019 Client软件对分子对接结果进行可视化分析。【结果】从36株金黄色葡萄球菌中共筛选出23株产β-内酰胺酶阳性菌株。药敏纸片结果表明,随着枸杞槲皮素浓度的升高,阳性菌株对青霉素的敏感性增加。多功能酶标仪检测结果表明,枸杞槲皮素可以抑制β-内酰胺酶的合成,并显著抑制β-内酰胺酶的活性(P<0.05)。分子对接结果表明,枸杞槲皮素通过与BlaZ蛋白Ω-loop区域内的保守残基Asn161以氢键结合,影响BlaZ蛋白与β-内酰胺类抗生素的结合。【结论】枸杞槲皮素可以减少β-内酰胺酶的合成,还可通过降低β-内酰胺酶的活性增强青霉素的抑菌作用,具有作为β-内酰胺酶抑制剂的潜在活性,为后续开发新型β-内酰胺酶抑制剂提供了参考依据。

β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂复方制剂点评标准的建立及应用分析

目的建立β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂复方制剂的点评标准,结合临床应用情况,分析其应用效果,促进临床合理使用β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂复方制剂。方法参照相关指南及专家共识,制订β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂复方制剂的药物利用评价(DUE)标准。通过建立的DUE标准,采用回顾性研究方法,评价2019年7—12月南华大学附属第二医院使用头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦的894例病例的用药合理性。结果894例病例中,适应证合理率为93.62%,给药剂量合理率为90.49%,用药疗程合理率为89.37%,微生物送检合理率为75.84%。结论建立的头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦DUE标准能够作为临床合理用药的重要参考,该院头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦使用基本合理。

山东省禽源产超广谱β-内酰胺酶大肠杆菌的分子流行病学分析

【目的】分析山东省禽源产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases, ESBLs)大肠杆菌的耐药情况、耐药机制、毒力基因、多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)、亲缘性和Inc型质粒,为禽临床合理使用抗菌药物防治此类细菌病提供参考。【方法】复苏2021年4月-2021年7月分离自山东省禽泄殖腔拭子样本中的38株产ESBLs大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法测定其对16种抗菌药物的敏感性,通过全基因组测序检测其携带的耐药基因、毒力基因、MLST、Inc型质粒,使用Parsnp构建菌株系统发育树。【结果】药敏试验结果显示,所有菌株对氨苄西林、头孢噻呋和头孢他啶耐药,对磺胺异噁唑(97.4%)、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑(94.7%)、四环素(89.5%)、氟苯尼考(86.8%)、大观霉素(84.2%)耐药严重。全基因组分析结果显示,38株产ESBLs大肠杆菌的blaCTX-M型中blaCTX-M-55基因携带率为34.2%,blaNDM型中blaNDM-5和blaNDM-4基因携带率分别为21.1%和10.5%,其携带大量介导临床中常用抗菌药物的耐药基因和黏附类、侵袭类、血清抗性、铁转运类毒力基因。MLST结果显示,ST10(13.2%)为产ESBLs大肠杆菌最流行的ST型,其次是ST616(10.5%)和ST746(10.5%)。系统发育树分析表明,ST10、ST616和ST746分别属于同一起源。Inc型质粒结果显示,IncFIB(AP001918)携带率最高(68.4%),其次为IncHI2(42.1%)。【结论】山东省禽源产ESBLs大肠杆菌耐药状况严峻,blaCTX-M基因是导致大肠杆菌对超广谱β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要原因,且该类菌株携带大量毒力基因,亟需对其加强监测。

β-内酰胺酶抑制剂关键中间体的微通道技术合成

为了优化二氮杂双环辛烷(DBO)类新型β-内酰胺酶抑制剂的关键中间体(2S,5R)-6-苄氧基-7-氧代-1,6-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-羧酸(Ⅰ)的合成工艺,采用微通道技术,通过对反应溶剂、温度、停留时间和碱的优化,以加快反应速率,提高反应产率。结果表明:采用连续流微通道技术,以(2S,5R)-6-苄氧基-7-氧代-1,6-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-2-羧酸苄酯(Ⅱ)为原料,在氢氧化锂的丙酮水溶液中,温度45℃,反应时间20 min,水解制备得到DBO类新型β-内酰胺酶抑制剂的关键中间体(Ⅰ),经氢谱、碳谱、高分辨质谱鉴定,产物与目标化合物一致,目标产物的收率可达95%。该微通道合成方法显著加快反应速率的同时提高了反应收率,对DBO类新型β-内酰胺酶抑制剂的工业化生产具有应用前景。

尿路感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的检测及耐药性分析

检测尿路感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌(extended-spectrum β-lactamases,产ESBLs)并分析其耐药性.选取2021年6月-2023年6月于贵州医科大学附属白云医院接受尿路感染治疗的80例患者为研究对象,采集患者中段尿样后分别进行细菌鉴定、药敏试验和产ESBLs检测,统计病原菌分布情况、大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶检测情况、对比产ESBLs与非产ESBLs对常用抗生素的耐药性,统计影响产ESBLs尿路感染的因素.结果显示,检出革兰阴性菌49株,其中大肠埃希菌占比最大,产ESBLs检出率为32.35%,且大部分产ESBLs对常见抗生素的耐药性均高于非产ESBLs.研究发现,产ESBLs是引起尿路感染的主要病原菌,需通过多种检测方式联合检测,其较高的耐药性给临床治疗带来了较大的负面影响,可根据患者实际身体状况为其选择其他药物进行治疗,需严格注意用法用量.

对比黏液型肺克超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表达和毒力基因分布的相关性并对其耐药性进行分析

目的分析黏液型肺克(MT-KPN)的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表达、耐药性、毒力基因分布情况。方法收集郑州市第一人民医院2021年3月至2022年3月非重复性KPN 725株,黏液丝试验分离出123株MT-KPN,对其ESBLs表达、耐药性使用CITEK 2 Compact系统分析,毒力基因分布情况使用聚合酶链式反应(PCR)实验分析。结果肺炎克雷伯菌(KPN)检出率最高的科室是重症医学科;同一科室检出KPN类型差异较大的是重症医学科、全科医学科、神经外科,肾内科只检出cKPN;123株MT-KPN包括ESBLs阳性菌34株、ESBLs阴性菌89株。ESBLs阳性菌耐药性高达100.00%的7种药物(头孢呋辛、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、头孢西丁、氨曲南、阿莫西林/克拉维酸),ESBLs阴性菌对上述药物耐药性显著低于ESBLs阳性菌(P<0.05);妥布霉素、亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦耐药性ESBLs阳性菌>ESBLs阴性菌(P<0.05);庆大霉素、美罗培南、环丙沙星、左氧氟沙星耐药性ESBLs阳性菌>ESBLs阴性菌(P>0.05);MT-KPN的荚膜血清型基因检出率wzyK2最高;荚膜血清型基因检出率ESBLs阳性菌、ESBLs阴性菌相比差异无统计学意义(P>0.05);MT-KPN毒力基因检出率最高的是mrkD;aerobactin、iroN、wcaG检出率相比ESBLs阳性菌<ESBLs阴性菌(P<0.05);其他毒力基因检出率ESBLs阳性菌、ESBLs阴性菌相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论MT-KPN携带毒力基因检出率较高,临床需结合其耐药性和毒力基因分布情况合理用药。

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶的产生及药敏分析

探讨超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的产生及肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌的药敏研究。方法 本项目拟选择381名门诊及住院患者(2022年1-12月),收集血、分泌物、痰液等标本,分离出大肠埃希菌214株、肺炎克雷伯菌167株(包括ESBL132株),对此数据进行比较。结果 肺炎克雷伯菌主要从痰、咽拭子、尿液和伤口分泌物中分离出来,在咽拭子和痰液中,肺炎克雷伯菌产生的ESBLs阳性率约为8.98%;而大肠埃希菌在唾液和尿液中的ESBLs产率分别为约8.41%和9.35%;肺炎克雷伯菌对亚胺培南表现出100%的强耐药性,而大肠埃希菌对亚胺培南则表现出100%敏感性;对于肺炎克雷伯菌还是大肠埃希菌,氨苄西林均显示出100%的强耐药性。结论 ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌所致,以尿、痰及咽拭子为主,亚胺培南是其治疗的第一选择,对患者有较好的疗效,为临床治疗提供重要参考。

仔猪腹泻大肠杆菌耐药性和超广谱β-内酰胺酶基因检测分析

为研究20日龄左右仔猪腹泻发病机理,检测仔猪腹泻大肠杆菌耐药性和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因种类,分析仔猪腹泻大肠杆菌耐药特性,为兽医临床更好地预防控制仔猪腹泻大肠杆菌病提供参考,从腹泻发病仔猪粪便中分离出34株致病性仔猪腹泻大肠杆菌,用10种头孢类抗生素药敏纸片对其进行药物敏感试验,并设计针对ESBLs基因TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9的特异性引物,检测34株仔猪腹泻大肠杆菌ESBLs基因TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-8、CTX-M-9存在情况。药敏试验结果表明,34株仔猪腹泻大肠杆菌对10种头孢类抗生素的敏感度不同,其中,对头孢唑啉、头孢噻吩、头孢呋辛的耐药率为68%、65%和56%,敏感率为29%、15%和35%;对头孢哌酮、氨曲南的耐药率为15%、9%,敏感率为70%、79%。ESBLs基因检测结果表明,34株仔猪腹泻大肠杆菌全部检测到TEM耐药基因,检出率为100%;检测到1株细菌具有CTX-M-9耐药基因,检出率为2.8%。由于该养猪场分离出的仔猪腹泻大肠杆菌对头孢类抗生素普遍耐药,并且全部检测出ESBLs的TEM基因,因此建议对养猪场的头孢类抗生素使用应定期进行耐药性检测和合理规范使用。

肿瘤患者感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌的变化趋势与耐药情况(2016~2021年)

目的了解肿瘤患者感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌(ESBL E.coli)和产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(ESBL K.pneumoniae)的变化趋势与耐药情况。方法选取2016年1月至2021年12月广西医科大学附属肿瘤医院1285例E.coli和641例K.pneumoniae感染的住院肿瘤患者,分析产ESBL E.coli和产ESBL K.pneumoniae的检出率及其对主要抗生素的耐药情况。结果2016年1月至2021年12月,共筛选出769株产ESBL E.coli、168株产ESBL K.pneumoniae,检出率分别为59.8%、26.2%。产ESBL E.coli主要源于妇瘤外科、胃肠外科、泌尿外科、重症医学科和肝胆外科;产ESBL K.pneumoniae主要源于重症医学科、泌尿外科、妇瘤外科、综合内科和胃肠外科。2016~2021年,产ESBL E.coli检出率分别为68.57%、74.06%、60.50%、61.38%、55.92%、42.97%,产ESBL K.pneumoniae检出率分别为24.69%、25.93%、27.78%、27.45%、33.64%、20.13%。分离出的产ESBL E.coli对阿米卡星、亚胺培南、美罗培南的耐药率分别为3.6%、3.3%、3.1%;产ESBL K.pneumoniae对阿米卡星、亚胺培南、美罗培南的耐药率分别为7.7%、6.1%、2.4%。结论2016~2021年广西医科大学附属肿瘤医院肿瘤患者产ESBL E.coli检出率总体呈下降趋势,产ESBL K.pneumoniae控制情况良好;二者对碳青霉烯类药物的耐药率均较低,但对阿米卡星、亚胺培南、美罗培南的耐药率有升高趋势,应重点监控。

携带新德里金属β-内酰胺酶的猪源大肠杆菌全基因组测序及植物提取物药物筛选

为了解大肠杆菌携带新德里金属β-内酰胺酶(New Delhi metallo-β-lactamase,NDM)NDM耐药基因情况及筛选敏感植物提取物。采用16S rRNA菌种鉴定,PCR筛查菌耐药基因,bla NDM、bla TEM和AmpC酶耐药基因的确认,全基因组测序,BLAST和MEGA软件对序列进行生物信息学分析、系统进化树分析、NDM亚型鉴定和6种植物提取物药敏药物筛选研究。结果表明,从2021年(1-12月)临床猪腹泻病例中分离鉴定的91株大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)中鉴定出1株同时携带新德里金属β-内酰胺酶NDM4、NDM5和β内酰胺酶blaTEM、AmpC酶的大肠杆菌(HN2187)。对其进行11种抗生素和6种植物提取物药物敏感性测试,结果显示HN2187菌株对其均耐药。而HN2187对血根碱、贯叶连翘提取物敏感,对黄芩、姜黄素、千里光和大蒜提取物耐药。HN2187产B类酶,携带NDM4、NDM5、bla TEM、AmpC酶耐药基因,其中bla NDM-4位于质粒pNDM4-HN2187(Plasmid B)上,bla NDM-5位于质粒pNDM5-HN2187(Plasmid A)上,bla TEM1位于质粒pTEM1-HN2187(Plasmid B)上,AmpC酶耐药基因位于染色体上,分别介导bla NDM-4、bla NDM-5、bla TEM和AmpC耐药基因,是耐药菌传播的重要载体。以上研究表明,携带NDM4和NDM5的多重耐药菌已在养殖场传播和流行,应加强该类耐药基因的流行调查、监测和新药物研究,为临床超级细菌和多重耐药菌感染的流行和防治提供理论基础。

某院产科2019~2022年产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌的分布及耐药性分析

目的产超广谱β-内酰胺酶肠杆菌(extended spectrumβ-lactamases-producing Enterobacter)已成为临床常见的耐药菌之一,在产科领域中引起了广泛关注。本研究旨在调查某院产科2019~2022年间产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrumβ-lactamase,ESBLs)肠杆菌的分布情况,并对其耐药性进行分析。方法收集某院产科2019~2022年间的临床样本数据,包括血液、尿液和分泌物等。通过常规细菌培养和鉴定方法,筛选出产ESBLs肠杆菌的菌株。采用梅里埃VITEK MS质谱仪及梅里埃VITEK 2 COMPACT仪器进行菌株鉴定,并进行药敏试验,评估耐药性。结果产科共筛选出152株产ESBLs肠杆菌菌株。这些菌株主要来源于产科患者的胎盘子母面以及伤口分泌物等样本。其中以产ESBLs大肠埃希菌为主,产ESBLs肺炎克雷伯菌次之。在β-内酰胺类抗生素中,59.9%的菌株对头孢菌素类药物显示耐药性,35.5%对类β-内酰胺酶抑制剂联合药物耐药,但是对碳青霉烯类抗生素耐药率仅为0.01%;在氟喹诺酮类抗生素中,73.4%的菌株对氟喹诺酮类药物表现出耐药性;在氨基糖苷类抗生素中,21.5%的菌株对氨基糖苷类药物耐药;在磺胺类抗生素中,53.9%的菌株对磺胺类药物耐药。结论某院产科2019~2022年产ESBLs肠杆菌的分布较为广泛,且这些菌株普遍存在耐药性。针对这种情况,临床医生应谨慎选择抗生素治疗方案,加强感染控制措施,并进行合理的药物使用与监测,以减少产ESBLs肠杆菌感染的发生和传播。

孕晚期阴道大肠埃希菌耐药性及产超广谱β-内酰胺酶菌株耐药基因分析

目的:分析孕晚期孕妇阴道大肠埃希菌耐药性及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株耐药基因检测。方法:收集2022年1-9月本院产前检查的孕晚期孕妇阴道分泌物标本,检测大肠埃希菌菌株并分析对临床常用抗生素的耐药性以及耐药基因型。结果:获得的298株孕晚期孕妇阴道大肠埃希菌,对碳青霉烯类和β-内酰胺酶抑制剂以及氨基糖苷类(阿米卡星)的敏感率达98.0%~100.0%,对青霉素、头孢菌素、磺胺类和喹诺酮类的耐药性较高,依次为72.8%~38.9%;产ESBLs阳性检出率为47.7%(142/298例),ESBLs阳性菌株对青霉素类、头孢菌素、单酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类和磺胺类等多种抗生素耐药率高于产ESBLs阴性菌株(P<0.05)。142株(47.7%)产ESBLs大肠埃希菌的耐药基因型分布为CTX-M(81.7%)、TEM-1(59.2%)、SHV(21.1%)和OXA(2.1%)。基因型组合以CTXM-15+TEM-1(21.8%)、CTXM-15+TEM-1(20.4%)和CTXM-15(13.4%)等为主,CTX-M型的产ESBL大肠埃希菌对头孢噻肟(CTX)耐药率高于TEM和SHV型,对头孢他啶(CAZ)的耐药率低于TEM和SHV型(均P<0.05),3种耐药基因型的产ESBL大肠埃希菌对其他抗生素耐药率无差异(P>0.05)。结论:孕晚期阴道大肠埃希菌的产ESBLs菌株耐药基因型以TEM-1、CTX-M-15、CTX-M-14为主,临床应慎用青霉素、头孢菌素、磺胺类和喹诺酮类药物治疗。

β-内酰胺酶抑制剂复方制剂非临床研究技术指南

内酰胺酶抑制剂复方制剂在临床上被广泛应用于治疗耐药菌所致感染,由于早期β-内酰胺酶抑制剂的抑酶谱较窄,抑酶谱更广泛的酶抑制剂在不断研发之中。与一般抗菌药物临床前研究不同,β-内酰胺酶抑制剂复方制剂的临床前研究需明确β-内酰胺类药物或酶抑制剂本身的抗菌谱与抗菌活性,尤其是明确酶抑制剂是否具有抗菌活性。需要确定合适的β-内酰胺类药物与酶抑制剂复方制剂,以及适用的不同酶型的目标病原菌。本文主要介绍新型β-内酰胺酶抑制剂复方制剂临床前研究方法。临床前研究阶段的β-内酰胺酶抑制剂复方制剂研究包括体外研究和体内研究两部分,前者主要为体外药效学研究和体外药动学/药效学(pharmacokinetic/pharmacodynamic,PK/PD)研究,常用研究方法包括β-内酰胺类药物和β-内酰胺酶抑制剂复方制剂最低抑菌浓度测定、最低杀菌浓度测定、抗生素后效应测定及时间杀菌曲线。后者主要为动物药动学研究、感染动物药效学研究和感染动物药动学/药效学研究。在动物药动学/药效学研究中,需考虑β-内酰胺类药物与酶抑制剂的相互影响。这些研究方法的应用旨在阐明β-内酰胺酶抑制剂复方制剂两组分药效学特点、药动学相似与否、PK/PD指数及其临床前PK/PD靶值,为进入临床试验阶段目标适应症及剂量选择提供依据。

2022年美国感染病学会对产超广谱β内酰胺酶肠杆菌目细菌、碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌和难治性耐药铜绿假单胞菌感染的治疗指导

抗菌药物耐药性(AMR)上升是全球性的危机。由于新建或更新临床实践指南(guidelines)需要较长的时间,无法及时解决AMR等快速进展的问题,美国感染病学会(IDSA)决定由一个小型专家组根据对文献的全面(但不一定是系统)审查,编写、制定更为狭义的临床实践指导文件(guidance),作为对综合临床实践指南的替代和补充,解决了目前指南未涵盖的难以处理的感染的具体临床问题。此类指导文件不包括证据的正式分级,至少每年在线更新一次。

多光谱方法结合理论计算探究金属β-内酰胺酶SMB-1与亚胺培南之间的相互作用

金属β-内酰胺酶(MβLs)可以水解几乎所有的β-内酰胺类抗生素,这是导致细菌感染治疗中产生耐药性的主要机制。迄今为止,由于缺乏临床批准的抑制剂,这已成为全球关注的问题。最近来自粘质沙雷氏菌的SMB-1被发现是一种新型的B3亚类MβL,它可以灭活几乎所有含β-内酰胺环的抗生素。为了明确SMB-1与β-内酰胺类抗生素的特异性分子识别和作用机制,采用内源性荧光光谱、同步荧光光谱、三维荧光光谱及分子对接方法对碳青霉烯类抗生素亚胺培南(IMIP)与金属β-内酰胺酶SMB-1之间的相互作用机制进行探究。猝灭光谱结果表明IMIP可以使SMB-1内源性荧光猝灭,且猝灭机制为动态和静态组合猝灭,其中静态猝灭为主,结合常数K a为16.11×10^(3)L·mol^(-1)(277 K),表明两者之间具有很强的结合力;根据Van’t Hoff方程得出结合过程中的热力学参数ΔG<0,ΔH=-79.65 kJ·mol^(-1),ΔS=-238.69 J·mol^(-1),说明两者的结合是由焓变和熵变共同驱动的,且氢键和范德华力为主要作用力;同步荧光结果中,随着IMIP浓度的增加,SMB-1最大发射波长均发生蓝移4.4和2.9 nm,表明Tyr和Trp残基参与IMIP与SMB-1的结合过程;三维荧光光谱中IMIP加入后,SMB-1的Peak B和Peak C强度显著降低,表明SMB-1与IMIP作用之后的微环境和构象发生了改变,与同步荧光结果一致。分子对接结果中IMIP的β-内酰胺环进入SMB-1的结合口袋,而侧链因空间位阻效应位于活性口袋的外部,表明SMB-1主要是识别IMIP的核心结构,与其R2侧链的作用较弱;与IMIP参与作用的氨基酸残基包括Ser175,Thr177,Gln157,His215和Glu217,表明这些氨基酸残基与活性部位的两个锌离子是设计具有强亲和力的SMB-1抑制剂的关键因素;结合自由能也为负值,表明两者的结合是一个自发放热的过程,与荧光结果一致。该研究提供了对SMB-1与IMIP的识别和结合的见解,可能有助于设计β-内酰胺酶新底物和开发对超级细菌具有抗性的新抗生素。