血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞迁移的影响及分子机制

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移的影响及AngⅡ-1型受体(AT1R)依赖的PI3K/Akt信号通路介导的分子机制。方法:体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs,分为Control对照组、AT1R siRNA转染组、Control siRNA转染组和PI3K抑制剂(LY294002)干预组,观察AngⅡ对VSMCs迁移的影响;RT-PCR检测AT1R mRNA表达水平;Western blot检测AT1R、Akt、p-Akt、PI3K蛋白表达水平;ELISA测定PI3K的活性。结果:AngⅡ(0.1~1000 ng/mL)可明显促进VSMCs迁移(P<0.05),AngⅡ浓度为100 ng/mL时促迁移效应最显著,且对VSMCs无细胞毒性作用。AngⅡ(100 ng/mL)处理后,VSMCs中PI3K活性及Akt磷酸化水平明显增加(均P<0.05)。经AT1R siRNA转染或PI3K抑制剂干预,PI3K/Akt的活化和AngⅡ介导的VSMCs迁移被明显抑制(均P<0.05)。结论:AngⅡ呈剂量依赖性促进VSMCs迁移,AT1R依赖的PI3K/Akt信号通路参与了此过程。

复肾功方对慢性肾衰竭大鼠ACE-AngⅡ-AT1R及ACE2-Ang(1-7)-MASR轴“调控-拮抗”作用的影响

目的:研究复肾功方对腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭(CRF)大鼠血管紧张素转化酶-血管紧张素Ⅱ-血管紧张素Ⅱ1型受体(ACE-AngⅡ-AT1R)轴与血管紧张素转化酶2-血管紧张素(1-7)-Mas受体[ACE2-Ang(1-7)-MASR]轴的"调控-拮抗"作用,探讨其延缓CRF进展的作用机制。方法:将65只雄性SD大鼠随机分为正常组10只、造模组55只,正常组常规饲养,造模组进行为期28 d的0.25 g·kg^(-1)d-1腺嘌呤混悬液灌胃。模型建立后,将存活造模大鼠随机分为模型组,贝那普利组(0.01 g·kg^(-1)·d^(-1)),复肾功方低、中、高剂量(4,8,16 g·kg^(-1)·d^(-1))组,正常组和模型组以等体积生理盐水灌胃,持续28 d。实验结束后,测量各组大鼠尾静脉舒张压(SBP),收缩压(DBP),并收集24 h尿液以测定24 h尿蛋白(24 h U-pro);测定血清中肌酐(SCr),尿素氮(BUN)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织形态;马松(Masson)染色观察肾间质纤维化程度;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清和肾组织匀浆中AngⅡ,Ang(1-7)及血清中胱抑素C(CysC)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织中ACE,ACE2,AT1R,MASR蛋白表达水平;免疫组化标记肾组织中ACE,ACE2蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清SCr,BUN,CysC明显上升(P<0.05),血清与肾组织中的AngⅡ含量明显增加,Ang(1-7)含量明显减少(P<0.05),肾组织中ACE,AT1R蛋白表达量明显升高(P<0.05),ACE2,MASR蛋白表达量明显降低(P<0.05);与模型组、贝那普利组比较,经复肾功方干预治疗后,大鼠血清SCr,BUN,CysC含量明显下降(P<0.05),血清与肾组织中的AngⅡ含量显著减少,Ang(1-7)含量明显增加(P<0.05),肾组织中ACE,AT1R蛋白表达量显著降低,ACE2,MASR蛋白表达量明显升高(P<0.05),其中复肾功方高剂量效果最佳,复肾功方高、中、低剂量的效果呈剂量相关性。结论:复肾功方可改善腺嘌呤所致CRF大鼠肾功能和肾脏的病理学改变,其机制可能与通过抑制ACE-AngⅡ-AT1R轴,同时促进ACE2-Ang(1-7)-MASR轴来延缓CRF的进展有关。