新型降钙素的基因合成与克隆表达

借助计算机辅助设计了一种新的人降钙素类似物 (新型降钙素 )。根据密码子偏爱性原理及基因工程操作原则设计了它的基因 ,运用化学法和酶法相结合的技术合成了该基因 ,并克隆到质粒 pUC19中 ,DNA测序验证正确。该基因被克隆到融合型表达载体pGEX 2T中 ,重组融合型表达载体nCT/ pGEX 2T转化E coliBL2 1,培养表达 ,SDS PAGE分析可见Mr 约 310 0 0的融合蛋白带 ,融合蛋白占细胞内总蛋白的 34%。WesternBlotting分析证明该新型降钙素获得表达。

新型降钙素基因工程菌高表达发酵条件的研究

对新型降钙素基因工程菌 n CT/p GEX-2 T/E.coli BL2 1高表达发酵条件进行了优化研究。研究表明重组工程菌遗传性状稳定 ,采用 LB培养基、1 %接种量 ,当菌体浓度到达 A6 0 0 nm 0 .6时 ,添加诱导剂 IPTG至终浓度为 0 .l mmol/L,37℃培养 4 h,可使含新型降钙素的融合蛋白高效表达 ,融合蛋白占菌体总蛋白的 35%。2 0 L发酵罐中采用上述条件发酵培养 ,融合蛋白亦可高效表达 ( 32 % ) ,其菌体密度是摇瓶培养发酵的两倍。Western-blotting试验表明融合蛋白中含有新型降钙素 。

基因工程制备重组人降钙素类似物

构建融合表达人降钙素类似物的工程菌 ,然后纯化 GST- h CTa- Leu融合蛋白 ,凝血酶酶切后 ,再经离子交换层析、脱盐 ,获得纯度大于 90 %的 h CTa前体 .对 h CTa前体的 C末端进行修饰 ,得线形 h CTa- NH2 ,再通过复性 ,获得了具有与天然人降钙素活性相当的 h CTa.

重组降钙素研究进展

应用基因工程法可以制备出重组降钙素类似物。通过这种方法可得到生物活性高、免疫原性低的降钙素。该文综述了用基因工程法制备降钙素的研究进展。