知母-黄柏药对改善D-半乳糖诱导衰老小鼠认知障碍的机制研究

目的:研究知母-黄柏药对(简称“知柏”)对D-半乳糖(D-gal)诱导衰老模型小鼠认知障碍的改善作用,并探讨其作用机制。方法:将75只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组(D-gal 125 mg/kg)、吡拉西坦组(468 mg/kg)、知柏组(4.5 g/kg)和雷帕霉素哺乳靶蛋白(mTOR)抑制剂组(依维莫司,RAD001,3mg/kg),每组15只。通过D-gal建立小鼠衰老模型,并连续8周灌胃给予知柏水煎液。采用Morris水迷宫和新物体识别测试评价衰老模型小鼠的认知功能;HE染色法观察各组小鼠海马组织病理变化情况;尼氏染色和高尔基染色观察海马区神经元和突触的病理形态变化;收集海马组织以测定脑内三磷酸腺苷(ATP)含量,Western Blot法检测海马中泛素结合蛋白62(P62)、肌球蛋白样BCL2结合蛋白(Beclin-1)、突触素(Syn)、突触后密度蛋白-95(PSD-95)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、mTOR的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测海马中Syn、AMPK、mTOR基因表达水平。结果:与空白组相比,模型组小鼠在Morris水迷宫和新物体识别测试中表现出认知功能显著降低(P<0.01)。在模型组中,海马区的细胞数量减少,细胞排列松散,神经元形态不规则,尼氏小体数量明显减少,树突分支数量以及树突棘密度也显著减少。模型组小鼠海马中ATP水平、P62、Syn、PSD-95、mTOR蛋白表达显著降低(P<0.01),Beclin-1表达显著升高(P<0.01),pAMPK/AMPK蛋白含量比值和AMPK基因表达显著升高(P<0.01),Syn和mTOR基因表达显著降低(P<0.01)。与模型组相比,吡拉西坦组和知柏组小鼠的认知功能得到了显著改善,表现为Morris水迷宫测试中潜伏期的显著缩短(P<0.01),穿越平台次数和靶象限停留时间显著增加(P<0.01),以及新物体识别指数的显著升高(P<0.01),海马区树突棘密度显著增加(P<0.01),神经元损伤也在一定程度上得到了缓解。海马中ATP水平、P62、Syn、PSD-95和mTOR蛋白表达显著升高(P<0.01,P<0.05),Beclin-1蛋白表达显著降低(P<0.01),pAMPK/AMPK蛋白含量比值和AMPK基因表达显著降低(P<0.01,P<0.05),Syn、mTOR基因表达显著升高(P<0.01)。抑制剂RAD001组与模型组结果相似,经知柏治疗后上述指标均有所回调。结论:知柏可能通过激活AMPK/mTOR信号通路抑制神经元过度自噬,增强突触可塑性,改善由D-gal引起的小鼠认知障碍。

滋肾通关方中肉桂反佐配伍对黄柏-知母药对在大鼠体内活性成分组织分布的影响

目的探讨滋肾通关方中肉桂反佐配伍对黄柏-知母药对的活性成分在正常大鼠体内组织分布的影响及其作用机制。方法将56只Wistar大鼠随机分为空白组(等量生理盐水),滋肾通关方低、中、高剂量组(5,10,20 g/kg),黄柏-知母药对低、中、高剂量组(5,10,20 g/kg),各8只。分别灌胃相应药物1 h后取大鼠心、肝、脾、肺、肾组织并制备匀浆液,采用超高效液相色谱串联质谱法测定大鼠体内组织匀浆液中黄柏碱和知母皂苷AⅢ的含量。结果与黄柏-知母药对低、中、高剂量组比较,滋肾通关方低、中、高剂量组大鼠心、肝、脾、肺、肾组织匀浆液中黄柏碱和知母皂苷AⅢ的含量整体更高;滋肾通关方高剂量组大鼠肺组织匀浆液中黄柏碱和知母皂苷AⅢ的含量显著高于黄柏-知母药对高剂量组(P<0.05),滋肾通关方低剂量组大鼠心组织中黄柏碱的含量显著高于黄柏-知母药对低剂量组(P<0.05)。结论滋肾通关方中肉桂反佐配伍黄柏-知母药对的作用机制可能与改变药对中活性成分在组织中的分布有关。

基于网络药理学的黄柏-知母药对药效物质基础及作用机制研究

目的基于网络药理学探讨黄柏-知母药对的药效物质基础和作用机制。方法从中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)及化学专业数据库中寻找与这两味中药相关的所有化学成分。选择药物口服生物利用度(OB值)≥30%,类药性(DL值)≥0.18作为黄柏-知母中化合物分子的筛选条件。通过TCMSP平台寻找与候选化合物相关的潜在靶点,构建药物靶点相互作用的网络图和靶点疾病相互作用网络图。结果通过筛选,得出51个候选活性分子,相应靶点141个,相关疾病517种。度值前3的候选化合物分子分别是槲皮素(85)、四氢非洲防己碱(53)、山柰酚(53);度值前3的靶点蛋白为雄激素受体(AR,39),雌激素受体Ⅰ(ESR1,35),凝血因子Ⅱ(F2,27);度值较高的相关疾病依次是精神分裂症、糖尿病、阿尔茨海默症、非特异性癌症、哮喘、前列腺肿瘤、乳腺肿瘤、肥胖、心血管疾病等。结论分析结果初步验证了黄柏-知母药对的基本药理学作用和相关机制,为深入探讨其作用机制奠定了良好基础。

知柏地黄丸治疗肾阴亏损型精液不液化的临床观察

目的观察知柏地黄丸治疗精液不液化的临床疗效。方法采用随机、对照的研究方法,将60例精液不液化的男性患者随机分为治疗组和对照组,各30例,对照组口服维生素E软胶囊,0.1 g/次,3次/d,葡萄糖酸锌片,0.105 g/次,2次/d,治疗组口服知柏地黄丸,1次8丸,3次/d,两组各治疗60 d。比较两组治疗前后的中医证候评分、精液分析及精液液化情况。结果治疗组治疗后的前向运动精子率、精子畸形率、精浆锌及精浆果糖水平较治疗前差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后精液液化情况均有所改善,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组在缩短精液液化时间方面优于对照组;两组治疗后临床症状均有所改善,对照组有效率42.86%,治疗组有效率82.76%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组在改善临床症状方面优于对照组。结论知柏地黄丸治疗精液不液化疗效确切,值得临床推广应用。

基于网络药理学、分子对接及实验验证研究知母-黄柏药对抗炎的物质基础

本研究通过检索知母、黄柏化学成分作用靶点及炎症相关靶点,并对其进行功能及通路预测、分析,采用分子对接方法验证靶点。利用液质联用技术对分子对接中打分最高的脱水淫羊藿素进行含量测定,并通过细胞实验对知母-黄柏及脱水淫羊藿素的作用进行验证,以探究知母-黄柏药对抗炎的物质基础及作用机制。通过检索得到知母-黄柏药对的52个化合物及619个作用靶点、疾病靶点538个,交集靶点包括PRSS1、PTGS1、PPARG、NR3C1、RELA、VEGFA、CASP3、CASP8等。筛选得到核心化学成分槲皮素、脱水淫羊藿素、β-谷甾醇。KEGG结果表明知母-黄柏药对抗炎的主要通路包括TNF信号通路、AGE-RAGE信号通路、疱疹病毒感染等。分子对接结果表明核心化学成分脱水淫羊藿素与核心靶点PPARG有较高的结合活性,含量测定结果表明脱水淫羊藿素在知母-黄柏中含量为18.04%,细胞实验结果表明知母-黄柏、脱水淫羊藿素能显著抑制NO、TNF-α、IL-6的产生。因此,知母-黄柏治疗炎症的物质基础是以脱水淫羊藿素为主的化学成分,脱水淫羊藿素可能是通过TNF通路发挥抗炎作用。

知母-黄柏药对抗炎药效部位筛选及作用机制研究

目的:筛选知母-黄柏药对的抗炎药效部位,并初步对其抗炎机制进行探讨。方法:制备知母-黄柏药对水煎液,通过D101树脂进行分离,分别用水、30%、60%、95%乙醇-水进行洗脱,制备不同极性部位。采用LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型,用不同浓度的药对或各极性部位预处理细胞,MTT法检测细胞凋亡,Griess法检测NO分泌,筛选抗炎活性部位。ELISA法检测炎症因子分泌,Western blot检测炎症相关蛋白COX-2、iNOS蛋白水平及细胞核、细胞质中NF-κB p65含量。结果:知母-黄柏药对及30%醇洗部位能降低LPS诱导RAW264.7细胞分泌NO,其中30%醇洗部位作用更为明显,其他部位无显著作用。30%醇洗部位能显著降低LPS诱导的IL-1β、IL-6、TNF-α分泌及iNOS、COX-2蛋白表达,并促进p65由细胞质进入细胞核。结论:知母-黄柏药对抗炎药效部位为30%醇洗部位,该药效部位可能通过抑制NF-κB信号通路,抑制iNOS、COX-2表达及相关炎症因子的分泌,保护LPS诱导的RAW264.7细胞损伤。

知母-黄柏配伍抗炎作用机制的网络药理学研究

知母-黄柏配伍是临床上常用的“相须”配伍药对,具有抗炎作用,但其机制研究不足。本研究采用网络药理学方法研究知母-黄柏药对的抗炎机制。结果表明,知母-黄柏药对有182个潜在抗炎靶点;知母、黄柏、炎症三者共有靶点受调控分大于等于2倍中位数的靶点有29个,如PTGS2、PTGS1、RXRA、ADRB2、AR、CHRM1、ADRA1B、CHRM3、F10、NOS3等,这些靶点都与炎症的生物过程密切相关。抗炎靶点GO(gene ontology)分析涉及RNA聚合酶II启动子转录的调控、细胞增殖调节、细胞凋亡的调节、一氧化氮生物合成调节等;KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路分析涉及TNF信号通路、HIF-1信号通路、PI3K-Akt信号通路、FOXO信号通路、VEGF信号通路、T细胞受体信号通路、Toll样受体信号通路、胰岛素抵抗等。研究提示知母-黄柏“相须”配伍的分子机制是通过共同调控信号通路发挥抗炎作用,为其临床使用提供了科学依据。

知母黄柏药对治疗糖尿病骨质疏松症的药效物质和作用机制研究进展

糖尿病骨质疏松症是由长期高血糖造成的全身代谢性骨病,已成为糖尿病的主要并发症之一,具有骨量减少、骨微结构破坏、骨脆性增加等特点。知母黄柏药对是一个经典中药配伍组合,在多数抗糖尿病骨质疏松症方剂中都有体现。现代药理研究表明,药对促进骨形成和抑制骨吸收的药效作用与Nrf2、MAPK、Wnt、RANK/RANKL信号通路及细胞自噬等密切相关。药对配伍能改变药效物质的溶出度和药动学,且药效物质有协同增效的作用。本文总结了知母黄柏药对的药效物质和抗糖尿病骨质疏松症作用机制,为该药对的进一步研究和开发提供参考。

滋肾丸及组方药物抗糖尿病研究进展

滋肾丸又名通关丸,由知母、黄柏、肉桂3味中药配伍而成,被认为是清热泻火、滋阴化气的经典方剂,被用于治疗癃闭及肾痹等疾病。在近代,滋肾丸又演变为一个常用药对,用于治疗糖尿病(中医消渴病)表现为“下消”者。该文系统综述了滋肾丸的中医理论沿袭,并基于现代药理学研究,总结了既往对滋肾丸成分分析、滋肾丸改善糖尿病相关疾病和其3味组方成分的单味药与糖尿病治疗之间的相关研究,对其药物成分和3个组方药物治疗糖尿病的机制进行了总结论述。综述发现,滋肾丸可以通过抗炎、增强胰岛素敏感性、抑制肾小管上皮焦亡等机制改善糖尿病和糖尿病肾病。而滋肾丸中知母、黄柏、肉桂单味药及其含有的多种成分,包括芒果苷、知母皂苷、小檗碱、药根碱、肉桂酸、肉桂醛等,可通过多种机制如改善胰岛素靶器官的胰岛素抵抗、抑制炎症、抗氧化、调节脂代谢、刺激胰岛素分泌、调节肠道菌群等改善糖尿病、维持糖代谢稳态。该综述为后续滋肾丸干预糖尿病相关机制研究奠定理论基础和相关参考。

知母黄柏配伍对芒果苷大鼠体内药物动力学的影响

目的:考察知母配伍黄柏对知母有效成分芒果苷在大鼠体内药物动力学的影响。方法:SD大鼠随机分为4组,分别单次灌胃(ig)芒果苷单体、知母单煎液、知母-黄柏1∶3和1∶1合煎液(剂量按芒果苷计算为35 mg·kg-1),采用液相色谱-串联质谱法测定血浆中芒果苷浓度,用DAS软件根据非房室模型法计算药物动力学参数。结果:知母单煎液组芒果苷血药浓度比单体组明显升高,配伍黄柏后有所下降。大鼠单次ig芒果苷单体、知母单煎液、知母-黄柏1∶3和1∶1合煎液后的主要药动学参数:药时曲线下面积(AUC0～t)分别为0.626,122.4,94.36,53.97 mg·L-1·h-1,峰浓度(Cmax)分别为0.149,21.52,16.26,8.27 mg·L-1,达峰时间(Tmax)分别为1.0,3.0,4.0,6.0 h,半衰期t1/2分别为3.41,1.46,1.65,1.77 h。结论:知母配伍黄柏后,芒果苷在大鼠体内的吸收随黄柏配伍比例的增加而减少,吸收速度减慢,t1/2未发生明显变化。

知母黄柏药对对肥胖症大鼠模型降脂作用的实验研究

目的探讨不同剂量的知母黄柏药对(ZB)对高脂饲料诱导肥胖症大鼠的降脂作用及其可能的作用机制。方法雄性SD大鼠62只,随机分为正常组12只,造模组52只。正常组给予普通饲料喂养,造模组以高脂饲料喂养24周;造模第21周,将造模组大鼠随机分为模型组,知母黄柏药对高、中、低剂量组(3.00,1.00,0.33g·kg^(-1)·d^(-1)),盐酸吡格列酮阳性药组(5.25mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组各10只。正常组与模型组灌服等体积蒸馏水,其他实验组相应处理,持续22天,于24周末处理大鼠,取血清及肝组织,测量血清甘油三酯(TG),胆固醇(CHO)及总胆汁酸(TBA)水平变化,观察肝组织病理变化(HE染色)。结果与正常组比较,模型组大鼠血清TG、CHO含量均显著升高(P<0.01),血清TBA含量也显著升高(P<0.05);与模型组比较,知母黄柏高剂量组及知母黄柏中剂量组TG、TBA水平均显著降低(P<0.01),盐酸吡格列酮组TG水平显著降低(P<0.05),知母黄柏低剂量组和盐酸吡格列酮组TBA水平显著降低(P<0.01),组织病理显示,知母黄柏药对使各剂量组大鼠肝细胞脂肪变性、气球样变及炎症的程度明显减轻。结论知母黄柏药对不同剂量对肥胖症均具有良好的预防和治疗的作用,其机制可能与改善脂质代谢,调节胆汁酸代谢等有关。

不同中药药对调节氢化可的松药源性证候小鼠肾上腺皮质功能的研究

目的研究不同治法中药配伍调节肾上腺皮质功能的作用。方法小鼠ig给予1.65 mg/(kg·d)氢化可的松14 d诱发药源性证候,同步给予助阳散寒(附子-肉桂)、滋阴泻火(知母-黄柏)、补气生津(人参-黄芪)、补血益精(熟地-山茱萸)4种中药药对干预,检测小鼠体质量、抓力、腋温、旷场活动度、躯体不同部位红外温度等表征信息;取脾脏、胸腺称定质量并计算脏器指数;运用ELISA法检测血清皮质酮、促肾上腺皮质激素(ACTH)、肾上腺素和去甲肾上腺素含量;采用实时荧光定量PCR技术检测肾上腺类固醇合成急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)、21-羟化酶(Cyp21a1)、11β-羟化酶1(Cyp11b1)和11β-羟化酶2(Cyp11b2)、酪氨酸羟化酶(Th)、多巴胺脱羧酶(Ddc)、多巴胺β-羟化酶(Dbh)、苯乙胺-N-甲基转移酶(Pnmt)基因表达;运用Western blotting方法检测肾上腺低密度脂蛋白受体(LDLR)、B族I型清道夫受体(SR-BI)、StAR蛋白表达。结果 4种治法对氢化可的松造成的小鼠体质量下降和体温下降效果不显著,附子-肉桂组小鼠抓力显著高于模型组(P<0.05)。与模型组比较,知母-黄柏组小鼠血清皮质酮含量显著升高(P<0.01),StAR、Cyp11b1、Cyp11b2基因表达水平显著升高(P<0.05、0.01),SR-BI、StAR蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。结论滋阴泻火治法寒性药对(知母-黄柏)对小剂量氢化可的松诱发的药源性证候小鼠肾上腺皮质功能的纠正作用最佳。

地黄-知母-黄柏配伍对药源性阴虚证小鼠肾上腺皮质功能的调节作用

目的研究地黄、知母、黄柏单独及配伍使用对药源性阴虚证小鼠肾上腺皮质功能的保护作用。方法 72只雄性ICR小鼠随机分为对照组、模型组、地黄组、知母组、黄柏组、地黄-知母-黄柏组,每组12只。采用25mg/(kg·d)氢化可的松ig给予小鼠,每日1次,连续5 d,复制药源性阴虚证模型,给药组分别ig给予地黄[9.0 g/(kg·d)]、知母[(6.0 g/(kg·d)]、黄柏[(5.0g/(kg·d)]、地黄-知母-黄柏配伍[(6.7g/(kg·d)]的水煎药液,连续给药5d。透射电子显微镜检测肾上腺皮质超微结构;ELISA检测血清皮质酮;实时荧光定量PCR技术检测肾上腺类固醇激素合成酶基因(Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1)、胆固醇摄取基因(Ldlr;Scarb1,蛋白名SRB1)、胆固醇合成限速酶基因(Hmgcr)、胆固醇储存基因(Acat1、Lipe)、胆固醇流出基因(Abca1、Abcg1)、胆固醇稳态基因(Nr1h3,蛋白名LXRα)表达变化;Westernblotting检测肾上腺LDLR、SRB1、LIPE、ACAT1、CYP11A1、StAR、LXRα蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠体质量、血清皮质酮水平均显著下降(P<0.05),肾上腺束状带细胞出现典型的脂滴融合现象、线粒体萎缩;氢化可的松显著抑制肾上腺皮质激素合成过程Star、Cyp21a1、Cyp11b1、Ldlr、Scarb1、Acat1基因表达(P<0.05),以及抑制StAR、LDLR、SBR1和LXRα蛋白表达,促进Abcg1基因表达(P<0.05)。与模型组比较,各药物治疗后肾上腺束状带细胞未见明显的脂滴融合;地黄、知母、黄柏单独治疗后显著抑制皮质酮分泌(P<0.05);地黄-知母-黄柏配伍显著提升Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Lipe、Abca1、Nr1h3基因表达(P<0.05),并增强CYP11A1、StAR、LDLR、SBR1和LXRα蛋白表达。结论地黄、知母、黄柏单独给药及其配伍治疗可通过调节胆固醇稳态平衡及恢复部分受抑制的皮质激素合成酶,配伍给药更有助于改善受损伤的肾上腺皮质功能。

知母黄柏盐制前后组成滋肾丸对慢性前列腺炎及肠道菌群的对比研究

目的:对比研究知母黄柏盐制前后组成滋肾丸对慢性前列腺炎(CP)的药效,并基于16S rRNA技术探讨盐制缓和知母黄柏苦寒之性对大鼠肠道菌群的影响。方法:采用注射角叉菜胶的方法制备CP模型,模型制备成功后,将大鼠随机分为模型对照组、盐制滋肾丸5.4 g/kg、1.8 g/kg组、生品滋肾丸5.4 g/kg、1.8 g/kg组,前列康1.5 g/kg组,另设正常对照组,并按所述剂量灌胃给予相应药物或生理盐水,每日1次,连续给药21 d。于末次药后,检测相关指标。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠前列腺组织的病变程度、CD45细胞数量以及前列腺匀浆液中COX-2、LTB4和TNF-α的水平显著增加(P<0.01);与模型对照组相比,前列康1.5 g/kg组、盐制滋肾丸5.4 g/kg组、生品滋肾丸5.4 g/kg组的病变程度、CD45细胞数量显著降低(P<0.01),前列腺匀浆液中COX-2、LTB4和TNF-α水平明显降低(P<0.05或P<0.01),生品滋肾丸1.8 g/kg组的病变程度明显降低(P<0.05),盐制滋肾丸1.8 g/kg组的前列腺匀浆液中COX-2、LTB4和TNF-α水平明显降低(P<0.05);盐制滋肾丸5.4 g/kg组在降低TNF-α水平明显优于生品滋肾丸5.4 g/kg组(P<0.05)。与正常对照组相比,模型对照组中厚壁菌门和乳杆菌属相对丰度明显降低(P<0.05)。与模型对照组比较,盐制滋肾丸5.4 g/kg组以及生品滋肾丸5.4 g/kg组均表现出不同的群落组成。与生品滋肾丸5.4 g/kg组比较,盐制滋肾丸5.4 g/kg组乳杆菌属相对丰度显著增加(P<0.01)。但各滋肾丸组大鼠肠道菌群与正常对照组之间仍存在差异,给药后并没有恢复到正常状态。结论:知母黄柏盐制前后组成滋肾丸对CP都有显著的疗效,对CP大鼠肠道菌群发挥不同的调控作用,并且知母黄柏盐制后组方疗效略优。

知母-黄柏药对盐炙前后配伍对2型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响

目的:考察知母-黄柏药对盐炙前后配伍对2型糖尿病(T2DM)大鼠糖脂代谢的影响。方法:采用高脂高糖饮食联合小剂量链脲佐菌素(STZ)制备T2DM大鼠模型,模型大鼠随机分为6组,分别为模型组,二甲双胍组(200 mg·kg^(-1)),生知母-生黄柏组,盐知母-盐黄柏组,生知母-盐黄柏组,盐知母-生黄柏组(6.48 g·kg^(-1));另设同周龄喂食普通饲料大鼠为空白组。各组大鼠按剂量连续灌胃给药30 d后,检测大鼠空腹血糖(FBG),空腹血清胰岛素(FINS),糖化血清蛋白(GSP),肝糖原含量,血脂[总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),脂蛋白胆固醇(LDL-C/HDL-C)],游离脂肪酸(NEFA),脂肪细胞因子[瘦素、脂联素(ADP)],肾功能[血尿素氮(BUN)和肌酐(CRE)]等指标的变化,计算胰岛素敏感指数(ISI)与胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);同时,采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠胰腺、肝脏和肾脏组织形态学变化。结果:与模型组比较,知母-黄柏盐炙前后各配伍药对均能不同程度的降低T2DM大鼠FBG,GSP,TC,TG,LDL-C,NEFA,瘦素,BUN,CRE水平及HOMA-IR,升高FINS,HDL-C,ADP,肝糖原含量及ISI,且以盐知母-盐黄柏药对调节T2DM大鼠糖脂代谢的效果最为显著;各配伍药对均能一定程度的改善糖尿病大鼠胰腺、肝脏和肾脏组织病理学变化,其中盐知母-盐黄柏药对修复病理损伤的作用最佳。结论:知母-黄柏药对盐炙前后配伍对T2DM大鼠均有降糖调脂的作用,其中以盐知母-盐黄柏药对的降糖调脂综合药效最优。

基于16S rDNA测序技术分析药对知母-黄柏盐炙前后配伍对2型糖尿病大鼠肠道菌群的影响

目的:研究药对知母-黄柏盐炙前后配伍对2型糖尿病(T2DM)大鼠肠道菌群的影响,探讨不同配伍药对防治T2DM与肠道菌群的关系。方法:以100只SPF级雄性SD大鼠为研究对象,从中随机选取10只作为正常对照组,其余采用高脂高糖饮食联合小剂量链脲佐菌素(STZ,45 mg/kg)腹腔注射建立T2DM大鼠模型。造模成功的大鼠随机分为模型对照组、生知母-生黄柏6.48 g/kg组、盐知母-盐黄柏6.48 g/kg组、生知母-盐黄柏6.48 g/kg组、盐知母-生黄柏6.48 g/kg组。T2DM大鼠按6.48 g/kg(按生药量计)每天灌胃各配伍药对水煎液,模型对照组与正常对照组则给予等体积的生理盐水10 mL/kg。造模和给药前后定期监测大鼠空腹血糖及体质量,连续给药30 d后取大鼠粪便。基于16S rDNA高通量测序技术对各组大鼠肠道菌群进行基因测序。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠空腹血糖值(FBG)显著升高(P<0.01),体质量显著降低(P<0.01),并出现明显的肠道菌群紊乱,包括chao1、Shannon、Simpson和PD指数显著降低(P<0.01),及门到属水平下的菌群变化:拟杆菌门(Bacteroidetes)、拟杆菌纲(Bacteroidia)、芽孢杆菌纲(Bacilli)及乳酸杆菌属(Lactobacillus)丰度明显增加(P<0.01),而厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、梭菌纲(Clostridia)、Romboutsia及拟杆菌属(Bacteroides)丰度明显降低(P<0.05或P<0.01)。与模型对照组比较,"知母-黄柏"盐炙前后配伍药对能明显地降低T2DM大鼠血糖水平(P<0.01),增加体质量(P<0.05),提高肠道菌群多样性,增加梭菌纲、Romboutsia及拟杆菌属等有益菌的丰度,降低乳酸杆菌、致病菌芽孢杆菌的丰度,有效调节与改善T2DM大鼠的肠道菌群紊乱,尤以盐知母-盐黄柏6.48 g/kg组效果为最佳。结论:由"知母-黄柏"均盐炙后的配伍药对降低T2DM大鼠血糖水平及改善肠道菌群紊乱的效用更加明显,提示药对盐炙后增效机制可能与其调节肠道微生态相关。

双波长-UPLC法同时测定知柏地黄丸中6个成分的含量

目的:建立双波长-UPLC法同时测定知柏地黄丸中莫诺苷、芒果苷、马钱苷、芍药苷、小檗碱和丹皮酚6个成分含量。方法:采用C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速0.4 m L·min^(-1),检测波长236 nm(莫诺苷、芒果苷、马钱苷、芍药苷)、274 nm(小檗碱、丹皮酚),柱温40℃。结果:仅需12 min即可完成测试,莫诺苷、芒果苷、马钱苷、芍药苷、小檗碱、丹皮酚的线性范围分别为2.488~124.4、2.506~125.3、4.404~220.2、2.672~133.6、5.870~293.5和4.795~239.8 ng,r不小于0.999 8;加样回收率(n=9)分别为100.0%、101.3%、100.8%、101.6%、100.5%、98.4%;20批样品中上述成分的含量测定结果分别为0.37~1.04、0.05~0.41、0.50~0.75、0.43~0.83、0.57~1.02、0.77~1.33 mg·g^(-1)。结论:建立的方法可用于知柏地黄丸的质量控制。