IGF-1对PC12细胞PRNP表达及APP代谢的影响

目的·探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)中朊蛋白编码基因(PRNP)表达及淀粉样蛋白前体(APP)代谢的影响。方法·建立阿尔茨海默病(AD)细胞模型;用不同浓度的IGF-1(20、40、80 ng/mL)作用于PC12细胞24 h,采用real-time PCR检测PRNP m RNA的表达水平;Western blotting检测AKT/p AKT、ERK/p ERK蛋白的表达水平;ELISA检测细胞上清液中β-淀粉样蛋白42(Aβ42)的水平。结果·与空白对照组相比,AD模型组PRNP m RNA的表达量明显升高(P<0.01);不同浓度IGF-1处理细胞24 h后,40 ng/mL及80 ng/mL IGF-1组PRNP m RNA的表达量显著升高(P<0.01)。模型组及IGF-1各浓度组中APP蛋白的表达均无显著变化(P>0.05)。与对照组相比,AD模型组上清液中Aβ42的水平显著下降,其他各组随着IGF-1浓度的增加而降低,其中40 ng/mL及80 ng/mL IGF-1组Aβ42的表达水平降低显著(P<0.05)。与对照组相比,各组AKT/p AKT、ERK/p ERK蛋白的表达量均明显升高,且随着IGF-1剂量的增加而上升(P<0.05)。结论·IGF-1降低PRNP基因表达的同时影响APP代谢,此过程可能与PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信号通路有关。

地黄饮子含药脑脊液对受损PC12细胞β-淀粉样前体蛋白mRNA表达的干预

目的:探讨地黄饮子含药脑脊液对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致PC12细胞损伤的β-淀粉样前体蛋白(APP)mRNA的表达及地黄饮子对其的干预作用。方法:运用中药脑脊液药理学方法把PC12细胞分为空白组,模型组,西药对照组,地黄饮子脑脊液低,中,高剂量组6组,分别加入正常培养液,正常脑脊液及含药脑脊液,应用实时定量PCR法检测受损PC12细胞β-淀粉样前体蛋白mRNA表达(用2-ΔΔC t表示,Ct为阈循环值,ΔΔCt=ΔCt各干预组-ΔCt空白组,ΔCt=CtAPP-CtGAPDH)。结果:地黄饮子能明显降低PC12细胞受β-淀粉样蛋白刺激时APP的过度反应,降低APP mRNA的表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:地黄饮子脑脊液可以抑制β-淀粉样蛋白损伤对PC12细胞的损伤。

中药呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β-淀粉样前体蛋白基因表达的影响

目的探讨呆聪液对痴呆大鼠模型脑内β-淀粉样前体蛋白(β-APP)基因表达的影响。方法选用22月龄的老龄大鼠,用海人酸破坏脑基底核法,造成学习和记忆功能障碍的痴呆动物模型,通过水迷宫法和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察了呆聪液对痴呆模型大鼠学习记忆能力和脑内β-APP基因表达的影响。结果老龄痴呆模型大鼠学习记忆能力下降,脑内β-APP基因表达增强。呆聪液的3个不同剂量组与痴呆模型组比较差异有显著性(P<0.05),都能明显提高学习记忆能力,降低脑内β-APP mRNA含量,并有一定的量效关系。结论呆聪液能改善老龄痴呆大鼠的学习和记忆功能并下调β-淀粉样前体蛋白基因的表达。

胆碱能前体细胞移植入β-淀粉样前体蛋白转基因小鼠脑内的存活和迁移

目的观察新生小鼠海马原代培养的胆碱能神经前体细胞移植入淀粉样前体蛋白(amyloid precusor protein,APP)转基因小鼠脑内以后的存活和迁移状况,以探索胆碱能神经前体细胞对阿尔茨海默病的治疗前景。方法取新生24h以内增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)转基因小鼠,以原代细胞分离培养方法获得海马胆碱能神经前体细胞,以前体细胞特异性标记抗巢蛋白(Nestin)和胆碱能细胞特异性标记胆碱乙酰基转移酶(choline acetyltransferase,Ch AT)做细胞免疫组化鉴定细胞特性。细胞培养成功后,收集细胞,在小鼠脑立体定位仪的固定下,参照小鼠脑立体定位图谱对APP转基因小鼠施行脑内注射。移植1周以后灌注取移植鼠脑组织行冰冻切片,在共聚焦显微镜下通过外源细胞的绿色自发荧光观察移植细胞的存活和迁移情况。结果在移植位点,外源性绿色荧光细胞存活良好并以移植点为中心向外迁移,且呈继续迁移的趋势。结论新生小鼠海马原代细胞培养以后呈现神经前体细胞的特性并且胆碱能阳性,移植入APP转基因小鼠脑内以后,这些胆碱能阳性的神经前体细胞存活良好并呈现较强迁移能力,为进一步探索该细胞对阿尔茨海默病的治疗可能性提供了依据。

miR-185与Apba-1在大鼠脑缺血再灌注损伤的表达变化及调控关系

目的探讨miR-185与Apba-1在脑缺血再灌注损伤的表达差异及调控关系。方法将雄性SD大鼠60只随机选择10只为假手术组,其余大鼠给予线栓法构建大脑中动脉梗死再灌注模型,将存活并且按Garcia评分法进行神经功能评分差值≤3分的30只大鼠随机分成3个实验组(术后1 d组、3 d组、7 d组),每组10只。定量反转录酶-聚合酶链反应检测各组大鼠脑组织miR-185和Apba-1 mRNA的表达。蛋白免疫印迹法检测Apba-1蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测miR-185与Apba-1的调控关系。结果与假手术组比较,miR-185 mRNA在各实验组脑组织的表达量明显升高(P<0.05),且表达量随再灌注时间延长在各实验组间呈逐渐上升的趋势(P<0.05);Apba-1 mRNA在各实验组脑组织表达量明显降低(P<0.05,P<0.01);且表达量随再灌注时间延长在各实验组间呈逐渐下降的趋势(P<0.05)。并且miR-185能直接作用于Apba-1的3'非翻译区预计靶位点从而调控Apba-1的表达。结论 miR-185和Apba-1在脑缺血再灌注损伤后均存在表达差异,且miR-185可负性调控Apba-1的表达。

脑胰岛素信号在阿尔兹海默症模型小鼠渐进过程中的改变

目的:探讨阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)形成过程中脑胰岛素信号及葡萄糖转运体(glucose transporters,GLUTs)表达的改变,为AD早期诊断提供依据。方法:借助APP/PS1转基因AD模型小鼠,运用Western blot检测该模型鼠皮层和海马区域胰岛素信号通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,AD模型鼠在3月龄时,表现为脑胰岛素信号应激性激活,下游AKT/GSK3β等胰岛素信号分子磷酸化水平升高,而GLUTs此时表达变化不明显;5月龄时,该模型表现为脑胰岛素信号磷酸化水平显著下降,其下游AKT/GSK3β等信号分子磷酸化水平表达下调,同时观察到海马中GLUT3、GLUT4表达下调,AD病理性蛋白(APP)、Tau蛋白磷酸化水平显著增加。结论:胰岛素信号紊乱和葡萄糖转运体在AD形成过程中发生紊乱,且随年龄增长,具有紊乱加剧的趋势。

早老素在扩张型心肌病中的作用研究进展

早老素(presenilin,PS)是在家族性早发型阿尔茨海默病中发现的一种跨膜蛋白,主要表达于细胞膜和细胞器膜上。PS作为γ-分泌酶的重要组成部分,参与细胞内多种蛋白的调控。近年研究发现在扩张型心肌病中存在PS基因突变,并且发现PS基因对心脏的形成及心肌细胞中钙稳态的调控具有重要作用。本文综述了PS在心脏中的作用以及PS可能影响心肌细胞钙稳态的相关机制,后者包括β-淀粉样蛋白、1,4,5-三磷酸肌醇受体、Ryanodine受体、钙泵等,为家族性扩张型心肌病的研究提供参考。

黄芪总苷防治地塞米松诱导小鼠记忆障碍和对APP及β-分泌酶mRNA表达的研究

目的:探讨黄芪总苷(AST)对地塞米松(DEX)诱导小鼠记忆障碍的保护作用及对脑内淀粉样前体蛋白(APP)及其mRNA,α-分泌酶和β-分泌酶mRNA表达的影响。方法:将小鼠随机分成6组:正常对照组、模型组、AST(10,20,40 mg.kg-1)组和阳性药(人参皂苷Rg1,6.5 mg.kg-1)组。用DEX(5 mg.kg-1,ig,21 d)建立小鼠学习记忆损伤模型,各用药组于造模同时ig给予相应药物,模型组和对照组ig等容积蒸馏水。用Morris水迷宫方法测定小鼠学习记忆功能;用RT-PCR方法检测脑组织中APP、α-分泌酶和β-分泌酶mRNA表达;用免疫组织化学方法观察大脑皮质,海马CA1,CA3区APP表达。结果:与模型组比较,AST(20,40 mg.kg-1)能明显改善小鼠记忆功能(P<0.05,P<0.01);降低脑组织内APP,β-分泌酶mRNA的表达(P<0.05),升高脑组织内α-分泌酶mRNA的表达(P<0.05);减少APP在大脑皮质及海马CA1区的表达(P<0.05)。结论:AST能改善DEX诱导的小鼠记忆障碍,其机制可能与抑制脑内APP及其mRNA、β-分泌酶mRNA表达,促进α-分泌酶mRNA表达有关。

姜黄素调控β-分泌酶基因表达抑制老年性痴呆大鼠Aβ蛋白生成的机制

目的:探讨姜黄素对老年性痴呆(Alzhelmer's disease,AD)大鼠海马区β-淀粉样前体蛋白(β-amyloid protein precursor,β-APP)和β-分泌酶(amyloidβsecretase1,BACE1)基因表达的影响。方法:采用Aβ1-40右侧海马区注射,制备AD大鼠模型,腹腔注射姜黄素给予治疗,采用ELISA法检测血清与海马组织中Aβ的含量,免疫组织化学法检测海马区神经元中β-APP蛋白表达,RT-PCR法检测海马组织中β-APP和BACE1 mRNA表达。结果:造模后大鼠血清和脑组织海马中Aβ含量显著升高,脑组织海马区神经元中β-APP蛋白表达、β-APP mRNA和BACE1 mRNA表达明显增加。与模型组比较,姜黄素高剂量组、低剂量组β-APP蛋白表达、β-APP mRNA和BACE1 mRNA明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素可通过对BACE1 mRNA调控作用,阻断β-APP裂解进程,抑制Aβ在脑内生成与沉积,从而减少Aβ对神经元的毒性作用。

胆固醇转运抑制剂U18666A对星形胶质细胞自噬-溶酶体的影响

目的观察胆固醇转运抑制剂U18666A(UA)对星形胶质细胞自噬-溶酶体活性的影响。方法用5μg·mL-1UA作用于原代培养的星形胶质细胞12,24和48 h,用Western blot检测自噬标志蛋白LC3和溶酶体标志蛋白LAMP1的表达,用免疫荧光检测微管相关蛋白1A/1B轻链3(LC3)及溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)与淀粉样前体蛋白(APP)的定位表达。结果5μg·mL-1UA能增加星型胶质细胞LC3和LAMP1的蛋白表达,且LC3及LAMP1与APP在细胞内共定位表达。结论UA可能通过激活自噬-溶酶体系统活性,增强APP的代谢,促进β淀粉样蛋白的生成。

淀粉样蛋白前体695转基因小鼠骨髓间质干细胞的神经分化与Notchl信号调节

目的探讨Notchl信号通路在淀粉样蛋白前体（APP）695转基因小鼠骨髓间质干细胞的神经分化中的作用。方法实验分为APP695阳性组（APP＋组）和APP阴性对照组（APP-），体外培养两组小鼠骨髓间质干细胞（MSCs），采用p巯基乙醇诱导骨髓间质于细胞分化为神经细胞，MTT法检测诱导后两组细胞存活率，免疫组织化学法、RT—PCR法、Westernblot法检测神经元烯醇化酶（NSE）、神经微管结合蛋白（MAP-2）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、A0蛋白的表达变化，及诱导前、诱导5d后两组细胞中Notchl表达变化，酶联免疫吸附法（ELISA）法检测两组细胞分化后A8分泌量。结果两组MSCs诱导5d后均可表达NSE、MAP-2，以APP＋组更为明显（P〈0．05），且APP＋组可表达GFAP，MTT检测诱导5d后APP＋组存活率较APP-组低（P〈0．05）；诱导5d后APP＋组Aβ表达较APP-组高（P〈0．05），Aβ分泌量较APP-组高（P〈0．05）；APP＋组诱导前、诱导5d后细胞中Notchl表达均较APP组表达低（P〈0．05），两组细胞诱导5d后细胞中Notchl较诱导前均明显减少（P〈0．01）。结论APP695转基因小鼠MSCs更易于分化为神经细胞和胶质细胞，Aβ可能通过抑制Notchl信号通路在APP转基因小鼠MSCs神经分化中发挥重要调节作用。

“益肾调督”电针法对阿尔茨海默病小鼠大脑海马老年斑形成的影响

目的:观察"益肾调督"电针法对APP/PS 1双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠海马区老年斑(SP)及其相关蛋白表达的影响,探讨电针改善AD的机制。方法:APP/PS 1双转基因AD小鼠随机分为模型组、电针两疗程组和电针三疗程组,每组6只;6只雄性野生型小鼠为对照组。给予各电针组小鼠"百会"和双侧"肾俞"电针治疗,每天1次,7d为1个疗程,分别进行2个或3个疗程。Morris水迷宫实验观察各组小鼠记忆和空间探索能力,免疫组化法检测海马区SP的表达情况,Western blot法检测海马区淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶1(BACE 1)和胰岛素降解酶(IDE)的表达水平。结果:与对照组相比,模型组小鼠的逃避潜伏期和搜索路径均明显增加(P<0.01,P<0.05),穿越原平台的次数明显减少(P<0.01);与模型组相比,两治疗组小鼠的第5天逃避潜伏期和第4天、第5天搜索路径均明显缩短(P<0.01),穿越原平台的次数明显增加(P<0.01);与电针两疗程组相比,电针三疗程组的第5天逃避潜伏期和第4天、第5天搜索路径也明显缩短(P<0.05,P<0.01),穿越原平台的次数明显增加(P<0.05)。对照组小鼠海马区无SP阳性斑块;模型组SP数目较对照组明显增加(P<0.01);与模型组相比,两治疗组海马区的SP数目均明显减少(P<0.01);与电针两疗程组相比,电针三疗程组SP数目明显减少(P<0.01)。模型组小鼠海马区APP、BACE 1表达水平明显高于对照组(P<0.01),IDE表达水平明显低于对照组(P<0.01);两治疗组海马区APP、BACE 1表达水平明显低于模型组(P<0.01),IDE表达水平明显高于模型组(P<0.01);电针三疗程组海马区APP、BACE 1表达水平明显低于电针两疗程组(P<0.01,P<0.05),IDE表达水平明显高于电针两疗程组(P<0.05)。结论:"益肾调督"电针法可降低AD小鼠海马区APP、BACE 1表达,提高IDE的表达,从而减少海马区SP的沉积,改善其学习记忆和空间探索能力。