强心胶囊对心力衰竭模型大鼠AngⅡAT1R的影响

目的 观察强心胶囊对心力衰竭模型大鼠血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平及心肌组织血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)的影响.方法 清洁级健康雄性SD大鼠90只,随机分为对照组(10只)和模型组(80只).模型组大鼠尾静脉注射阿霉素复制心力衰竭动物模型,模型复制成功后,随机分为模型组,西药组和强心胶囊低、中、高剂量组.对各组大鼠灌胃治疗,强心胶囊低、中、高剂量组分别给予0.66、1.32、2.64 g/kg强心胶囊溶液灌胃,西药组给予1.8 mg/kg依那普利溶液灌胃,模型组和空白组给予等容积0.9%生理盐水灌胃,每日1次,连续给药4周.实验结束后,ELISA检测大鼠血清AngⅡ,免疫组织化学法检测大鼠心肌组织中AT1R蛋白表达情况.结果 与空白组比较,模型组大鼠血清AngⅡ水平明显升高(pg/mL:301.90 ±43.51 vs.809.22±99.98,P<0.05);与模型组比较,西药组和强心胶囊中、高剂量组血清AngⅡ水平明显降低(pg/mL:809.22±99.98 vs.415.64±80.28,497.60±76.99,417.36±87.73,P<0.05);与西药组比较,强心胶囊中、高剂量组AngⅡ水平差异无统计学意义(P>0.05);与强心胶囊低剂量组比较,强心胶囊中、高剂量组血清AngⅡ水平明显降低(pg/mL:607.80±103.24 vs.497.60 ±76.99,417.36±87.73,P<0.05).与空白组比较,模型组大鼠心肌组织中AT1R蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,西药组和强心胶囊中、高剂量组大鼠心肌组织中AT1R蛋白表达明显降低(P<0.01);与西药组比较,强心胶囊中、高剂量组差异无统计学意义(P>0.05);与强心胶囊低剂量组比较,强心胶囊中、高剂量组大鼠心肌组织中AT1R蛋白表达明显减低(P<0.05).结论 心力衰竭模型大鼠血清AngⅡ水平升高,AT1R蛋白表达上调.强心胶囊能明显降低心力衰竭大鼠血清AngⅡ水平,减轻心肌中AT1R蛋白表达.强心胶囊可抑制心力衰竭大鼠血清AngⅡ水平和AT1R蛋白表达,中、高剂量作用优于低剂量,疗效存在浓度依赖性.

妊娠高血压综合征患者血管紧张素Ⅱ-1型受体基因多态性的研究

目的 探讨血管紧张素Ⅱ 1型受体 (angiotensinⅡ type 1receptor,AT 1R)基因多态性与妊娠高血压综合征 (简称妊高征 ,PIH)的相关性。方法 采用聚合酶链反应 限制性酶切片段长度多态性 (PCR RFLP)方法检测90例妊高征患者和 90例正常妊娠妇女的AT 1R基因型 ;同时以放免法测定其外周血的血管紧张素Ⅱ (angiotensinⅡ ,AngⅡ )水平。结果 两组均存在A116 6C、C5 73T的基因多态性 ,而在 87、186、10 82和 15 17核苷酸位点均未发现基因多态性。其中妊高征组C 116 6等位基因、AC/CC基因型的频率显著高于对照组 ;5 73位点T等位基因、TT基因型的频率两组无显著性差异 ;两组AngⅡ水平无显著性差异 ;Logistic回归分析显示AT 1RA1166→C变异基因是妊高征发生的独立相关变量。结论 AT 1RA1166位点变异 (A→C)与妊高征的发生相关 ,可作为妊高征发病易感性的标记。

复肾功方对慢性肾衰竭大鼠ACE-AngⅡ-AT1R及ACE2-Ang(1-7)-MASR轴“调控-拮抗”作用的影响

目的:研究复肾功方对腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭(CRF)大鼠血管紧张素转化酶-血管紧张素Ⅱ-血管紧张素Ⅱ1型受体(ACE-AngⅡ-AT1R)轴与血管紧张素转化酶2-血管紧张素(1-7)-Mas受体[ACE2-Ang(1-7)-MASR]轴的"调控-拮抗"作用,探讨其延缓CRF进展的作用机制。方法:将65只雄性SD大鼠随机分为正常组10只、造模组55只,正常组常规饲养,造模组进行为期28 d的0.25 g·kg^(-1)d-1腺嘌呤混悬液灌胃。模型建立后,将存活造模大鼠随机分为模型组,贝那普利组(0.01 g·kg^(-1)·d^(-1)),复肾功方低、中、高剂量(4,8,16 g·kg^(-1)·d^(-1))组,正常组和模型组以等体积生理盐水灌胃,持续28 d。实验结束后,测量各组大鼠尾静脉舒张压(SBP),收缩压(DBP),并收集24 h尿液以测定24 h尿蛋白(24 h U-pro);测定血清中肌酐(SCr),尿素氮(BUN)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织形态;马松(Masson)染色观察肾间质纤维化程度;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清和肾组织匀浆中AngⅡ,Ang(1-7)及血清中胱抑素C(CysC)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织中ACE,ACE2,AT1R,MASR蛋白表达水平;免疫组化标记肾组织中ACE,ACE2蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清SCr,BUN,CysC明显上升(P<0.05),血清与肾组织中的AngⅡ含量明显增加,Ang(1-7)含量明显减少(P<0.05),肾组织中ACE,AT1R蛋白表达量明显升高(P<0.05),ACE2,MASR蛋白表达量明显降低(P<0.05);与模型组、贝那普利组比较,经复肾功方干预治疗后,大鼠血清SCr,BUN,CysC含量明显下降(P<0.05),血清与肾组织中的AngⅡ含量显著减少,Ang(1-7)含量明显增加(P<0.05),肾组织中ACE,AT1R蛋白表达量显著降低,ACE2,MASR蛋白表达量明显升高(P<0.05),其中复肾功方高剂量效果最佳,复肾功方高、中、低剂量的效果呈剂量相关性。结论:复肾功方可改善腺嘌呤所致CRF大鼠肾功能和肾脏的病理学改变,其机制可能与通过抑制ACE-AngⅡ-AT1R轴,同时促进ACE2-Ang(1-7)-MASR轴来延缓CRF的进展有关。

前列环素衍生物对慢性肾衰大鼠肾脏局部RAS系统关键因子表达的影响

目的:建立慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠模型,研究前列环素(prostacyclin,PGI2)衍生物对CRF大鼠肾脏局部肾素—血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)关键因子血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、血管紧张素(1-7)[angiotensin(1-7),Ang-(1-7)]、血管紧张素转化酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)、血管紧张素1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R)表达的影响,探索PGI2衍生物对大鼠CRF的可能保护机制。方法:清洁级雄性大鼠30只,按1∶2分为假手术组及手术组。手术组行5/6肾切除术后,第5周通过生化及病理检查确定造模成功,再将手术组按1∶1随机分成模型组及治疗组。自术后第5周,治疗组予PGI2衍生物贝前列素钠片(beraprost sodium,BPS)0.6 mg/(kg·d),分2次灌胃,模型组和假手术组大鼠给予等量蒸馏水。治疗4周后检测大鼠血清肌酐、尿素氮,收集24 h尿液测24 h尿蛋白量(24 h UPE)。随后处死大鼠,HE及Masson染色观察各组大鼠肾脏病理改变,采用实时定量聚合酶链反应(q RT-PCR)、Western blot、免疫荧光检测肾组织ACE2、AT1R表达,ELISA检测肾组织中AngⅡ、Ang(1-7)浓度及血清中ACE2、AngⅡ、Ang(1-7)、AT1R的浓度变化。结果:术后5周和9周时手术组尿蛋白、血清肌酐、尿素氮均高于假手术组,差异有统计学意义。与术后5周时相比,术后9周时治疗组血清肌酐、尿素氮不同于模型组的明显下降,而仅仅是轻度下降,且高于模型组术后9周水平,蛋白尿的变化则相反。肾脏病理可见手术组出现系膜细胞增生、基质增生,肾间质炎性细胞浸润,间质纤维化,肾小球硬化等改变,而治疗组上述变化有所改善。手术组肾脏局部AngⅡ、AT1R较假手术组上调,而Ang(1-7)、ACE2则下调;与模型组相比,给予PGI2后,治疗组这4种RAS系统因子的变化趋势均减弱,差异有统计学意义,而血清中这4种RAS系统因子的变化与肾脏局部不同。结论:PGI2衍生物能减少CRF大鼠模型24 h尿蛋白定量,减轻肾脏慢性纤维化,可能延缓慢性肾脏病进展,其机制可能是通过调控CRF大鼠模型肾脏局部RAS系统关键因子AngⅡ、ACE2、Ang(1-7)、AT1R来实现的。

腺病毒介导反义血管紧张素Ⅱ1型受体cDNA对人肺动脉平滑肌细胞生物学行为的影响

目的探讨腺病毒介导的反义血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1R)cDNA转染对培养的人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)迁移、增殖和凋亡的影响。方法构建重组反义人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)和表达β半乳糖苷酶的对照腺病毒载体AdCMVLacZ,将培养的PASMC分为DMEM组、AdCMVLacZ组和AdCMVahAT1组,分别给予不同的干预因素干预PASMC,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和免疫组化及彩色图像分析法检测AT1R的表达情况,并用改良的迁移小室进行细胞迁移实验。又将培养的PASMC分为DMEM组,AngⅡ组,AdCMVLacZ+AngⅡ组和AdCMVahAT1+AngⅡ组,用流式细胞仪检测各组PASMC的增殖指数和凋亡率,绘制DNA合成直方图。结果转染AdCMVahAT1后48h的PASMC,AT1RmRNA明显低于对照组[AT1R/βactin吸光度(A)比值:AdCMVahAT1组为0.48,DMEM组为0.97,AdCMVLacZ组为0.96];AdCMVahAT1组AT1R蛋白表达水平(A值为176.39±21.63)显著低于DMEM组(A值为310.21±29.82)和AdCMVLacZ组(A值为306.45±30.09),差异均有统计学意义(P均<0.01),转染AdCMVahAT1后24h的PASMC迁移距离为(40.93±9.69)μm,显著短于DMEM组的(78.23±11.79)μm和AdCMVLacZ组的(77.80±10.66)μm,差异均有统计学意义(P均<0.01)。给予AngⅡ刺激48h,AngⅡ组PASMC的增殖指数(59.69±3.46)