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三物白散对Ana-1巨噬细胞免疫功能的影响 被引量:4
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作者 王毛妮 周春祥 孙秀娟 《河南中医》 2008年第1期31-33,共3页
目的:探讨三物白散(SWB)对巨噬细胞免疫功能的影响。方法:选用小鼠Ana-1巨噬细胞株,观察SWB对Ana-1细胞增殖、吞噬、趋化能力的影响,用放射免疫检测法检测SWB作用后的Ana-1细胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达。结果:细胞增值实验,SW... 目的:探讨三物白散(SWB)对巨噬细胞免疫功能的影响。方法:选用小鼠Ana-1巨噬细胞株,观察SWB对Ana-1细胞增殖、吞噬、趋化能力的影响,用放射免疫检测法检测SWB作用后的Ana-1细胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达。结果:细胞增值实验,SWB中小剂量组与空白组相比差异显著(P<0.05);吞噬实验,SWB大剂量组与空白组相比差异显著(P<0.05),并呈现剂量依赖关系;趋化实验,SWB各剂量组与空白组相比差异显著,呈现剂量依赖关系;与空白对照组相比,SWB各剂量组IL-1β水平升高,大剂量组IL-1β表达差异显著(P<0.05);IL-6、TNF-α的表达无显著差异。结论:SWB体外可显著活化巨噬细胞,促进增殖、提高吞噬能力,上调Th1型细胞因子IL-1β的表达。 展开更多
关键词 三物白散 ana-1巨噬细胞 细胞免疫功能 小鼠
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Ana-1巨噬细胞分泌exosomes的提取及免疫鉴定
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作者 王桂花 周向梅 +5 位作者 尹晓敏 杨利锋 周海云 张交儿 刘爱林 赵德明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期84-85,88,共3页
目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exo-somes。方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exosomes。样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70... 目的:为了证实Ana-1巨噬细胞是否分泌exo-somes。方法:采用分级离心的方法,从Ana-1巨噬细胞培养的上清液提取exosomes。样品用醋酸双氧铀负染,在透射电镜下观察其形态、大小;并分别用Flotillin多克隆抗体、Tsg101单克隆抗体(mAb)、Hsp70mAb和calnexin多克隆抗体,通过免疫印迹法和免疫金标记法进行免疫鉴定。结果:电镜下可以观察到提取的exosomes平均大小为50~100nm。免疫印迹法分析结果显示,提取的exosomes表达Flotillin、Tsg101和Hsp70蛋白,相对分子质量(Mr)分别为45000、43000和70000,但不表达calnexin蛋白;免疫电镜分析显示ex-osomes膜表面和内部有明显的金颗粒。结论:Ana-1巨噬细胞分泌exosomes。 展开更多
关键词 ana-1巨噬细胞 小囊泡 免疫胶体金 免疫印迹
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清透邪热方对甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达的影响 被引量:4
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作者 冯丽谦 杨丽丽 +2 位作者 李明真 孙雨 刘涛 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期289-294,共6页
目的研究清透邪热方体外抗甲型H1N1流感病毒效应机制。方法将清透邪热方制备成0.388、0.194、0.097、0.0485、0.024 25mg/mL不同浓度,用H1N1甲型流感病毒感染小鼠Ana-1巨噬细胞,给予不同浓度清透邪热方及达菲进行干预,检测肿瘤坏死因子... 目的研究清透邪热方体外抗甲型H1N1流感病毒效应机制。方法将清透邪热方制备成0.388、0.194、0.097、0.0485、0.024 25mg/mL不同浓度,用H1N1甲型流感病毒感染小鼠Ana-1巨噬细胞,给予不同浓度清透邪热方及达菲进行干预,检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)和白细胞介素-6(IL-6)表达,Toll样受体7(TLR7)及其下游髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达。结果清透邪热方能够抑制甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TNF-α、IP-10、IL-6的表达;其中清透邪热方0.024 25mg/mL组降低H1N1病毒感染组TNF-α、IL-6显著(P<0.01);清透邪热方0.097mg/mL组降低IP-10显著(P<0.01)。清透邪热方能够抑制H1N1流感病毒感染后Ana-1细胞后TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达升高;其中清透邪热方0.048 5mg/mL组抑制H1N1病毒感染组TLR-7mRNA、MyD88mRNA表达显著(P<0.01);清透邪热方0.024 25mg/mL组抑制H1N1病毒感染组NF-κB mRNA表达显著(P<0.01);清透邪热方0.048 5mg/mL组抑制H1N1病毒感染组TLR-7蛋白表达升高显著(P<0.01),清透邪热方0.388mg/mL组抑制H1N1病毒感染组MyD88蛋白、NF-κB蛋白表达显著(P<0.01)。结论清透邪热方通过抑制甲型H1N1流感病毒感染Ana-1细胞TLR-7、MyD88及NF-κB mRNA及蛋白表达升高,减少TNF-α、IP-10和IL-6表达,起到抗病毒作用。 展开更多
关键词 清透邪热方 甲型H1N1流感病毒 小鼠ana-1巨噬细胞 TLR-7/MyD88/NF-κB通路
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环孢素A对Th1细胞转录因子T-bet的影响
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作者 樊海波 张秀莲 +4 位作者 张伟华 范星火 陈玮 侯素敏 刘晨 《山西医药杂志(上半月)》 CAS 2008年第3期214-216,共3页
目的研究环孢素A(CsA)对小鼠骨髓型正常巨噬细胞株Ana-1诱导Th1细胞转录因子T-bet的影响,探讨CsA在再生障碍性贫血(再障)治疗中的免疫抑制作用。方法①反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ana-1细胞株培养上清作用后正常小鼠外周血单个... 目的研究环孢素A(CsA)对小鼠骨髓型正常巨噬细胞株Ana-1诱导Th1细胞转录因子T-bet的影响,探讨CsA在再生障碍性贫血(再障)治疗中的免疫抑制作用。方法①反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ana-1细胞株培养上清作用后正常小鼠外周血单个核细胞(PBMC)T-betmRNA的表达。②RT-PCR方法检测Ana-1细胞株培养上清加CsA作用后正常小鼠PBMCT-betmRNA的表达。结果①加入Ana-1细胞株培养上清后,T-betmRNA的表达水平为1.54±0.03,较对照组(1.03±0.06)增多(P<0.05);②加入Ana-1细胞株培养上清和CsA后,T-betmRNA的表达为0.66±0.02,较加入Ana-1细胞株培养上清组(1.54±0.03)减少(P<0.05)。结论CsA抑制巨噬细胞诱导T-bet的生成,可能是其在再障治疗中发挥免疫抑制作用的途径之一。 展开更多
关键词 亲环素A 贫血 再生障碍性 小鼠 细胞ana-1
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Induction of apoptosis and change of bcl-2 expression in macrophage Ana-1 cells by all-trans retinoic acid
5
作者 YIN DE LING XIU HAI REN +5 位作者 SHI ZHONG BU YA LAN WU LI ZHEN JIANG ZHI JIANG WU WEI HU GANG PEI (Shanghai Institute of Cell Biology, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China)(Correspondence: Dr. G. Pei, Shanghai Institute of Cell Biology Chine 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1996年第2期137-144,共8页
Macrophage cells play an important role in the initiation and regulation of the immune response. All-trans retinoic acid (ATRA) and its natural and synthetic analogs (retinoids) affect a large number of biological pro... Macrophage cells play an important role in the initiation and regulation of the immune response. All-trans retinoic acid (ATRA) and its natural and synthetic analogs (retinoids) affect a large number of biological processes.Recently , retinoids have been shown promise in the therapy and prevention of various cancers. However, many interesting questions related to the activities of retinoids remain to be answered: (Ⅰ) Molecular mechanisms by which retinoids exert their effects; (Ⅱ) why the clinical uses of retinoids give undesirable side effects of varying severity with a higher freqllency of blood system symptoms; (Ⅲ)little is known for its impacts on macrophage cells etc. We set up this experiment, therefore, to examine the apoptosis of ATRA on macrophage Ana-1 cell line. Apoptosis of the cells was quantitated, after staining cells with propidium iodide (PI), by both accounting nuclear condensation and flow cytometry. When the cells were treated with ATRA at or higher than 1 μM for more than 24 h, significant amount of the apoptotic cells was observed. Induction of apoptosis of Ana-1 cells by ATRA was in time- and dose-dependent manners, exhibiting the similar pattern as the apoptosis induced by actinomycin D (ACTD). ATRA treatment of Ana-1 cells also caused the changes of the mRNA levels of apoptosis-associated gene bcl-2, as detected by Northern blot analysis. The temporal changes of bcl-2 expression by ATRA was also parallel to that by ACTD. In conclusion,ATRA can induce apoptosis in macrophage cells, which may be helpful in understanding of immunological functions retinoids. 展开更多
关键词 All-trans retinoic acid APOPTOSIS ana-1 cells BCL-2
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结核分枝杆菌低氧反应蛋白的原核表达及对巨噬细胞ANA-1功能的影响 被引量:2
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作者 杨雨婷 李玉洁 杨国平 《微生物学免疫学进展》 CAS 2021年第5期7-13,共7页
目的原核表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)Rv2626c基因编码的低氧反应蛋白(hypoxic response protein 1, HRP1),并分析该蛋白对小鼠巨噬细胞ANA-1(简称ANA-1细胞)功能的影响及作用机理。方法将Rv2626c基因克隆至表达... 目的原核表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)Rv2626c基因编码的低氧反应蛋白(hypoxic response protein 1, HRP1),并分析该蛋白对小鼠巨噬细胞ANA-1(简称ANA-1细胞)功能的影响及作用机理。方法将Rv2626c基因克隆至表达载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-Rv2626c,转入表达菌株BL21,诱导表达HRP1,经亲和层析法纯化和Western blot鉴定。使其作用于ANA-1细胞,用CCK8法检测ANA-1细胞的增殖活力,流式细胞术检测ANA-1细胞凋亡情况,Griess法及ELISA法分别检测一氧化氮(nitric oxide, NO)产生水平和肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)的分泌情况,同时采用核因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)抑制剂Bay 11-7082、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPK)抑制剂U0126、SB 203580预处理ANA-1细胞后,检测NO、TNF-α、IL-1β变化情况。结果成功构建重组表达质粒pET-28a-Rv2626c,获得目的蛋白HRP1。与空白组相比,不同浓度的HRP1作用于ANA-1细胞后,细胞增殖活力未受抑制(P<0.05),凋亡率无明显差异,但培养细胞上清液中的NO、TNF-α及IL-1β含量均显著增加(P<0.05);若用Bay 11-7082及U0126预处理的ANA-1细胞,其NO及TNF-α的分泌量明显减少(P<0.001)。结论 HRP1对ANA-1细胞无细胞毒性,并可通过激活ANA-1细胞内NF-κB及MAPK信号通路促进其分泌具有抗菌效应的NO及TNF-α,增强其固有免疫效应,可作为结核疫苗候选优势抗原。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 低氧反应蛋白 细胞ana-1 细胞因子
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鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的原核表达及其对巨噬细胞凋亡的影响 被引量:1
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作者 翟凯新 刘丽婷 +3 位作者 陈晓文 陈越 高婧华 吴利先 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第11期1257-1261,共5页
目的构建鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的重组质粒并诱导表达和纯化,观察其对Ana-1系巨噬细胞凋亡的影响。方法在GenBank中查找到鸟分枝杆菌编码PPE25-MAV蛋白的MAV-2928基因序列,合成全基因并构建质粒。将质粒亚克隆至表达载体pET-32a(+)上... 目的构建鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的重组质粒并诱导表达和纯化,观察其对Ana-1系巨噬细胞凋亡的影响。方法在GenBank中查找到鸟分枝杆菌编码PPE25-MAV蛋白的MAV-2928基因序列,合成全基因并构建质粒。将质粒亚克隆至表达载体pET-32a(+)上,构建重组表达质粒pET-32a-ppe25,转入感受态细胞BL21(DE3)后,通过IPTG诱导表达融合蛋白PPE25-MAV。用Ni Resin FF纯化蛋白,并作用于巨噬系Ana-1细胞,流式细胞术(FCM)检测巨噬细胞凋亡率并且分析其变化。结果鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白表达载体构建成功,转化至BL21(DE3)后经IPTG诱导表达约59ku的蛋白,与预期大小相符;Western blot检测该蛋白能被His抗体识别。用纯化的PPE25-MAV蛋白作用小鼠巨噬系Ana-1细胞,与空白对照组相比,作用2h后细胞的早期凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),细胞的晚期凋亡率和总凋亡率在0.5μg/ml与1μg/ml时均低于空白组(P<0.05),2μg/ml与5μg/ml的凋亡率与对照组比较差异无统计学意义;作用10h细胞的早期凋亡率仅在5μg/ml时升高(P<0.05),0.5、1和2μg/ml剂量组差异无统计学意义(P>0.05),细胞晚期凋亡率和总凋亡率在2μg/ml和5μg/ml时显著降低(P<0.05),0.5μg/ml和1μg/ml组凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组质粒诱导表达的PPE25-MAV蛋白存在于上清和包涵体中,但主要以包涵体形式表达。纯化的PPE25-MAV蛋白对巨噬细胞凋亡有抑制作用,且主要作用于巨噬细胞的晚期凋亡阶段。 展开更多
关键词 鸟分枝杆菌 PPE25-MAV蛋白 ana-1巨噬细胞 细胞凋亡
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