泽泻汤加味方对盐敏感性HBZY21细胞中AngⅡ-NADPH-ROS信号通路的影响

目的探讨泽泻汤加味方对盐敏感性肾小球系膜细胞中AngⅡ-NADPH-ROS信号通路的作用机制。方法采用高盐和AngⅡ诱导大鼠肾小球系膜细胞的方法建立盐敏感性高血压体外细胞模型,设正常组、模型组、阳性药缬沙坦组、泽泻汤加味方(高、中、低剂量)组。CKK-8法测定细胞活性;RT-qPCR方法检测细胞中Agtr1a、Cyba、NOX4的m RNA表达水平;Western blot方法检测细胞中AT1R、P22、P47、NOX4的蛋白质表达水平;活性氧检测试剂盒检测细胞中ROS水平。结果与正常组比较,模型组细胞中Agtr1a、Cyba、NOX4的mRNA表达水平、AT1R、P22、P47、NOX4蛋白表达水平以及ROS表达水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,缬沙坦组及泽泻汤加味方中剂量组Agtr1a、Cyba、NOX4的mRNA表达水平、AT1R、P22、P47、NOX4蛋白表达水平以及ROS表达水平显著降低(P<0.05)。不同浓度泽泻汤加味方组间,中剂量组对AngⅡ-NADPH-ROS信号通路的下调作用最为明显。结论泽泻汤加味方对盐敏感性高血压肾损害的保护作用可能与抑制AngⅡ-NADPH-ROS信号通路有关。

金莲花总黄酮下调miR-215-5p抑制PI3K/AKT信号通路影响AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和迁移

目的 探讨金莲花总黄酮对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖、迁移的影响和潜在机制。方法 不同浓度(0.2、0.4、0.8 mmol/L)的金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导CFs。细胞计数试剂盒检测细胞活力确定金莲花总黄酮使用浓度。Transwell实验、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞迁移、miR-215-5p表达水平。Western印迹检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。将miR-215-5p模拟物、抑制物分别转染CFs,检测上调或下调miR-215-5p对AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移的影响。结果 金莲花总黄酮作用于AngⅡ诱导的CFs后,细胞活力、迁移能力、miR-215-5p、磷酸化(p)-PI3K和p-AKT蛋白表达显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著升高(P<0.05)。下调miR-215-5p表达后,AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力显著降低(P<0.05)。上调miR-215-5p表达能够显著降低金莲花总黄酮对AngⅡ诱导的CFs活力、迁移能力及PI3K/AKT信号通路的影响(P<0.05)。结论 金莲花总黄酮能够降低AngⅡ诱导的CFs增殖和迁移,其机制可能与下调miR-215-5p表达和抑制PI3K/AKT信号通路有关。

三七总皂苷对慢性肾衰竭大鼠AngⅡ/AT1R/ERK1/2信号通路的影响

目的研究三七总皂苷(PNS)对腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭(CRF)大鼠AngⅡ/AT1R/ERK1/2信号通路的影响,探讨其延缓慢性肾衰竭进展的作用机制。方法将65只雄性SD大鼠随机分为正常组10只、造模组55只,正常组常规饲养,造模组采用250 mg·kg^(-1)·d^(-1)腺嘌呤混悬液连续灌胃28 d复制CRF大鼠模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、贝那普利组(10 mg·kg^(-1))及PNS低、中、高(40、80、160 mg·kg^(-1))剂量组,灌胃给药,每日1次,连续28 d。检测大鼠24 h尿蛋白(24 h U-pro)及血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)的含量;采用HE染色法观察肾组织病理形态,Masson染色法观察肾间质纤维化程度;采用ELISA法检测血清及肾组织匀浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血清中胱抑素C(Cys-C)的含量;采用Western Blot法分析肾组织中血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ型(AT1R)、细胞外调节激酶(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达情况;Real-time PCR法检测肾组织中AngⅡ、AT1R、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达;免疫组化法检测肾组织中AT1R蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠的24 h U-pro、Scr、BUN、Cys-C水平显著升高(P<0.01),血清、肾组织匀浆中的AngⅡ含量明显增加(P<0.01),肾组织中的AngⅡ、AT1R、CTGF mRNA表达均明显上调(P<0.01),AT1R、p-ERK1/2蛋白表达均明显上调(P<0.01)。与模型组比较,给药组大鼠的Scr、BUN、24 h U-pro及Cys-C水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),血清、肾组织中的AngⅡ含量均明显降低(P<0.05,P<0.01),肾组织中的AngⅡ、AT1R、CTGF mRNA表达均明显下调(P<0.05,P<0.01),AT1R、p-ERK1/2蛋白表达均明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论三七总皂苷可改善CRF模型大鼠的肾功能和肾脏的病理学改变,其机制可能与调控AngⅡ/AT1R/ERK1/2信号通路有关。

淡豆豉异黄酮对增殖血管平滑肌细胞JAK2/STAT3信号转导通路的影响

目的探讨淡豆豉异黄酮对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖及Janus激酶2-细胞信号转导及转录活化因子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响。方法建立AngⅡ诱导VSMC增殖模型,MTT法检测VSMC增殖活性;RT-PCR法检测AngⅡ1型受体(angiotensin Ⅱreceptor1,AT1R)mRNA表达;Westernblot法检测JAK2/STAT3信号通路蛋白JAK2,STAT3及其磷酸化表达水平。结果100、200μg·L-1淡豆豉异黄酮可明显抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,并明显下调AT1R mRNA表达水平;200μg·L-1淡豆豉异黄酮可明显下调磷酸化JAK2、磷酸化STAT3的表达。结论淡豆豉异黄酮可抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,其机制可能与下调AT1R表达,阻断JAK2/STAT3信号通路的磷酸化有关。

integrinβ3通过Src/ClC-3Cl-通道信号通路参与脑血管重构

脑血管重构是中风重要的危险因素之一,但发生机制不清楚.近期研究显示integrinβ3及ClC-3均参与血管增殖反应.本研究采用斑片钳单通道记录,结合分子生物学及免疫组化等技术在高血压脑血管重构的动物模型上,探讨integrinβ3与脑血管重构及其相关信号通路.研究发现,在自发性高血压大鼠,及双肾双夹高血压大鼠,以及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）引起的高血压小鼠上,integrinβ3的表达与脑血管重构呈良好正相关,敲除integrinβ3可抑制AngⅡ引起的脑血管平滑肌细胞的增殖,integrinβ3与Src及ClC-3有相互作用.integrinβ3能作用于ClC-3磷酸化的关键位点,286位酪氨酸磷酸化从而介导ClC-3的活性,ClC-3敲除可阻止integrinβ3的增殖作用及AngⅡ引起脑血管重构.研究结果表明,integrinβ3是通过Src/ClC-3信号通路参与脑血管重构.

缬沙坦对压力负荷心肌肥大钙调神经磷酸酶(CaN)通路的作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体(AngⅡ,AT1及AT2)拮抗剂对致心肌肥厚的钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路的影响。方法腹主动脉缩窄法建立大鼠压力负荷模型,实验动物分为手术组(n=8);缬沙坦组(n=8):手术组+缬沙坦(1mg/kg·d);PD123319(AT2R受体拮抗剂)组(n=8):手术组+PD123319(30mg/kg·d);假手术组(n=8)。放射免疫法检测血浆、心肌AngⅡ浓度,免疫沉淀法检测心肌钙蛋白酶(ucalpain,mcalpain)及CaN蛋白表达及其磷酸化。结果缬沙坦组血浆AngⅡ浓度显著高于假手术组及PD123319组(P<0.05),缬沙坦组心肌AngⅡ浓度则低于假手术照组及PD123319组(P<0.05)。手术组ucalpain蛋白表达显著高于假手术组(P<0.01),缬沙坦组显著低于手术组及PD123319组(P<0.05),手术组与PD123319组间差异没有显著性(P>0.05)。手术组CaN磷酸化显著高于假手术组(P<0.01),缬沙坦组显著低于手术组及PD123319组(P<0.05),手术组与PD123319组间差异没有显著性(P>0.05)。结论ucalpain参与激活高压力负荷下心肌组织CaN通路,ucalpain的上调通过AT1起作用,AT1受体拮抗剂的心脏保护作用与其抑制了m-calpain有关。

G蛋白信号调节因子6对心肌细胞肥大的作用及机制研究

目的探讨G蛋白信号调节因子6(RGS6)对心肌细胞肥大的调控作用及机制。方法用AdRGS6和AdshRGS6慢病毒分别感染心肌细胞使RGS6表达上下调,AngⅡ构建肥大模型。测定各组细胞面积和ANP、BNP的表达,检测活性氧(ROS)和丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2、p38、JNK1/2)的表达。明确改变的信号通路后,用ROS抑制剂(DPI)开展逆转实验。结果 (1)与AdG FP/AngⅡ组相比,AdRGS6/AngⅡ组细胞面积、ANP和BNP明显增加,信号通路中ROS和磷酸化(p)-JNK1/2表达增加。(2)与AdshRNA/AngⅡ相比,AdshRGS6/AngⅡ组细胞面积、ANP和BNP明显降低,信号通路中ROS和p-JNK1/2表达下降。(3)逆转实验:与AdRGS6/AngⅡ组相比,DPI干预的AdRGS6/AngⅡ组心肌细胞面积明显降低,p-JNK1/2蛋白表达降低。结论 RGS6通过激活ROS/JNK1/2通路促进心肌细胞肥大。

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞迁移的影响及分子机制

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移的影响及AngⅡ-1型受体(AT1R)依赖的PI3K/Akt信号通路介导的分子机制。方法:体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs,分为Control对照组、AT1R siRNA转染组、Control siRNA转染组和PI3K抑制剂(LY294002)干预组,观察AngⅡ对VSMCs迁移的影响;RT-PCR检测AT1R mRNA表达水平;Western blot检测AT1R、Akt、p-Akt、PI3K蛋白表达水平;ELISA测定PI3K的活性。结果:AngⅡ(0.1~1000 ng/mL)可明显促进VSMCs迁移(P<0.05),AngⅡ浓度为100 ng/mL时促迁移效应最显著,且对VSMCs无细胞毒性作用。AngⅡ(100 ng/mL)处理后,VSMCs中PI3K活性及Akt磷酸化水平明显增加(均P<0.05)。经AT1R siRNA转染或PI3K抑制剂干预,PI3K/Akt的活化和AngⅡ介导的VSMCs迁移被明显抑制(均P<0.05)。结论:AngⅡ呈剂量依赖性促进VSMCs迁移,AT1R依赖的PI3K/Akt信号通路参与了此过程。

益肾化瘀方调控JAK2/STAT3/SOCS1信号通路对AngⅡ诱导HK-2细胞的保护作用

目的:研究益肾化瘀方对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导正常人近端肾小管上皮细胞(HK-2)保护作用的可能机制。方法:HK-2细胞分为正常对照组、AngⅡ组、缬沙坦含药血清组和5%、10%、20%益肾化瘀方含药血清组,分别于培养第12、24、48小时观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖情况,免疫荧光法检测纤连蛋白(FN)的表达,PCR法检测基质金属蛋白酶1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)mRNA的表达,Western blot法检测酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)、信号转导与转录活化因子3(STAT3)、细胞因子信号传导抑制因子(SOCS1)蛋白的表达。结果:与AngⅡ组同期比较,各给药组可不同程度减轻细胞纤维化,并降低FN表达水平,MMP-1、TIMP-1 mRNA表达量和JAK2、STAT3蛋白的表达(P<0.05),并升高SOCS1蛋白表达(P<0.05),以20%益肾化瘀方含药血清组和缬沙坦含药血清组最为明显。结论:益肾化瘀方可能是通过调控JAK/STAT/SOCS1信号通路,提高抗炎水平,减少细胞外基质(ECM)沉积,对HK-2细胞起到保护作用。

血管紧张素Ⅱ通过p38丝裂原蛋白激酶信号通路诱导巨噬细胞骨调素基因的上调表达

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激巨噬细胞骨调素(OPN)基因表达的模式变化,及p38丝裂原蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在AngⅡ上调表达骨调素中的作用。方法 用反转录聚合酶反应(RT-PCR)测定AngⅡ体外刺激RAW264.7细胞骨调素基因表达及p38MAPK特异抑制剂SB202190的影响;用Western印迹测定Ang Ⅱ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞p38MAPK及其转录因子-激活转录因子2(ATF2)表达的时间模式及SB202190对AngⅡ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞p38MAPK磷酸化表达的影响。结果 (1)AngⅡ(1 μmol/L)诱导RAW264.7细胞骨调素基因表达呈时间依赖性,3 h骨调素表达略有升高,6、12、24 h骨调素分别升高0.9、2.3及2.4倍(P<0.01);而24 h阴性对照无明显变化,说明骨调素的表达呈诱导分泌性。(2)AngⅡ诱导RAW264.7细胞骨调素基因表达呈剂量依赖性,AngⅡ(1 μmol/L)孵育12 h即可诱导骨调素显著表达,升高2.6倍(P<0.01)。(3)SB202190(5 μmoL/L)在AngⅡ(1 μmol/L)刺激前30 min加入培养基抑制作用最明显,共同孵育12 h,抑制率达到61.7％(P<0.01);而同时和刺激后120 min加入SB202190(5 μmol/L),抑制作用不明显,抑制率分别为20.9％和20.1％。(4)不同浓度SB202190 1、5、10 μmol/L在AngⅡ(1μmol/L)刺激前30 min加入培养基,共同孵育12 h。

马凡综合征患者胸主动脉夹层发病机制研究进展

马凡综合征(MFS)是一种常染色体遗传性结缔组织疾病,可以发生胸主动脉夹层等严重的心血管系统病变,发生胸主动脉夹层后需行胸主动脉人工血管置换术,但围手术期病死率高,深入研究MFS患者胸主动脉夹层发病机制具有重要意义。MFS患者发生胸主动脉夹层与原纤维蛋白-1(FBN1)、转化生长因子β受体1(TGFBR1)、转化生长因子β受体2(TGFBR2)基因突变及整合素α9(ITGA9)、肌动蛋白结合蛋白(SM22α)基因低表达和转化生长因子β(TGF-β)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)信号转导通路调节异常有关。FBN1基因突变是MFS(1型)患者发生胸主动脉夹层主要的机制之一,当FBN1基因突变时,蛋白质结构异常导致微纤维功能障碍,无法维持胸主动脉壁中膜弹力蛋白的稳定,胸主动脉血管壁中膜的弹性纤维断裂,胸主动脉壁中膜回弹能力下降,在受到异常的血流冲击后,出现局部血管管腔持续膨出,形成胸主动脉瘤,当胸主动脉内膜出现撕裂口,血液从撕裂口处流入内膜和中膜之间,形成胸主动脉夹层。TGFBR1和TGFBR2是TGF-β的信息传递分子,该基因突变诱导血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡,数量减少,促进MFS发生胸主动脉夹层。ITGA9基因低表达,诱导VSMC从收缩表型转化为合成表型,胶原纤维降解,导致细胞与细胞之间的黏附能力下降,也导致细胞与胞外基质之间的黏附能为下降,胸主动脉壁中膜无法抵抗异常血流的切应力。SM22α基因是一种VSMC表型标志基因,其甲基化修饰导致低表达,诱导VSMC发生表型转化,参与细胞外基质重塑,血管壁中膜弹性下降,促进胸主动脉壁中膜退行性病变。TGF-β、AngⅡ信号转导通路参与VSMC的增殖、分化、调亡生理功能的调节,也参与血管性疾病的发生;在小鼠胚胎期阻断此信号转导通路,可以引起小鼠主动脉壁中膜层弹力纤维合成受损,最终形成胸主动脉瘤/胸主动脉夹层。

他汀类药物非调脂作用及其机制(续9-2)

5改善心肌重构 他汀类药物可通过下调血管紧张素（ANG）Ⅱ受体-1，抑制ANGⅡ介导的心肌肥厚和纤维化，并能阻断包括下调RHO家族小GTP结合蛋白活性在内、并与心肌肥厚相关的多种细胞内信号通路。另外他汀类药物还能减轻心肌间质纤维化。一方面，他汀类药物直接抑制Ⅰ型、Ⅲ型胶原合成及其mRNA的表达；另一方面，他汀类药物通过调节基质金属蛋白酶及其抑制物活性来改善心肌间质的重构。

细胞外信号调节激酶1／2信号通路参与PTEN基因对心肌细胞肥大的负性调控

近来报道，染色体10上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10；PTEN）的产物PTEN对心肌肥大具有负性调节作用。目前PTEN负性调控心肌细胞肥大的机制还不明确，是否ERK活化激酶1（MEK1）／细胞外信号调节激酶1／2（ERK1／2）信号通路参与其中未见报道。本实验通过构建过度表达PTEN的原代培养心肌细胞模型，检测PTEN对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激下细胞内ERK1／2和磷酸化ERK1／2（pERK1／2）蛋白表达的影响，探讨PTEN负性调节心肌肥大的可能机制。

肾素血管紧张素系统新成员功能与疾病的研究进展

肾素血管紧张素系统(RAS)在机体可以产生一系列的级联效应,共同调控着血压和体液平衡。其主要成员血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)可在不同的组织中发挥作用,但在肾脏的功能是最主要的,新成员AngⅡ衍生肽在某些酶的催化下不仅与AT1、AT2受体结合,也能与新的受体如MAS和AT4等结合,使经典RAS的走向发生改变。对于RAS的老成员如肾素、肾素原、血管紧张素转换酶(ACE)等,以前认为它们只具有酶的活性,其实它还能作为由外而内的信号传导分子激活细胞内信号通路。而且,RAS在不同的组织中不仅具有内分泌功能,它还进行自分泌、旁分泌和细胞内分泌并调控局部AngⅡ的合成,在肾内主要以这些方式调节血压和肾脏的功能。近年发现,ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴等有很多的保护效应,这将为相关疾病的治疗和新药的开发提供新的前景。

中药逆转高血压左心室肥厚作用机制的实验研究进展

左心室肥厚是由于左室面积增加而不是心肌细胞增多所致的心脏扩大和左室重量增加。其病理学改变主要表现为心肌细胞肥大和心肌间质纤维化。左心室肥厚是独立于高血压的危险因素,因此研究中药对逆转左心室肥厚的作用机制,对研发新药,改善高血压病患者的预后有着重要的意义。

活血潜阳祛痰方对肥胖高血压大鼠左室重构的影响

目的:观察活血潜阳祛痰方对肥胖高血压大鼠左室重构的干预作用,并探讨其作用机制。方法:以5周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)为对象,随机选取SHR 9只作为普食对照组(SHR组)予普通饮食,其余54只予高脂饮食共10周进行肥胖高血压大鼠模型造模并随机分为模型组、中药组和西药组;以周龄和性别相匹配的正常WKY大鼠为WKY对照组。中药组予活血潜阳祛痰方42 g·kg^(-1)·d^(-1)药液灌胃,西药组予缬沙坦30 mg·kg^(-1)·d^(-1)配液灌胃,WKY对照组、SHR组和模型组均用等容量饮用水灌胃,均灌胃2次/d,持续8周。观察体质量、血压、糖脂代谢指标、心肌血管紧张素(Ang)Ⅱ水平,观察大鼠左室重构、心肌结构和细胞凋亡情况;分别采用RTPCR和Western blot检测内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein,GRP78)、Caspase-12的mRNA和蛋白表达。结果:(1)与模型组比较,中药组和西药组大鼠血压(P<0.05,P<0.01)、空腹血糖(FPG)(P<0.01)、三酰甘油(TC)(P<0.05)、低密度脂蛋白(LDL-C)(P<0.01)水平均显著降低;(2)中药组大鼠体质量(P<0.05)、Lee’s指数(P<0.05)及胰岛素抵抗指数(HOME-IR)(P<0.01)均显著低于模型组;(3)中药组心脏质量指数(P<0.01)、左室质量指数(LVMI)(P<0.05)、心肌细胞凋亡率(P<0.05)均明显低于模型组。(4)SHR组心肌AngⅡ水平显著高于WKY对照组(P<0.01),模型组AngⅡ显著高于SHR组(P<0.01);中药组心肌AngⅡ水平明显低于模型组(P<0.01)。(5)模型组心肌GRP78、Caspase-12基因的mRNA和蛋白表达水平显著高于SHR组(P<0.01),中药组GRP78、Caspase-12基因的mRNA和蛋白表达水平均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。结论:活血潜阳祛痰方可显著改善肥胖高血压大鼠肥胖状态、血压、糖脂代谢及左室重构,可能与其调控心肌局部AngⅡ-GRP78-Caspase-12凋亡信号通路的作用相关。