AngⅡ诱导的心肌肥大中c-fos,c-jun mRNA表达变化及丹参酮Ⅱ_A的影响

目的:在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞c-fos,c-junmRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响。方法:取12只1 d龄新生Wistar乳鼠,进行心肌细胞培养,分为正常对照组,AngⅡ(10-6mol.L-1)组,AngⅡ(10-6mol.L-1)+丹参酮ⅡA(10-8g.L-1)组,AngⅡ(10-6mol.L-1)+缬沙坦(10-6mol.L-1)组,丹参酮ⅡA(10-8g.L-1)组,缬沙坦(10-6mol.L-1)组。相差显微镜测量心肌细胞大小,[3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率;RT-PCR检测心肌细胞c-fos,c-jun mRNA的表达。结果:在培养液中加入AngⅡ作用30 min后,心肌细胞c-fos,c-jun mRNA的表达显著增强(P<0.01);AngⅡ作用24 h后,AngⅡ组心肌细胞蛋白质合成速率较对照组明显增加(P<0.01);AngⅡ持续作用7 d后,AngⅡ组心肌细胞直径较对照组显著增大(P<0.05)。采用丹参酮ⅡA或缬沙坦干预,二者可抑制AngⅡ诱导的c-fos,c-jun mRNA的表达增强(P<0.01)、心肌细胞蛋白质合成速率的增加(P<0.01)及心肌细胞直径增大(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA可通过抑制AngⅡ诱导的心肌细胞c-fos,c-jun的表达增强,减轻心肌肥大。

丹参酮ⅡA磺酸钠对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大反应中磷酸化细胞外信号调节激酶1／2的作用

目的从细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)激活角度研究丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinoneⅡ Asulfonate,STS)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌肥大反应中的作用。方法培养新生大鼠心肌细胞,考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量、[3H]-亮氨酸参入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标;用免疫荧光标记法和Western blot测定磷酸化ERK1/2蛋白(p-ERK1/2)表达。结果(1)AngⅡ(1μmol·L-1)处理24h,心肌细胞[3H]-亮氨酸参入率、蛋白含量明显增加,STS能明显抑制AngⅡ介导心肌细胞[3H]-亮氨酸参入率、蛋白含量的增加;(2)AngⅡ刺激心肌细胞可见胞核内出现磷酸化ERK1/2荧光染色,丹参酮ⅡA可阻断AngⅡ引起的ERK1/2活化、入核过程;(3)用AngⅡ(1μmol·L-1)处理心肌细胞5min,磷酸化ERK1/2蛋白(p-ERK1/2)表达即开始增加,10min左右时最明显。以AngⅡ(1μmol·L-1)处理心肌细胞10min,磷酸化ERK1/2蛋白(p-ERK1/2)表达为标准,预先以STS(2,10,50μmol·L-1)处理心肌细胞30min,发现STS可明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达;(4)预先以不同浓度STS处理心肌细胞30min,发现STS对AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达的抑制作用存在剂量依赖性。结论STS可以抑制AngⅡ诱导的心肌肥厚,其机制与抑制磷酸化ERK1/2表达有关。

丹参酮ⅡA磺酸钠对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大反应中磷酸化MAPK的作用

目的 主要从丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激活及失活的角度研究丹参酮ⅡA磺酸钠（STS）对血管紧张肽Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌肥大反应中的作用。方法 培养新生大鼠心肌细胞，考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量、[^3H]-亮氨酸掺入法测定蛋白合成速率作为心肌肥大指标；用Western blot测定磷酸化MAPK蛋白（p44MAPK、p42MAPK）表达。结果 ①AngⅡ（1μmol／L）处理24h，心肌细胞[^3H]-亮氨酸掺入率、蛋白含量明显增加，STS能明显抑制AngⅡ介导心肌细胞[^3H]-亮氨酸掺入率、蛋白含量的增加。②用AngⅡ（1μmol／L）处理心肌细胞5min，磷酸化MAPK蛋白（p44MAPK、p42MAPK）表达即开始增加，10min左右时最明显。以AngⅡ（1μmol／L）处理心肌细胞10min，磷酸化MAPK蛋白（p44MAPK、p42MAPK）表达为标准，预先以STS（2、10、50μmol／L）处理心肌细胞30min。发现STS可明显抑制Angi诱导的心肌细胞磷酸化MAPK蛋白表达。③预先以不同浓度STS处理心肌细胞30min，发现STS对AngⅡ诱导的心肌细胞磷酸化MAPK蛋白表达的抑制作用存在剂量依赖性。结论 STS可以抑制AngⅡ诱导的心肌肥厚，其机制与抑制磷酸化MAPK表达有关。

自噬在血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大中的作用

【目的】探讨自噬在血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌细胞肥大中的作用。【方法】原代培养的乳鼠心肌细胞,采用AngⅡ干预建立心肌肥大的模型;在光学显微镜下观察心肌细胞的形态,采用Real time PCR技术检测心肌细胞肥大标志物心房利钠多肽(ANP)的表达、Western blot法检测LC3蛋白的表达。【结果】AngⅡ可抑制自噬相关基因LC3蛋白的表达。自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3MA)会促进AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。【结论】AngⅡ可能通过抑制自噬来诱导心肌细胞肥大。

蓬乱蛋白2对血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的影响

目的:探讨蓬乱蛋白2(Dvl2)对血管紧张素II诱导心肌细胞肥大的影响。方法:用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理心肌细胞48h,Western Blot检测Dvl2的表达。用重组腺病毒Ad-GFP和Ad-Dvl2分别感染大鼠原代心肌细胞24h后用Ang II处理48h,利用免疫荧光技术检测心肌细胞面积,免疫印迹实验检测心肌肥大标志物-MHC和相关信号通路。结果:AngⅡ处理引起Dvl2表达增加;与对照组相比,Ad-Dvl2感染显著增强了AngⅡ诱导的心肌细胞肥大和-MHC表达增加,而Dvl2过表达引起蛋白激酶B(AKT)磷酸化的增加。结论:Dvl2能促进AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与激活AKT信号通路相关。

miR-218对血管紧张素II诱导的心肌细胞肥大的影响

探讨miR-218对血管紧张素II(Ang II)诱导的心肌细胞肥大的影响。方法:Ang II处理心肌细胞48h,qPCR检测心房利钠肽(ANF)、miR-218和心肌锚定重复蛋白(Ankrd1)的表达。分别用mimic miR-218和inhibitor miR-218转染原代心肌细胞24h,随后用Ang II处理48h,利用免疫荧光染色技术检测心肌细胞面积。利用双荧光素酶报告基因技术检测miR-218对Ankrd1 3’UTR的调控,Western Blot检测Ankrd1的表达。结果:Ang II处理引起心肌细胞中miR-218表达下调;与对照组相比,mimic miR-218显著抑制了Ang II诱导的心肌细胞肥大,而inhibitor miR-218促进了Ang II诱导的心肌细胞肥大。Ang II处理引起Ankrd1表达增加,miR-218能靶向抑制Ankrd1的表达。结论:miR-218能抑制Ang II诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与靶向抑制Ankrd1的表达相关。