嗜粘蛋白阿克曼菌Amuc1100蛋白对高脂饲料联合链脲佐菌素干预大鼠的预防保护作用

目的构建嗜粘蛋白阿克曼菌Amuc1100蛋白的原核表达体系,分析该蛋白对高脂饲料联合链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)干预大鼠体重、血糖、肠道屏障功能及嗜粘蛋白阿克曼菌丰度的影响。方法将Amuc1100基因(ID:34174504)的扩增产物与双酶切后的pET-26b质粒载体连接。重组的表达质粒pET-26b-Amuc1100转化大肠杆菌BL21感受态细胞。选取测序正确的阳性克隆菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达。纯化后的蛋白以高低两个剂量(6和3μg/d)灌胃高脂饲料联合30 mg/kg STZ干预的大鼠8周,分析大鼠体重、血糖、肠道屏障功能相关指标(脂多糖、肿瘤坏死因子-α、二胺氧化酶、D-乳酸)及粪便中嗜粘蛋白阿克曼菌含量的变化。结果成功构建pET-26b-Amuc1100重组表达质粒,构建的克隆质粒测序结果与GenBank中Amuc1100基因的同源性为100%,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)结果显示获得的蛋白分子质量约为42 kDa。Amuc1100蛋白对高脂饲料联合STZ干预大鼠的灌胃可以在一定程度上减轻大鼠体重(P<0.05和P<0.01),改善其肠道屏障功能(P<0.01)及增加肠道中嗜粘蛋白阿克曼菌含量(P<0.01)。结论成功构建Amuc1100蛋白的原核表达系统,该蛋白对高脂饲料联合STZ干预大鼠的代谢状况有一定的调节作用。