穿心莲种质产量性状与药用成分分析

穿心莲(Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees)是我国传统的中药材,应用广泛。为了评价穿心莲种质的遗传多样性,收集了广东湛江和广西贵港两个主要产区的种质材料,对其产量性状和主要药用成分进行调查和分析。结果表明,同一来源穿心莲材料的产量性状及药用成分均呈现较大变异。产量性状中,单株生物量变幅最大为100~624 g,其余从大到小依次为叶片质量、叶面积、一次分枝数、生育期、株高。药用成分性状中,穿心莲内酯变幅最大为1.5385~6.5944 mg/g,其余依次为新穿心莲内酯、14-去氧穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯。供试材料分析发现种质纯和度差,具有显著的遗传多样性,为材料鉴选及遗传育种提供了丰富的材料基础。此外,相关性分析表明,穿心莲主要产量性状与主要药用成分含量间呈显著负相关。材料选育时需要注重产量性状和药用成分之间的平衡。最后,进一步按产量性状及药用成分指标进行聚类分析,筛选重要材料。本研究结果可为穿心莲的种质资源保护及良种选育提供育种研究材料基础。

穿心莲二萜内酯类成分的高效薄层色谱指纹图谱研究

目的:建立穿心莲二萜内酯类成分的高效薄层荧光色谱指纹图谱,并对不同种植基地穿心莲、不同部位及市售饮片等进行分析比较。方法:应用硅胶GF254高效预制薄层板(20 cm×10 cm),以氯仿-甲苯-甲醇(80∶10∶15)为展开剂,于相对湿度42%左右展开,5%硫酸乙醇溶液喷雾显色,105℃加热至斑点显色清晰,置紫外光灯(366 nm)下检视。将所得薄层荧光色谱指纹图谱经指纹图谱系统解决方案软件(CHROMA 1.5)生成共有模式。结果:穿心莲二萜内酯类成分指纹图谱由9个色谱峰(或特征荧光条斑)组成,并指认了其中的穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯及新穿心莲内酯3个峰。51批不同穿心莲药材样品的HPTLC考察结果显示,不同种植基地、不同商品穿心莲药材以及穿心莲不同部位等在二萜内酯类成分方面区别较大;干燥处理对穿心莲内酯和穿心莲总内酯含量变化的影响差别显著。结论:该方法简便、快速,可有效地对穿心莲药材进行鉴别及质量评价。

HPLC法测定穿心莲总内酯固体脂质纳米粒载药量与包封率

目的建立HPLC法同时测定穿心莲总内酯固体脂质纳米粒中穿心莲内酯、新穿心莲内酯、14-去氧穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的载药量和包封率的方法。方法采用Kromasil C18(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水(30∶70);体积流量1.0 mL/min;检测波长λ分别为226、2102、52 nm;柱温35℃。采用超滤法分离穿心莲总内酯固体脂质纳米粒与游离药物测定包封率。结果穿心莲内酯、新穿心莲内酯、14-去氧穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯分离良好,质量浓度分别在1.606～200.8μg/mL1、.648～206.0μg/mL、1.590～198.4μg/mL、1.640～205.6μg/mL范围内与色谱峰面积均呈良好的线性关系,平均回收率分别为(100.98±1.88)%(、101.32±1.76)%(、100.80±1.64)%和(100.30±2.07)%,精密度和稳定性均较好。超滤法回收率分别为(102.36±1.12)%、(100.12±0.76)%、(99.00±3.67)%、(100.26±2.54)%。4种成分的重复性实验的RSD均小于2.20%。3批穿心莲总内酯固体脂质纳米粒中穿心莲内酯、新穿心莲内酯、14-去氧穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的包封率分别为(80.04±0.69)%(、94.94±3.87)%(、92.17±1.60)%和(97.65±0.68)%,载药量分别为(4.11±0.04)%(、0.56±0.02)%(、0.15±0.00)%和(0.18±0.00)%。结论 HPLC测定方法准确可靠、简单快速,可用于穿心莲总内酯固体脂质纳米粒的载药量与包封率的测定。

不同产地穿心莲药材色谱指纹图谱的比较研究

目的:建立穿心莲药材的HPLC指纹图谱,为其全面质量评价及控制提供参考。方法:采用HPLC/UV法,测定了10个不同产地的23批穿心莲药材样品。色谱条件:Shimadzu ODS柱,流动相为0.1%甲酸乙腈与0.2%甲酸,梯度洗脱,流速1.0 ml/min,检测波长254 nm,柱温为室温。应用聚类分析、非线性映射和相似度计算等方法对所得指纹图谱进行了定性、定量评价。结果:建立了操作简单、分离度佳、重现性好的穿心莲药材指纹图谱检测方法,不同产地药材指纹图谱具有一定差异。结论:聚类分析、非线性映射和相似度计算等方法可实现对指纹图谱的定性、定量评价,所建立的色谱指纹图谱可用于穿心莲药材的鉴别及质量评价。

穿心莲生理特性及盐胁迫对其影响研究

目的:研究穿心莲的生理特性及盐胁迫的影响。方法:用LI-6400光合仪等便携式仪器及试剂盒等研究穿心莲的光合、蒸腾、酶活等生理特性,用不同浓度NaCl对穿心莲进行盐胁迫处理,并测定各生理指标的变化。结果:穿心莲净光合速率(Pn)与气孔导度(Gs)日变化呈双峰曲线,蒸腾速率(Tr)及气孔限制值(Ls)日变化呈单峰曲线,胞间CO2浓度(Ci)及水分利用率(WUE)日变化呈单谷曲线。盐胁处理下,随着浓度的增加,Pn、Tr、Ci、Gs、WUE均下降,Ls呈上升趋势,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶酶活性均先升后降,丙二醛含量、脯氨酸含量呈上升趋势。结论:穿心莲为阳生植物,存在明显的"光合午休"现象,具一定耐盐性,应向阳种植,并可对其进行适当的遮荫处理,以提高其质量。

穿心莲实时定量PCR分析中内参基因的选择

【目的】选择合适的内参基因用于穿心莲实时定量PCR分析中的校正。【方法】以穿心莲根、茎、幼叶、花、萌发种子和成熟叶片为实验材料,应用实时定量PCR技术分析18S rRNA、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、肌动蛋白(Actin)和泛素连接酶(UBC)4个常用内参基因在穿心莲不同组织中的表达水平,利用GeNorm和NormFinder软件进行数据分析。【结果】4个候选内参基因在穿心莲不同组织中表达的稳定性各异,其中UBC的表达水平最为稳定。【结论】可以选择UBC作为内参基因,用于穿心莲不同组织中基因表达水平的校正。

穿心莲对正常小鼠和高血糖小鼠血糖影响的实验研究

目的研究穿心莲水煮液对小鼠血糖的影响。方法分别对正常、肾上腺素诱导高血糖和四氧嘧啶糖尿病小鼠,以5,10,20 g.kg-1穿心莲灌胃给药,对照组给予相同体积纯化水,观察给药后的降血糖作用。结果穿心莲连续给药7d,能明显降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖,与纯化水对照组比较,差异有极显著性(P<0.01)。对正常小鼠血糖无影响;亦不能抑制肾上腺素诱导的小鼠血糖升高。结论实验结果初步表明穿心莲水煮液有降血糖的作用。

穿心莲种质资源调查研究

目的:在全国范围内对穿心莲种质资源进行调查、收集和整理,为穿心莲种质资源的综合评价及优良种质的筛选奠定基础。方法:查阅文献和标本资料,结合市场产销信息和网络信息等,前往产区对穿心莲种质资源情况进行实地调查。结果:目前穿心莲野生资源在我国的分布极其少见;栽培主要集中在广东、广西、福建、四川,其中广西和广东的栽培面积最大,云南仅有零星种植;同时获得了穿心莲不同居群的生态环境、生物学特性、栽培及产销和使用情况的信息。结论:应该采取积极有效的措施保护穿心莲以及其它药用植物资源的生态环境,完善种植管理体制,积极推广规范化种植栽培,加强穿心莲药用植物资源的可持续发展和开发利用。

薄层扫描法测定穿心莲中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量

采用薄层扫描法测定了 15批穿心莲商品药材中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量 ,并进行了比较。结果脱水穿心莲内酯高于穿心莲内酯的占 2 6 .7% ,穿心莲内酯高于脱水穿心莲内酯的占 5 3.3% ,两者含量差异在±10 %以内的占 2 0 .0 %。

不同产区穿心莲药材的质量评价

采用HPLC法测定了广西12个产区、不同栽培模式下种植的穿心莲药材的穿心莲(Andrographis paniculata(Burm.f)Nees)内酯含量和脱水穿心莲内酯含量。结果表明,新产区药材穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量普遍高于旧产区,新产区穿心莲药材质量优于旧产区。遮阴不利于穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的积累,大棚内套种和林下套种的穿心莲药材的有效成分含量相对较低。

不同提取浓缩干燥工艺对穿心莲内酯类成分的影响

目的探索不同的提取浓缩条件对穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的影响，确定合适的提取浓缩工艺。方法以高效液相色谱法测定不同的提取浓缩条件下穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。结果通过试验确定的最佳工艺为，提取温度70 T，提取液55 T；减压农缩，浓缩液调pH至4-5，然后70 ℃干燥。结论用确定的工艺连续3批验证，工艺稳定，能最大限度地降低穿心莲内酯的分解,提高了药品的疗效。

穿心莲药材的色谱指纹图谱

目的:建立穿心莲药材的HPLC/UV色谱指纹图谱,并对不同产地的药材进行比较。方法:应用Shimadzu VP-ODS柱,0.1%甲酸乙腈与0.2%甲酸进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长254 nm,柱温为室温。结果:得到分离度、重现性均较好的穿心莲药材HPLC/UV指纹图谱,标示了9个共有峰。应用HPLC/MS技术对其7个主要色谱峰进行了初步归属,并对不同产地药材的色谱指纹图谱进行了相似度评价。结论:穿心莲药材指纹图谱的建立,为其质量控制提供了依据。

穿心莲不同外植体离体培养的研究

[目的]探讨采用植物组织培养技术进行穿心莲快速繁殖的方法,为工厂化育苗提供依据。[方法]以穿心莲不同外植体为材料,诱导丛生芽的产生。[结果]以全子叶一子叶节为外植体时出芽率最高,为100％,半子叶一子叶节次之,出芽率为90％以上。6-苄基氨基嘌呤(BA)浓度以0.5—1.0 mg/L为适宜,有利于芽的增殖和生长。外植体苗龄对出芽无明显的影响。根的诱导以MT(Murashige and Tucker)为基本培养基,附加1 mg/L萘乙酸(NAA)或吲哚丁酸(IBA)效果较好,接种10 d,生根率高达61.9％。[结论]通过穿心莲不同外植体离体培养,建立了良好的离体繁殖体系。

等离子体对穿心莲种子萌发、幼苗和植株生长及抗逆性的影响

目的研究低电压激发的空气等离子体处理对穿心莲种子萌发、幼苗和植株生长及其抗逆性的影响。方法考察激发电压、处理时间和处理后放置天数等3个因素,以发芽势、发芽率、发芽指数为评价指标,筛选等离子体处理穿心莲种子促进种子萌发的适宜条件;采用优选的条件处理种子后进行发芽和育苗试验,测定出苗率;发芽试验7 d和育苗1个月测定植物的抗氧化酶活性及丙二醛(MDA)含量;在种植2个月时测量株高、叶面积和叶绿素含量。结果 30 V电压处理3 s后放置4~6 d对种子萌发的促进作用明显;该条件处理穿心莲种子发芽势和出苗率分别提高40.2%~54.9%、80%,促进植株后期生长,处理组株高、叶面积和叶绿素含量分别高于对照组101.02%、127.85%、14.04%;提高了幼苗期及植株生长期抗氧化酶活性,其中幼苗期过氧化氢酶(CAT)活性提高12.70%、MDA含量降低10.41%,生长期CAT和过氧化物酶(POD)分别提高33.93%、33.47%。结论等离子体处理提高了穿心莲种子活力,促进幼苗和植株生长,增强植株抗逆性。

不同生态型穿心莲的农艺性状及其叶中内酯含量的比较

【目的】分析引种不同来源穿心莲农艺性状及叶中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量,为品种选育提供依据。【方法】收集并引种不同产地穿心莲,记录种植过程中各农艺性状,于开花前采集叶,高效液相色谱(HPLC)法测定叶中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量,分析不同生态型、分蘖数、开花起始时间与穿心莲内酯的关系。【结果】不同生态型之间农艺性状及穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量不同;大叶型穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量较高;分蘖数、开花起始时间、穿心莲内酯含量三者相关分析结果显示分蘖数越多,开花起始时间越长,叶中穿心莲内酯含量越高。【结论】穿心莲优良品种应从大叶型品种中选育。

穿心莲生长过程中内酯类成分的积累动态及其相关性研究

目的建立穿心莲药材中内酯类成分的HPLC测定方法,对穿心莲生长过程中内酯成分的积累动态进行研究,探讨内酯成分的积累与其他性状之间的相关性。方法以YileteODS C18柱(5μm,4.6mm×250mm);甲醇-水(18:82)为流动相,梯度洗脱,226nm为检测波长,进行穿心莲内酯类成分的HPLC分析,以spss13.0统计软件进行相关性评价。结果按照上述方法,对其中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯进行了定量分析,以SPSS13.0统计软件分析了穿心莲内酯类成分的含量之间及其与其他性状之间的相关性。通过分析,发现不同生长时期的穿心莲内酯含量变化较大,在初期增长最快,初花期(生长150d左右)达到最高,脱水穿心莲内酯含量的变化规律不明显,积累缓慢;相关性分析表明,穿心莲内酯的含量与叶片的数量、植株高度、乙醇浸出物、叶片干重和植株干重以及生长发育时期具有显著的相关性,而脱水穿心莲内酯与这些性状之间无明显的相关性。结论穿心莲内酯类成分的HPLC分析方法分离度好、准确性高,适宜于穿心莲药材的内酯类成分的含量测定。

穿心莲药材高效液相色谱指纹图谱研究及其应用

应用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法建立穿心莲药材指纹图谱。首先以穿心莲对照药材为对象建立其乙醇提取物特征色谱图,再用5种不同来源穿心莲药材的乙醇提取物验证色谱图的指纹特性。在穿心莲药材乙醇提取物特征色谱图中有共有峰10个,各共有峰的相对保留时间与相对峰面积的相对标准偏差(RSD)均小于4%。对照药材中共有峰峰面积占总峰面积的98.5%以上。该指纹图谱用于清火栀麦胶囊中穿心莲的鉴别专属性良好。

植物穿心莲营养成分的研究

对植物穿心莲的营养成分进行了分析,结果表明,穿心莲中含有多种营养成分,丰富的矿质元素和维生素以及β-胡萝卜素。穿心莲中至少含有17种氨基酸。旨在为开发利用植物资源提供科学依据。

穿心莲药材中穿心莲内脂和脱水穿心莲内脂的提取优选

目的:比较优选穿心莲的提取工艺方法。方法:采用正交设计L9(3^4),以干膏收率、穿心莲内脂和脱水穿心莲内脂含量为考察指标,综合评价考察最佳超声提取工艺。结果:最佳提取工艺为穿心莲药材粗粉加70%的乙醇10倍量,超声提取3次,每次60分钟,低温减压干燥。结论:通过本优选方法筛选的工艺合理可行。

广西GAP基地穿心莲中脱水穿心莲内酯的含量及质量标准探讨

目的考察广西GAP基地穿心莲药材中脱水穿心莲内酯的含量,为提高其质量标准提供参考。方法采用HPLC法,色谱柱为Diamonsil-ODS C18(250 mm×4.6 mm,5μ);流动相为甲醇-水(65:35);流速为0.8 mL/min;检测波长为254 nm,柱温:25℃。结果广西GAP基地所产穿心莲药材中脱水穿心莲内酯含量相对稳定。结论实施药材GAP规范化种植是稳定中药有效成分、提高药材质量的有效途径。