Study on Ultrasonic Extraction of Total Flavonoids from Angelica keiskei Koidzumi

[Objective] This study aimed to optimize the ultrasonic extraction process of total flavonoids from Angelica keiskei Koidzumi. [Method] Using the yield of total flavonoids as an indicator, the ultrasonic extraction process of total flavonoids from A. keiskei was optimized by orthogonal experimental design. [ Result ] Among four factors in orthogonal experimental design, extraction time exhibited the most significant effect on the extraction result; ethanol concentration exhib- ited a significant effect on the extraction result; ultrasonic power and solid-to-liquid ratio had no significant effect. The optimal conditions for ultrasonic extraction of total flavonoids from A. keiskei were extraction time of 25 min, ethanol concentration of 80%, ultrasonic power of 60 W, solid-to-liquid ratio of 1：20 （g/ml）, under which the yield of total flavonoids reached 1.56%. [ Conclusion] This study provides the basis for further development and utilization of total flavonoids from A. keiskei.

明日叶叶水溶性总黄酮提纯工艺

比较水浴加热、直接加热煮沸、微波辅助浸提3种水浸提取方法,确定明日叶叶总黄酮提取率最高的水浸提工艺条件,得到粗提液,并进一步考察大孔树脂类型、粗提液上样量、乙醇洗脱液pH值、乙醇体积分数、洗脱液用量等条件对水溶性总黄酮提纯结果的影响。结果表明:水浴加热浸提的提取率最高,其最佳浸提条件为水浴温度95℃,加热时间10min。HP-20大孔树脂对明日叶叶中总黄酮具有较好吸附与解吸性能,最佳提纯工艺条件为质量浓度为2.445mg/mL的粗提液上样量为40mL,洗脱液乙醇体积分数70%、pH2、洗脱用量为8BV。提纯产物总黄酮含量比明日叶叶干粉的含量提高了约6.8倍。

明日叶中总黄酮的微波辅助提取工艺和检测方法研究

对明日叶中总黄酮的提取工艺和检测方法进行了研究。采用微波法,利用单因素和正交实验对明日叶中总黄酮的提取工艺进行了优化,分别通过AlCl3和A(lNO3)3显色法,建立了明日叶中总黄酮的分光光度检测方法。结果表明,AlCl3显色法的最佳提取条件为:乙醇浓度85%、提取3次、料液比1:25(g/mL)、微波功率600W、提取80s,样品中总黄酮的得率为1.48%;A(lNO3)3显色法的最佳提取条件为:乙醇浓度40%、提取3次、料液比1:25(g/mL)、微波功率700W、提取80s,样品中总黄酮的得率为1.67%。另外,对两种显色方法的显色稳定性进行了初步探讨。

明日叶挥发油化学成分的GC-MS分析

[目的]分析明日叶挥发油化学成分。[方法]采用水蒸气蒸馏法提取明日叶挥发油,通过气相色谱-质谱-计算机联用技术对其化学成分进行分析鉴定,用气相色谱面积归一法测定各成分的相对百分含量。[结果]从明日叶挥发油中分离出120个成分,鉴定出其中28个化合物,占总峰面积的50.36%。[结论]该研究可为进一步开发利用明日叶提供科学依据。

明日叶保健茶的毒性及致突变和致畸性

目的 :评估明日叶保健茶的毒性及致突变性和致畸性。方法 :采用急性毒性试验、 Ames试验、微核试验、小鼠精子畸形试验、骨髓细胞染色体畸变试验、 3 0 d喂养试验和传统致畸试验等。结果 :急性毒性试验为实际无毒级 ;致突变试验为阴性 ;在 3 0 d喂养试验中 ,未见引起大鼠的整体健康状况、生理生化功能和器官组织形态学各重要指标的异常变化 ;在传统致畸试验中未见发育毒性。结论 :“明日叶保健茶”在推荐剂量 [3 g/ (d·人 ) ]下 。

明日叶中5种成分同时测定和挥发性成分分析

目的通过HPLC法测定明日叶Angelica keiskei Koidzumi中异补骨脂二氢黄酮、异补骨脂查尔酮、异虎耳草素、北美芹素和花椒毒素的含有量,固相微萃取（SPME）-GC-MS法分析其中挥发性成分。方法该植物甲醇提取液的HPLC分析采用GL Sciences色谱柱（5μm,4.6 mm×250 mm）;流动相乙腈-水,梯度洗脱;检测波长314 nm;体积流量1.0 m L/min;柱温28℃。GC-MS分析采用Agilent 19091S-433：93.92873 HP-5MS 5%Phenyl Methyl silox-60℃-325℃（325℃）色谱柱（30 m×250μm×0.25μm）;柱温50℃;进样口温度250℃;载气体积流量1.0 m L/min;扫描范围15~500 amu。结果 5种成分在各自线性范围内线性关系良好（r≥0.997 2）,平均加样回收率为97.78%~102.25%（RSD〈2.25%）。明日叶中有11种挥发性成分,9种是萜烯类,总相对含有量达96.45%。结论该方法准确可靠,可为明日叶的质量控制提供参考。

明日叶查尔酮对小鼠H22肝癌MVD水平的影响

目的:研究明日叶查尔酮(AC)对小鼠H22肝癌微血管密度(MVD)表达水平和癌细胞增殖活性的影响。方法:将50只皮下接种肝癌H22细胞株的小鼠随机分为5组,每组10只。AC低、高剂量组分别每日经口灌胃5mg/kg和50mg/kg AC,恩度(Endostar)组(阳性对照组)给予等量生理盐水灌胃并腹腔注射4mg/kg恩度,空白对照组及肿瘤对照组则分别给予等量的生理盐水灌胃及腹腔注射,连续注射10d后处死小鼠,测定瘤重、体重和抑瘤率,取瘤组织,用免疫组化法检测各组小鼠肝癌组织MVD的表达水平,并用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组小鼠肝癌细胞增殖活性。结果:高剂量AC组与肿瘤对照组肝癌组织MVD计数分别为(4.5±1.286)与(9.9±1.175),差异有统计学意义(P<0.05);高剂量AC组与肿瘤对照组的肝癌细胞增殖活性吸光度分别为(0.506±0.032)和(1.330±0.089),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AC可降低小鼠H22肝癌MVD表达水平及肿瘤细胞增殖活性水平,对小鼠H22肝癌组织新血管生成具有明显的抑制作用。

明日叶的组织培养技术研究

[目的]研究明日叶的组织培养技术。[方法]以明日叶种子为材料进行无菌萌发,筛选增殖培养和生根培养时的最佳激素配比。[结果]明日叶的最佳增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.001 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA,试管苗增殖系数为4.45;最佳生根培养基为1/2MS+1.0 mg/L IBA,生根率可达90%。[结论]为明日叶的工业扩大化生产提供科学依据。

明月草组培快繁技术体系的建立

以明月草(Angelica keiskei Koidzumi)茎段为外植体进行组培快繁技术研究,通过设置不同处理探究了外植体消毒、腋芽诱导、增殖培养、生根培养、炼苗移栽5个环节最佳处理方式和培养基配方,建立了明月草的组培快繁技术体系。结果表明,使用0.1%HgCl2消毒10 min可以达到理想消毒效果,污染率控制在13.3%,萌芽率可达到83.3%,有效芽率达到96.0%。明月草芽诱导最优培养基为MS+0.80 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA,培养4~6 d芽开始萌动;最适宜用做明月草继代增殖的培养基为MS+0.80 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA+0.20 mg/L AD,增殖系数为3.39;单一使用IBA或NAA的生根效果优于二者组合,当NAA浓度为0.40 mg/L时,培养10 d,生根率可达到100%,且生根数及平均根长均优于其他处理组合;选用黄心土作为移栽基质,移栽根系完整的明月草组培苗,20 d后调查成活率可达98%以上。

明日叶中总黄酮的超声提取工艺优化

[目的]研究明日叶总黄酮超声提取的最佳工艺条件。[方法]以总黄酮的提取率为指标,采用单因素和正交试验优选超声波提取法对明日叶总黄酮的提取工艺条件。[结果]明日叶总黄酮最佳提取工艺条件为乙醇浓度30%(v/v)、料液比1∶15、提取时间40 min、提取温度50℃、提取次数4次。[结论]可在较低温度下用超声提取明日叶总黄酮。

模糊评判响应面法优化无糖明日叶曲奇配方

为了研发一款低糖且营养美味的功能性无糖曲奇饼干,应用模糊评判法对感官进行评定,在单因素实验的基础上,以模糊感官评分结果为响应面值,通过Box-Behnken实验设计考察了明日叶粉添加量、黄油添加量、麦芽糖醇添加量、蛋液添加量间交互作用对无糖明日叶曲奇的感官评分的影响。结果表明,无糖明日叶曲奇的最佳配方为:以低筋小麦粉100.0 g为计,明日叶粉2.0 g,黄油71.3 g,麦芽糖醇38.5 g,蛋液13.2 g,此时感官评分为(81.92±2.14)分,与模型预测值(81.61±2.35)分相符,由该方法制备的无糖明日叶曲奇具有优异的感官和质构品质,说明经模糊评判-响应面优化的产品配方对实际生产具有较好的指导意义。

干燥方式对明月草叶片中黄酮类化合物抗氧化活性的影响

以明月草叶片为原料,对叶片进行自然晾干、热风干燥及真空冷冻干燥三种干燥处理,以乙醇为浸提试剂,采用溶剂浸提法对明月草中的黄酮类化合物进行提取,比较三种干燥处理方式对提取物抗氧化性的影响。结果表明:在80℃下,65%的乙醇按1:25的料液比浸提3h时,黄酮类化合物的提取率可达1.73%;随着不同干燥方式明月草叶片中提取黄酮类化合物浓度的提高,其还原力及清除DPPH自由基和超氧阴离子的能力也逐步提升;浓度在2mg/mL时,清除DPPH自由基的能力,真空冷冻干燥样品达到最高92%;浓度在10mg/mL时,清除超氧阴离子的能力,真空冷冻干燥样品达到最高66%;浓度在0.5mg/mL时,还原力真空冷冻干燥样品达到最高0.970。因此,真空冷冻干燥法是保持明月草叶片黄酮抗氧化活性的较好方式。

明日叶中查耳酮的分离纯化工艺研究

目的:建立明日叶中查耳酮分离纯化的最佳工艺。方法:采用L9(34)正交方法设计大孔树脂提取纯化工艺,以4-羟基德里辛含量为评价指标,考察大孔吸附树脂类型、洗脱剂种类、树脂粒径及流速对结果的影响。结果:采用AB-8型号大孔树脂,蒸馏水为洗脱剂,大孔树脂粒径为30目,洗脱流速为15ml/min,即为所要选用的最佳工艺。结论:该工艺为明日叶中查耳酮的最佳提取工艺。

明日叶中互变异构吡喃香豆素的结构鉴定及抗神经炎活性研究

目的从明日叶中分离得到两个吡喃香豆素(1,2),表征其互变异构现象,确定其绝对构型,检测其抗神经炎活性。方法应用高效液相色谱(HPLC)和核磁共振(NMR)分析描述1和2之间的互变异构现象;通过乙酰化、NMR和电子圆二色谱(ECD)实验的综合分析,确定1和2的平面结构与绝对构型,并结合能量计算推断互变异构转化机制;噻唑蓝(MTT)法检测化合物对BV2细胞活力影响,ELISA法检测化合物对LPS诱导的BV2细胞的炎症因子抑制作用。结果化合物1和2分别鉴定为laserpitin及isolaserpitin,绝对构型均为3′R和4′R,其互变异构现象涉及分子内羟基和当归酰基的酯交换反应。1和2混合物及其衍生物均能抑制LPS诱导的BV2细胞白细胞介素6(IL-6)的释放。结论综合应用乙酰化、NMR和ECD等方法为同类化合物结构解析提供参考,吡喃香豆素可能是明日叶抗炎活性的物质基础。

明日叶叶片的丛生芽诱导和植株高频再生

明日叶(Angelica keiskei Koidzumi)是伞形花科当归属植物,具有很高的药用价值。为解决生产上短时间快速获得大量明日叶种苗的相关技术,以明日叶叶片为外植体进行组织培养实验,直接诱导产生丛生芽并且得到再生植株,建立了明日叶叶片离体再生快速繁殖体系。结果表明,诱导丛生芽分化的适培养基是MS+1.0 mg·L-1 2,4-D+0.2 mg·L-1 6-BA,诱导率可高达100%;诱导生根的适培养基是MS+1.0 mg·L-1 NAA,诱导率可达90%,将生长良好的再生植株进行移栽,存活率可达86%。

明日叶中总黄酮的提取工艺优化和检测方法的对比研究

采用单因素和正交试验对明日叶中总黄酮的提取工艺进行优化,并对检测方法进行对比研究。硝酸铝显色法确定最佳提取工艺:60%乙醇回流,30倍溶剂用量,提取100 min,提取2次,总黄酮提取率为1.946%;氯化铝显色法确定最佳提取工艺:80%乙醇回流,40倍溶剂用量,提取为100 min,提取1次,总黄酮提取率为1.811%。所选取的提取工艺提取效率高、稳定,为明日叶的综合利用提供了依据。